[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： [,T
uNd  
8D U|j-I8  
"?GA}e"R  
kN*,3)T;}  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） o'Byuct  
wBUn*L  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 0a??8?Q1G  
"$*&bC#dE  
流  速：1.0 mL/min E}d@0C:  
.>0j<|~  
波  长：242 nm p#UrZKR  
i[_WO2  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） Ap{p_~~
iJ  
oZkjg3  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Pwn3/+"%K  
|?=K'[5  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） WKib$(%f6  
F/FUKXxx  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A O9#8%p% )  
`<1o}r 7i  
柱  温：30℃ dBKL_'@@}  
WleE$ ,  
"NY[&S  
Tji G!W8  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） ;by`[)  
);o2eV  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 3":vjDq$  
n.&z^&$w\)  
附件二 'O%itCy)  
04`2M
NfxG  
K( : NshM  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS SJg4P4|  
9K]Li\  
色谱条件： $]v =2j  
I!FIV^}Z(  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm EDQKbTaPt  
xeo5)  
进样口：250℃，不分流进样 S{HAFrkm7  
*$K_Tii  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） B2p/  
kiYHJ\a  
进样量：1μL BbU%p  
? A4zIJ\  
流速：1 mL/min MI^@p`s  
t6/w({}j  
质谱条件： %.k~L  
kYbqb?  
接口温度：280℃ > 2)@(f~g  
*Ubsa9'fS  
电离方式：EI pco:]3BF6  
2 IfcdYG  
电离能量：70eV 0m2%ucKw  
2VpKG*!\  
溶剂延迟：7min tQR qQ  
7
7 g<`}{  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 :.
DZ~I  
F
IMM\W  

g=#Cc( q   序号 ;H' ,PjU	7%j1=V/   保留时间/min #%9t-	d/"%fpp^0G   中文名称 $^T xLv	ylGT9G19   英文缩写 Oj=g;iY	| )No4fm   SIM离子 pyw]ydB
R$Rub/b6   1 <lkt'iT=Sz	QBYY1)6S,   8.265 ?]%ZJd	7_9^nDU   邻苯二甲酸二甲酯 W-RqooEv	{^@vCBE+   DMP $RA+StF!]	Dz3~cuVb   163、77 lNLa:j
g#iRkz%l)&   2 %jo, Gv	K_Pbzj4(P   9.135 6Z@?W	!ra,HkU '   邻苯二甲酸二乙酯 tXCgRU	3dx.%~c   DEP =TGa\iclpB	782 oXyD   149、177 a"{b}UP
~}_ S]^br   3 Ub{7Xk n	P\y ZcL   10.888 Nh01NY;	@x^/X8c(p   邻苯二甲酸二异丁酯 N(kSE^skOa	+V9(4la   DIBP lot;d3}	L@S1C=-/   149、223  Xb~i?T;f
dG!)<   4 IC6'>2'=T	OD~yIV   11.637 ck$>	,ZZ5A;)   邻苯二甲酸二丁酯 @,{Qa!A>l	fRwr}n'   DBP Z-L}"~	@ %o'   149、223 ^e]h\G
^SbxClUfw!   5 ~"Su2{"8B	RJ-J/NhWyI   11.979 CropHB/t	)Wk&c8|y   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 +1a2Un	7 HJH9@8V   DMEP F5+!Gb En	6%V#_]   59、149、193 4O4}C#6(4
\okvL2:!   6 (r Q)0 g@	6ZQ$5PY   12.72 "2:# bXM-	!,~C   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 S-79 uo	?{~. }Vn   BMPP SJlL!<i$	, w,)n^   149、251 b(A;mt#N
? Hbi[YD   7 sh%%U	Bm;@}Ly=G   13.044 R7Ns5s3X	LufZ,   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 * jl_,0g]	}S9uh-j6l   DEEP 2'WdH1UrBc	c#pVN](?   45、72 R[2h!.O8
tmC9p6%   8 Of{'A	!Op18hP$   13.41 Ec['k&*7,	:yAvo4)   邻苯二甲酸二戊酯 r<.*:]L	!7anJl    DPP D 3}e{J8	CYC6:g|)   149、237 zyFbu=d|O:
XJf1LGT5   9 @0rwvyE=+3	N+NS\Y5   15.552 ^ P=CoLFa	N%`Eq@5   邻苯二甲酸二己酯 veGRwir	zXg/. z]   DHXP VUGVIy.	XWFuAE   104、149、76 Z=P=oldH
8fs::}0   10 pxs`g&3yd	'|N9 xLm   15.694 3:WXrOl	?{I]!gI   邻苯二甲酸丁基苄基酯 !U!}*clYL	(T0%H<#+   BBP [-Dl,P=	B%Spmx 8   149、91 sGD b<
Zcn,_b7   11 <U]#722	:S5B3S@|   17.153 ?(CMm%(8	<C_FI` wk   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 ]gQ4qu5	xl $#00|y   DBEP %%w]-`^h,	PDcZno?   149、223 O2Mo ~}
-3<5,Q{G+   12 fH7o,U|	:d<;h:^_   17.81 O`hOVH DQ	?q<"!U|e   邻苯二甲酸二环己酯 O9k9h RE]z	D`lTP(] y   DCHP GiN\nu<!	x.+}-(`W#~   149、167 !#nlWX:~
g(Jzu'   13 qF(F<$B	V et7a_   18.056 h&Ehp 	F}A@H<?   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 #"a?3!wr	HZdmL-1Z^+   DEHP M? oK@i	V$+xJ  m   149、167 d9[*&[2J|
@ #}9?>UV   14 9/MU zt	RR><so%   20.444 a2*WZc `	0CxQ@~ttl   邻苯二甲酸二正辛酯 lC+p2OG^[	|8 h<Ls_   DNOP d+%1q	k`r } Gb   149、279 2"NRnCx*
#JGy2Hk$^   15 rB|D^@mG	2s;/*<WM   22.98 ~-Rr[O=E	/g712\?M4   邻苯二甲酸二壬酯 t(Cd oE,6	q,2]]K7y   DNP [bJ/$A	b/'fC%o,   57、149、71 /H@k;o

