[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

;xqN#mqq  
r8%"#<]/  
z}.Q~4 f0D  
u7(<
YSOs  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： y <] x  
Wd>gOE  
EBMZ7b-7  
wNm1H[{  
1、样品提取方法： eKvQS}11  
_Gtq]`y  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 D` abVf  
M/evZ?uis  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 s#>``E!  
NsF8`rg  
Np2.X+  
'eg;)e:`b+  
2、固相萃取方法： g3kF&+2i  
,+o*> fD  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： e!p?~7 0  
MtXTh*4  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； G;yh$n<"  
a_amO<!   
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； s2;
b-0  
~E*`+kD  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； }RN&w]<  
UCL aCt -  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 p7eRAQ\'  
ZA Xw=O5  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 |)W N%#v  
r~U/t~V=D  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 bUBQ  
">D7wX,.>  
]|PDsb"e  
QFYO_$1Y)  
补充说明： #y:,owo3I  
(yB)rBh>n  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 IVblSiFF  
IqW4Q1>f  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 8M,AFZ>F  
:
 U!@  
{k"t`uo_  
><Awk~KR  
N R0"yJV >  
J\%SAit@  
N}\%r&KR=  
aT_%G&.  
^(+@uuBx  
>z|bQW#2  
~oX`Gih  
7:'5q]9  
KSve_CBOh  
RHu4cK!5  
,Yu2K`  
p>1Klh:8.'  
#&Fd16ov  
= zRjb>  
<ahcE1h  
ksV^Y=]  
`r+`vJ$  
#4{9l SbU  
to3D#9Ep  
AjMx\'(C  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Z$ 6yB  
2w67>w\  
色谱条件： dS" %( ?o  
16n8[U!  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm i*Ee(m]I  
"+:~#&r  
进样口：250℃，不分流进样 >s+*D=k  
3erGTa[|q  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ',P E25Z  
FOx&'dH%@  
进样量：1μL I@<\DltPi  
b qNM  
流速：1 mL/min 5p7 ?e3  
yhpeP  
m<X[s   
F bWcq_  
质谱条件： t/57LjV  
4Lb!Au|Y  
接口温度：280℃ Sd |=*X  
(/a#1Pd&  
电离方式：EI L<62-+e`  
js..k
*j  
电离能量：70eV !ay:
h Iv  
K!,T.qA&=  
溶剂延迟：7min #=g1V?D  
-^aJ}[uaI  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ?:42jp3  
.0Kc|b=w  
w*M&@+3I  
5%%e$o+  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

[j}JCmWY   
Sx[ eX,q  
/O5&)%N  
Cs_&BSs  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 d{Owz&PL  
.br6x^\<  
Udq!YXE0  
(e0(GOqf4  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 \`E^>6!]q  
!#=3>\np+X  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 `.J17mQe"  
=1@LMIi5x  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 8;r#HtFM  
Q$v00z]f*  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 =/`]lY&  
_OyQ:>M6P  
;RRw-|/Wm  
/Pkz3 (1  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 b&mA1w[W]  
0B7G:X0  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， ,>h"~X  
O573AA  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 M7cD!s@'I  
$|-Lw!)D  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 Wvf>5g)?  

e"%TU  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。
Hyy b0c^=  
]u|v7}I4  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 q>2bkcGY#  
VO|ECB2e  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 )y,^M3$?C  
?uq`|1`  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 2|je{  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 NW1Jr/  
w;lpJB\  
附件三 _[HZ[9c!  
t]HY@@0g  
rI>x'0Go*  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 # 55>?  
@} Ig*@  
p]kEH\ sh  
E+\?ptw  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 MG=E 6:  
9Jwd*gevV  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 _%CM<z e  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% J_7w_T/  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% atZe`0  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% Q>$B.z  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% )Ra: s>  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% Milp"L?B%  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% s={>{,E  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% 6],?Y+_;)L  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% #)}BY"C%  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% z#!<[**&  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% EPW4
h/I  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% 9wCgJ$te  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% ds`YVXKH  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% )7Hx<?P  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% ,(oolx"Xa  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% >#n"r1  
tWl')^  
N/lEfy<&g:  
   ~:,}?9  
'H`:c+KDG`  
})8D3k
zX)  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 jB9~'>JY  
.|DrXJ\c  
sJQ~:p0e  
SG~Hz Q\%  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 Z9h4 pd  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% 2u0B=0x  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% iBWEZw)  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% xe.f ]a  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% 2=<,#7zlJ  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 9J_vvq`%`  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% Q?>*h xzoP  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% hp7ni1 V  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% X fEp_.~JM  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 3UQBIrQ  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% ,>kXn1 ,  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% plzwk>b_  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% ,&@FToR  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% '&]6(+I>  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% k?Zcv*[)D+  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% IJ{VCzi  

