[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： <El6?ml@  
tpi63<N  
N5[fwz w  
52#@.Qa  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） hU `H\LE  
hQgi--Msw'  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 Jj'~\j  
c>r0N[  
流  速：1.0 mL/min 0BIH.ZV#  
]#[R^t  
波  长：242 nm ?!-2G  
-`
B|$ W  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） V4Ql6vg_f  
KaHjL&!  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 ^'C1VQ%  
$q{-)=-BXQ  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） pVPCxP  
do%6P^qA  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A ED @9,W0  
4 lE j/#}  
柱  温：30℃ * K'(t  
DnP>ed"M!  
ub6=
^`>h  
cWP34;NNM  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） ,[%KSyH  
NSUw7hnWvz  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 mTT1,|  
ds,NNN<HW  
附件二 (4LXoNT  
>fJY
 
1~Zmc1]  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Jw)Uk< \  
HKbyi~8N=  
色谱条件： I !=ew |  
^pruQp1X  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm E1IT>_  
n@xC?D:t*  
进样口：250℃，不分流进样 A?i ~*#wE  
"159Q  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） >G7dw1;  
C.qNBl*  
进样量：1μL 4Z8FLA+T,  
b y07l5
 
流速：1 mL/min Wh).%K(t  
K0;caqE^  
质谱条件： mIW8K ):  
To/6=$wto  
接口温度：280℃ ,
9,cN-/a  
r+=%Ag  
电离方式：EI {Jbouj?V!  
#,[z}fq  
电离能量：70eV 8I8{xt4   
|@W|
nbAfX  
溶剂延迟：7min `y
3*\l  
LbkQuq/d  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表  sWyx_  
_U|rTil  

/Qu<>#[?   序号 lT?Vt`==~M	!k<k]^Z\   保留时间/min e%km}m A	CZ!gu Y=   中文名称 ^S`N\X	z57q|   英文缩写 >guX,hx^	>}bkX 6c5   SIM离子 HJ!!"
cS BS38>   1 |2GrOM&S	u/CR7Y   8.265 k~2FlRoC^	tR.>d   邻苯二甲酸二甲酯 n p\ *r|U	A9WOu*G1O   DMP MH]?:]K9V	DG=_E\"#   163、77 3W[Ps?G
%+dRjG~TB   2 Kww+lgzS	U9Lo0K   9.135 R?] S<Z	ZO\bCrk   邻苯二甲酸二乙酯 ^56#{~%^?	VKr oikz@]   DEP ]r1Lr{7^S	:5zO !~\   149、177 "oCXG`.k&
4hV~ ir   3 g@S?5S.Av	j`"cU$NRM   10.888 4Bq 4d.0	o n?8l?iQ   邻苯二甲酸二异丁酯 x W'(]Z7_	2a:JtJLl   DIBP ^1+&)6s7V	2aO.t   149、223 (cqVCys
k-\RdX)E   4 ].<B:]:,	] 'ybu&22   11.637 @s;qmBX4	m`Ver:{   邻苯二甲酸二丁酯 i>68gfx	&I$MV5)u   DBP >FabmIcC	<r'l5|er   149、223 i7/I8y
D-tm'APq   5 KK%R3{	]%L?b-e   11.979 r{T}pc>^	?2#MU   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 0//?,'.	eiV[y^?   DMEP `"/s,"c:D	n5~7x    59、149、193 #ONad0T;
b!7*bFTt   6 1@)kNg)*$	msyC."j0jU   12.72 N j<}t/e	bZE ;}d   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 *,:> EcDr	&G)I|mv   BMPP GxL;@%B	v\3:R,|'   149、251 R pAqnDX)
UbD 1h_b   7 7<<-\7`	hGPo{>xR   13.044 6QwVgEnSf	/!l$Y?   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 (h}5*u%h	b'!t\m   DEEP CEwMPPYnD	o7/S'Haxc]   45、72 B}PT-S1l
66P'87G   8 G E=J Y	KW* 2'C&   13.41 5s=ZA*(sY	6zo'w Wc3   邻苯二甲酸二戊酯 ZA u=m	YP^=b}   DPP J**-q(>	y$ L@!r/s   149、237 ~AVn$];{
Lro[ |A   9 ;Av=/hU	(i1JDe   15.552 TY."?` [FK	y*F !k{P   邻苯二甲酸二己酯 Wq5}SM	{\1:2UKkr   DHXP f`$F^=	@ 0'j;")XV   104、149、76 ^n?`l ^9c$
:*=fGwIWS   10 ?XlPKY	3 T1,:r   15.694 e9=UTn{!	 [HEljEv   邻苯二甲酸丁基苄基酯 4St-Q]Y _	/fSsh;F   BBP T4nWK!}z	'5m4kDs   149、91  :I{9k~
] $,3vYBf   11 Dv*d$	;:,U]@   17.153 OQIr"	iR!]&Oh   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 t#VX#dJ	` TYC]9   DBEP O#k eoC4	~ .4y* &   149、223 \:g\?[
(< >Lfn   12 5UJ ?1"J	Uq @].3nf   17.81 tDavp:M1v	VC0T qk   邻苯二甲酸二环己酯 q{_f"	5JEOLPS    DCHP ?0M$p	OSfT\8YA   149、167 Zoc4@% n
nW^h +   13 )hl7)~S<	0%< hj   18.056 k\qFWFR	&tvtL   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 1x=x,lcL	}:{9!RMO   DEHP :hs~;vn)	j'U1lEZm2   149、167 Y%kOq`uT=n
vG'#5%,|   14 ,dT mI{@O	MTCfs~}m   20.444 [.fh2XrVM	RG'76?z   邻苯二甲酸二正辛酯 6 h#U,G	I/tMFg   DNOP :K]7(y7>	pg4pfi^__V   149、279 ebI2gEu;a
O6G'!h\F   15 B F<u3p??	B??07j   22.98 lUs$I{2_	s/IsrcfM   邻苯二甲酸二壬酯  5 0N4J	2r!ltG3}   DNP Z*co\ pW	|g3:+&   57、149、71 <(lA C H

