[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： @ojn<7W  
K1$Z=]a+  
3|~(9b{+  
{X< tUco  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） ?=fJ u\;  
Ig=4Z*au!g  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 #q=?Zu^Da  
19lx;^b  
流  速：1.0 mL/min |m?0h.O,  
#kxg|G[Ol  
波  长：242 nm le1'r>E$  
"V^(
i%E;  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） '\\J95*`  
Iw48+krm>  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 z43H]  
+p_SKk!%+  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） <Z}2A8mjY  
@(ev``L5 g  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A 92S<TAdPP  
_I75[W!  
柱  温：30℃ P,*R@N  
Wb^YqqE  
)<!y_;$A  
8Kv=Zp,?`  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） a2sN$k  
@m#7E4+  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 l'mgjv~  
Ey 4GyAl  
附件二 @VVBl I  
!,|yrB&`S  
_0ep[r  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS qm]k (/w  
l2._Z Py  
色谱条件： "1WwSh}Z  
^~(@QfY  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm XWH~o:0<2  
Y!"LrkC  
进样口：250℃，不分流进样 c?>@ P  
SfEgmp-m  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 'z>|N{-xG  
p^<*v8,~7  
进样量：1μL tg.[.vKs  

+VCG/J  
流速：1 mL/min vYcea  
[x{'NwP?  
质谱条件： zU}Ru&T9  
!EB<e5}8wK  
接口温度：280℃ M&wf4)*%0+  
MZZEqsD5[  
电离方式：EI 3"!h+dXw  
RoS&oGYqR  
电离能量：70eV 5%Hw,h   
{(Jbgsxm  
溶剂延迟：7min t<h[Lb%{T4  
Qu"zzb"k  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 sVWOh|O[W  
z0
!k  

+&bJhX   序号 v'=$K[_	||yx?q6\h   保留时间/min s3<gq x-&r	f"9aL= 3   中文名称 Z{XF!pS%H	^1`Mz<   英文缩写 <UsFBF	HV21=W   SIM离子 Y.yi Uf/Q
W=G8l%   1 FT8<a }o	!1m7^3l7j   8.265 -8zdkm8k	u0;k_6 N   邻苯二甲酸二甲酯 BFnp[93N	#M ;j*IBl*   DMP 5FMe &	9z#z9|hj)3   163、77 yOTC>?p%
/Z|K9 a   2 HkPdqNC&	EQ [K   9.135 slnvre l	imc1rY!~'   邻苯二甲酸二乙酯 A1Es>NK[qW	B4/\=MXb   DEP y$8S+N?>	#g#[|c.   149、177 Vd;NT$S$
s5\<D7   3 L[voouaqm	.4J7 ^l   10.888 SuA  @S	eGW h]%   邻苯二甲酸二异丁酯 Y)68	\E1CQP-   DIBP { nMCU{*k	>r>pM(h   149、223 w~~[0e+E
QL\3|'a   4 jZk dTiI	8/@*6J   11.637 &,QBJx<#	)TcD-Jr   邻苯二甲酸二丁酯 .[ s6x5M	B A i ^t   DBP a+B3`6	-sx=1+\nf   149、223 *| ,ye5"
^YB3$:@$U   5 ~X-v@a	xf; Tk    11.979 ;?{OX	be]Zx`)k   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 :m0pm@	@`nU=kY/   DMEP BSY7un+`:	dW %;Z   59、149、193 p[%B#(]9,
EdCcnl?R6   6 &g!yRvM!;Q	B7n1'?   12.72 8*sP	|iVw7M:   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 ,ysn7Y{Y	H,)2Ou-Wn   BMPP fRt&-z('	3Ol`i$   149、251 WE&"W$0
\P9HAz'6   7 `%.x0~ih	9]|G-cyt   13.044 #+;0=6+SM	AeEF/*   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 /pz(s+4=	Cc` )P>L   DEEP I< Rai"	8yCQWDE}   45、72 -42jeJS
Z"a]AsG/Q#   8 G `JXi/#`	3EX41)u   13.41 N,u~ZEI	[X=Ot#?u ~   邻苯二甲酸二戊酯 /yL:_6c-	QP4`r#,   DPP =j!Ruy1	wQ/FJoB   149、237 !_=3Dz
H He~OxWg   9 B$%7U><'	[)83X\CO   15.552 (eJYv: ^	z'ZGN{L   邻苯二甲酸二己酯 LVp*YOq7	QH_I<Y:n   DHXP o%\p I%	ckPI^0A!   104、149、76 &GH,is
@q]{s+#Xf   10 e(m#elX	QBiLH]qa   15.694 |KxFi H	G(XI TL u*   邻苯二甲酸丁基苄基酯 csF!*!tta	@dj2#   BBP ` 'y[ i	Z;#Ei.7p|   149、91 @fWmz,Ngl
2So7fZa^wg   11 //}[(9b'\	d8? }69:h   17.153 $MEKt}S	P]@m0f   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 RqIic\a D	4S]`S\w   DBEP {1y-*@yU(	iraO/KhD*3   149、223 rI5)w_E?
pO n> m1|   12 _tg&_P+kV	XTHy CK   17.81 P{eL;^I	%/:{x()G   邻苯二甲酸二环己酯 p*r BT,'	tVZjtGz=   DCHP #L{QnV.3	yFT)R hN   149、167 %p}_4+[;
P+sxlf:0   13 'Pudy\Ab	i6zfr|`@   18.056 n\}!'>d'	Yw=Ve 0   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 cbl2D5s+i]	cjU*   DEHP ~jb6	*r)/. rK_   149、167 u{'bd;.7
DD\:glo   14 maLKUSgo	rLNo7i   20.444 nsqs*$	;}{%|UAsx   邻苯二甲酸二正辛酯 &}S #6|[i	LQ"56PP<   DNOP G}CzeL w	E)m{m$Hb   149、279 Z9s tB>?
|k:MXI   15 ua*k{0[	~AxA ,   22.98 U[=VW0	Jz s.)   邻苯二甲酸二壬酯 (7q!Z!2	ziR}   DNP +~\1Z gw	WF<`CQg[   57、149、71 <\GP\G