附件一： ks*Y9D*=  
0"78/6XIs  
V|'1tB=;*1  
w7FoL  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） EF#QH _X  
Iy';x  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 `S3>3  
rkB'Hf  
流  速：1.0 mL/min c3)C{9T](  
+/rH(Ni  
波  长：242 nm LOvHkk@+  
$s\UL}Gc  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） :7g=b%;  
C3'rtY.  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 $w#r"= )  
5fJ[}~  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） &a,OfSz  
ORN6vX(1  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A tV;`fV   
MJ` 3ta  
柱  温：30℃ N|g;W  
Kl{>jr8B3  
'XrRhF (  
3REx45M2  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） I04jjr:<  
|'O[7u T  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。
J5p"7bc  
LVJI_O{fH  
附件二 7?8wyk|x  
$ ,SF@BhO  
U[L9*=P;  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS \Ng\B.IQ  
99$ 5`R;  
色谱条件： tWTKgbj (  
b`yZ|j'ikd  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ^;,M}|<h  
uw\2qU3g
k  
进样口：250℃，不分流进样 21s4MagC  
)"f N!9,F  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） (,^*So/  
lis/`B\x  
进样量：1μL '(? uPr  
#;n+YM">:  
流速：1 mL/min 5es[Ph|K5  
UA R5^  
质谱条件： ]9}HEu;1M  
dU\%Cq-G)  
接口温度：280℃ bI|2@HV2  
qC'{;ko  
电离方式：EI FZ8b7nJ)4m  
tDAhyy73  
电离能量：70eV h,"4SSL  
LY+|[qka  
溶剂延迟：7min 2h%z ("3/  
r[K5w  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 V\6]n2  
<I"S#M7-s  

_SA5e3#    序号 uw2hMt (N	<vwkjCA`   保留时间/min `:axzCrCfR	GQ |Mr{.;   中文名称 J(6oL 	0tU.(   英文缩写 &-;5* lg)0	^`G}gWBx}w   SIM离子 L`24?Y{
_]:z \TDn   1 uS^Ipxe\	YD7Oao4:o   8.265 ->V<DZK	?5{>;#0Z   邻苯二甲酸二甲酯 xKho1Z	8Q'0h m?   DMP 1{JV}O	BSVx N   163、77 KGFv"u{
gp\<p-}   2 M"94#.dKK	1waTTT?"Ho   9.135 \r+8qC[,	pWJFz-   邻苯二甲酸二乙酯 O*FUTZd(J	*(T:,PY   DEP QvKh,rBFVG	y1+* 6|   149、177 2OVRf0.R~
sW'2+|3"   3  :7]Sa`	 jYmR   10.888 os:A]	?!d&E?9\   邻苯二甲酸二异丁酯 7>))D'l57	PIoLywpRn   DIBP 2j}\3Pi	v50bdj9}k   149、223 aJbO((%$|u
Ez fN&8E   4 >_-s8t=|	7XTkX"zKj   11.637 !sQY&*	jET{Le8i   邻苯二甲酸二丁酯 `1$@|FgyC	bLij7K2H   DBP Z'`gJ&6n	P;=n9hgHI   149、223 CrC^1K
^84G%)`&   5 5[k/s}g	wSzv|\ G   11.979 ,<n}W +3	n7B7m,@1   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 ,&]S(|2%>t	Su 586;\   DMEP .b3Qfxc>	a,@]8r-"   59、149、193 jqWu
lGV0*Cji   6 m'Amli@[	KSbKEA   12.72 7]U "Z*	1Ce@*XBU   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 09X01 X[	 AsQ)q   BMPP nGpXI\K	ZOft.P O   149、251 j>*R]mr6
NaPt"G   7 T m_bz&Q	3/aMJR:o   13.044 8e*,jH3	OP~Hdo cB   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 &Lt}=3G	y[`l3;u:'   DEEP 52SaKA[	UM!ENI|   45、72 rx $mk
| h`0u'#   8 ? i)f^O	Ager$uC   13.41 +1Vjw'P	`sUZuWL_   邻苯二甲酸二戊酯 }XZ'v_Ti	IYqBQnX}oM   DPP rFIqC:=	<DMl<KZ   149、237 ` BDLW%aL
UQ8M~x5$3%   9 xgABpikC^	 gG uZ8:f   15.552 UV5Ie!\nm	+IrLDsd   邻苯二甲酸二己酯 `%CtWJ(e	Q&MZN);.   DHXP I*LknU@	eL^.,H0   104、149、76 ki[UV zd
}~#pEX~j*   10 eK.e|z|	3mYiQ2   15.694 n.wF&f'D]	"5;;)\o~   邻苯二甲酸丁基苄基酯 f~Fm4>\(	]d,S749(s   BBP .%.9n\b	S>.SSXlM   149、91 qY~`8 x
]?3un!o3o   11 .uyGYj-C	6fd+Q /   17.153 0@G")L Ue0	(4'$y`Z   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 }:u~K;O87	v-yde>(   DBEP :T]o)	dDm):Z*`b   149、223 vhsk0$f 
Bn61AFy`   12 ]4R[<<hd	OfctoPP _0   17.81 8zA=;~GHP	C8vOE`U,J   邻苯二甲酸二环己酯 $/=nU*pd	O!Oumw,$   DCHP E2cB U{x	%{/%mJoX   149、167 y`$Q\}fS
d '/TdVM   13 Pb8^ b	H|ER   18.056 }';D]c	"=6 v&G]U4   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 +,yK;^b	\mw(cM#:   DEHP M/q E2L[y	Xe#K{gA   149、167 aB]m*~
<`jLY)sw   14 _[Vf547vS	kl "+YF5/   20.444 gqR)IVk>%	yA)(*PFz   邻苯二甲酸二正辛酯 zNY)'	avy"r$v_&   DNOP }hYZ" A~	"+zCS|    149、279 l tkI}h,e
wZ4t CZA   15 oQv3GpO	+kq'+Y7   22.98 t+?P^Ok	,-+"^ >   邻苯二甲酸二壬酯 'TTUN=y	R.LL#u};   DNP XE3'`D!	_5MNMVLwW   57、149、71 (~)%Fo9X"