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 fRNj *bIV  
or-k~1D  
附件三 SU%O\4Ty  
-zECxHjx  
u^Cl s!C  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 _JC*4  
C b'|  
-#%M,Qb  
,DEq"VW_  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 #8jiz+1 _  
lLQcy i0  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 2dz)rjdO,  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% EG4~[5[YgI  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31%  +At[[  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% G;gsDn1t  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% 5CnNp?.t^  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% @ws&W=NQ  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% a[;
L+  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% #Q2s3"X[  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% gwNZ`_Q  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% &SIf|IX.  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% ")ys!V9  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% tF[)Y#  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% i^WY/ OhL  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% h_-4Q"fb(  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% HH6n3c!:mm  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% ;Q3[} ]su  
.{eMN[ n@  
0fj C>AS  
   0.m-}  
Sa)sDf1+`  
U=%(kOx  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 }72\A
w5  
/7#MJH5b6  
;Ows8  
$+2QbEk&-  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 PcbhylKd  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% ;4dFL\KU  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% RU#}!Kq  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% l(x0d  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% Rkg)yme!N  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% ;jx[ +  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% 7L:Eg  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% D HQxu4  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% iM7^  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% |d~'X%b%  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% xC5Pv">  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% k8J zey]X  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% RIUJX{?  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% n>,GmCo  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% #mJRL[V5^  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% sk07|9nU  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 )L:zr#  
Jb QK$[z"  
+OE!Uqnt  
h'y%TOob  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 ngo> ^9/8  
@+gr/Pul
^  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 xb,XI/
 
t6
DSZ^Zq  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 TN(Vzs%  
q/#e6;x  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Jo5Bmh0  
\^!;r9z=A  
V8^la'_j  
@Zt~b'n  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 PG&t~4QM`  
|oY{TQ<<d  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， !HY ^QK  
 %?ElC  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 #Rw!a#CX.  
Cj-
s  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 J @Hg7Faz  
1m*)MZ)  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 )~ (*q  
scg&"s  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 CX|W
$b)%  
Sdu\4;(  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 orGMzC2  
>mb}~wx`  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 w!F>fcm  

7- B.<$uC  
O[@!1SKT0  
YagfCi ?  
rTPgHK]?l  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： 5{ c;I<0  
> I2rj2M#  
wi(Y=?=  
HiCh:IP7>/  
1、样品提取方法： d?,'$$aB  
~#_~DqbMZ5  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 wk(25(1q  
>O'\ jp}$l  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 %iyc1]w{  
x|H`%Z  
B8&q$QV  
Fmk:[hMw  
2、固相萃取方法： 5ggyk0  
1w,_D.1'  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： Xp<q`w0I,  
Cxf K(F  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； )aS:h}zn  
i~@gI5[k+  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； Cbbdq%ySI  
iZGbNN  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； qv!(In>u  
LdUz;sb  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 xIdb9hm<  
m&)/>'W  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 ;-db/$O  
UZdnsG7  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。
:~-:  
"4b{YWv  
1+%UZK= K  
P`tOL#UeZL  
补充说明： CD1Ma8I8  
5ibr1zs  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 ={g"cx  
6 AO(A *  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 }Qo]~/  
Ar-Vu{`  
pH~\~  
!@C-|=9G  
fh#:j[R
4e  
"6,fIsU  
Zma;An6  
xM())Z|2  
L7ae6#5.  
:7{GOx  
_'p/8K5)=  
|=5zI6pT  
'IU3Xu[-.  
~n -N  
+S+!:IB  
=8_b&4.:&  
F`KXG$  
RIkIE=+6  
k;qS1[a  
G 1{m"1M  
%=z>kU1|  
,RV>
F_  
"%K'~"S#Q,  
M|nLD+d~8  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS G!%m~+",  
[__P-h{J  
色谱条件： DXJw)%G w  
oW OR7)?r  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Ew4D';&;  
 /$93#$  
进样口：250℃，不分流进样 ]prw=rD  
~LI}   
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） #0)TS  
i`YZ;L L  
进样量：1μL ke@OG! M/  
)4o8SF7lz  
流速：1 mL/min /.s L[X-G  
ql%K+4@  
`]]m$  
(4z_2a(Dl,  
质谱条件： ;=2JbA+"G  
*s, bz.[  
接口温度：280℃ ,a WI&ve6  
BZOl&G(  
电离方式：EI ZC$u8$+P  
lhQMR(
w^  
电离能量：70eV "4KyJ;RA*  
@WXRZEz  
溶剂延迟：7min p Dg!Cs  
qi^kf  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 O*2{V]Y @  
UQI!/6F  
N f?\O@  
>;G7ty[RX7  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

g}?39?o 4  
E-X02A  
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