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 a ]~Rp  
287g 5  
附件三 aMv?D(Meb  
#BPJ RNXd  
GK6/S_l%D+  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 -9PJ4"H  
M[eq)a$  
8-#_xsZ^;  
}xx"  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 ) |t;nK,  
7{z\^R^O  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 1>yh`Bp\=  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% KUD.hK.  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% mV>l`&K=  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% X&LaAqlSG  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% o}4~CN9}  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% 
+x!Hc  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% {<}9r6k;f  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% 4 EE7gkM5  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% /nq\
*)S#&  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% n[KLY!  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% @D[tlj c^  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% W5*Kq^6P d  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% )5[OG7/g  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% Qx")D?u  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% eae`#>XP  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% Y&uwi:_g  
Q]{`m  
fsjCu!  
   9,?7mgZp  
Nov)'2g7G  
>~;= j~  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 >Jk]= _%  
Et! 6i7`]  
I~ 1Rt+:  
$'x#rW>v  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 /UqIkc  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% (zX75QSKV  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% bOolBKV  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% #F=!g?  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% 5m yQBK
E  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% +QEP:#qZw  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% ! %'"l{R  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38%
MwC}  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% OWc~=Cr  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32%  r4M ;]  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% Mi}.  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% \beYb0(+  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% %i.Prckrb  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% h0?w V5H  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% u`;P^t5  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% s o7. $]aV  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 bUm %#a  
7$Z_'GJ]1C  
8+}rm6Y+  
3kC|y[.
&  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 j67ppt  
UHvA43  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 G&^8)S@1  
6`Tx meIP  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 \ opM}qZ  
v
{t pRL0  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 n'V{  
E#:!&{O  
V
fpT5W<  
InbB2l4G  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 ial{A6X  
/7#e  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， eZ(ThA*2=t  
^.8~}TT-U  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 ; >H1A  
]dNNw`1\V  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 !;|#=A9  
Y,0Z&6 <  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 ?g4Rk9<!i  
,Kj>F2{  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 PY7H0\S)  
7>gjq'0  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 N N k  
G7"(,L` 5  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 Pz0Ma
fF|T  

q|5Q?t:,r  
Q48+O?&  
x#VyQ[ok  
GCT@o!  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： v"Me{+  
~eP  
E
\0X`QeY  
x(8n 9Q>  
1、样品提取方法： 5[C~wvO  
2i\Q@h  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 %Rp8{.t7  
Wta]BX  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 < f(
?T`
 
L=O lyHO  
3HZ~.  
|uI?ySF  
2、固相萃取方法： kneuV8+(5  
["y6b*;x  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： $&hN*7Ts  
BOvF)4`  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； BkawL,  
{uU 2)5i2-  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 2Il8f  
x)SralWb  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； y6-XHeU  
c 6"Ib)  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 @PI%FV z~p  
C!+I>J{4f  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 dRW$T5dac  
P
T'MNH  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 +bA%  
#Exp51  
%Jp|z? [/  
tF7hFL5f  
补充说明： r^0F"9eOL  
4;<ut$G  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 ~g6 3qs  
u0QzLi,  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 T 2F6)e  
GbI- SbE  
M}O}:1Par  
%<0eA`F4  
=Yz'D|=t  
&@% $2O.3  
]
e'fa/I  
`=UWqb(K_  
iK5_u2]Q  
z^<L(/rg9"  
h[o6-f<D  
s{0aBeq  
zCv"]%  
_8,()t'"  
1)m@?CaI`  
vS\Nd1~?  
*/:uV B,b2  
aJ Z"D8C  
f| _u7"OX  
&i+Ce  
=X\^J  
 ]^'@[<  
Ar*^; /  
mKrh[nA  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS *g?Po+ef%  
ZKHG!`X0  
色谱条件： <-D/
O$q  
.7K7h^*F  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ^[:p|U2mA  
%_!bRo  
进样口：250℃，不分流进样 -py@DzK  
/|* Y2ETOr  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） '>r7 V  
eek7=Z  
进样量：1μL D$t k<{)oB  
<HbcNE~  
流速：1 mL/min 5[c^TJ3  
g$b<1:8  
]]zPq<b2  
,7<f9 EVY  
质谱条件： 8-2 cRs  
%
i5M77#Z  
接口温度：280℃ zux{S;:?  
O#F4WWF  
电离方式：EI =weSyZ1~  
3\XU_Xs(]  
电离能量：70eV 6_FE4RR[  
u:=7l  
溶剂延迟：7min lhqg$lb  
; #&yn=^  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 A<??T[  
" thdPZ  
[5SD_dN  
|&zz,
+E  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

LGw$v[wb  
^SF&=NpV  
(&F ,AY3A  
.nx 2";oi