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 l Q]&:%^\  
j2c -01}  
附件三 KtchKpv  
'A;G[(SYy  
z8_m<uewz  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 eqU2>bIf  
$,v '>  
%@#+Xpa+  
FRd!UqMXY  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 @w
y|l)%  
|t+M/C0y/  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 MGze IrV  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% t~ruP',~\  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% h[#Lg3  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% [Oen{c
9A  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% +PgUbr[p  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% 'KB\K)cD=3  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% F-[zuYGp  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08%  UhN16|x  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% BZq_om6  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% pd{W(M78g  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% 4 AZ~<e\  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% O4RNt,?l  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% %E#OUo[y/  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% rC fr&>nn  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% j[l6&eX  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% 1c_gh12  
2w\$}'  
g?`g+:nug  
   gw~%jD-2  
)OQhtxK  
aEU [k>&  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 sqTBlP  
Q|QV m,m  
8 2qf7`  
=OfU#i"c  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 MV +R$  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% h'VN& T,  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% hY 2nT  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% :#D?b.=  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% 3jF#f'*  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% '=MaO@ @  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% uC\FW6K=m  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% ' >(])Oq,  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% n\d`Fk  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% Q'-V\ G)11  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% *9:oTN  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% v|5:;,I  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% x._IP,vRx^  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% @L^Fz$S
x  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% gcYx-gA}  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% q6A!xQs<  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 IR/0gP  
X0vkdNgW  
?'T>/<(  
uU5:,Wy+dg  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 Z?nMt  
-D!F|&$  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 bO2$0!=I  
vpXS!o>/Sn  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 8 6L&u:o:  
Z]SCIU @+  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 W:5m8aE\  
=HoiQWQs`  
v0$6@K;M4G  
PFPfLxna  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 U Ciq'^,  
aaaC8;.  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， &)bar.vw/  
'kh%^_FH7  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 vxqMo9T  
QT|mN  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 ^2mXXAQf7^  
.IKK.G  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 zZf#E@=$|  
<c\aZ9+V  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 @EZXPU  
DG:=E/@  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 $~:hv7%  
B' :ZX-Q)  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 | Pj _L`G  

Nd;Ku6  
Qc pm!  
kOed ]>H  
|6$p;Aar  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： 2K3{hxB  
o}$EG  
FAj)OTI2S  
L>3x9  
1、样品提取方法： 4 XAQVq5  
vMm1Z5S/  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 3h *!V6%q  
m_)FC-/pSl  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 urjjw.wZ  
zlEX+=3  
hX=A)73(  
=,UWX3`f  
2、固相萃取方法： <x<"n t  
=_:et0  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： ;<(W% _  
E<Q f!2s$  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； ::
}{_ Z  
<OIIoB?t  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； LyAn&h
}  
E(Z8  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； }n4
V|f-  
,"HL~2:~  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 
"CI=`=  
*tK\R&4,4s  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 [O?z@)dx  
rV T{90,  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 j'MO(ev  
F;7dt
@5;  
$3s@}vLd  
6jC`8l:  
补充说明： IrqZi1  
}x07^4$j  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 kN
obl  
=AEBeiz  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 !BOY@$Y  
paD!Z0v&  
'lEA)&d  
-bSSP!f  
Stu4t==U  
x6e}( &p*  
IHcD*zQ  
,I%g|'2  
\l]DQaOEe  
2gCX}4^3b  
<7j87  
(K)]qNH  
TwVlg;  
_YLfL  
'VlDh`<W  
zhpt %7So  
C i
 hAU"  
@!yMIM%P  
7 D^gMN%p  
jN6uT&{T  
:F{:Z*Fi0  
*U]V@;XF  
vfE6Ggz  
%|o
J>+  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS g'V>_u#(  
.[3Z
1v,  
色谱条件： LS88.w\=S@  
lJis~JLd`  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm O2f-5Y$@  
w &(|e <  
进样口：250℃，不分流进样 DIzH`|Y  
fH>NJK;  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） }9W4"e2)  
( 8c9 /7h  
进样量：1μL elFtBnL'  
viMzR(JU  
流速：1 mL/min ,Qnd3[2[  
lo,$-bJ,<,  
8W#heW\-]  
?)1{)Erf8x  
质谱条件： XAe%m
^  
%^>ju;i^O  
接口温度：280℃ @p NNq
  
4y'OMRy  
电离方式：EI V` 1/SQX  
5_z33,q2  
电离能量：70eV X6mqi;+  
?}a;}Q6  
溶剂延迟：7min mHBnC&-/  
OI0;BBZ  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 mA*AeP_$  
HsHB!mQV  
[zlN!.Z  
v(-{= *':  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

)p~BQ~eip;  
NN E<L;u  
mqAWL:VvQ7  
bV$)!]V