[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： 7~nCK  
"\r~,S{:  
|uBC0f  
QS*cd|7J;  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） rI+w1'
;C1  
y?#J`o- O  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 >wO$Vu `t  
!gfhEzY  
流  速：1.0 mL/min X\2 hKUkT  
F(~_L.  
波  长：242 nm 6H,=S`V]EK  
 &Z!K]OSY  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） lN>C#e<]  
]~S+nlyd<  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Guw|00w,Q$  
6*aa[,>  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） T) tZU?  
A a} o*  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A w1@b5 -  
I cR;A\z  
柱  温：30℃ ]ZzG!7  
W#jZRviyq!  
6$fnQcpJ  
?t0zsq  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） yaRc
BT?  
F\=Rm  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 s|gD  
e4=FU&RpNH  
附件二 GtM( Y  
}x?H ~QQT  
\YlF>{LVe  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS J(EaE2  
kUg+I_j6*  
色谱条件： c/=y*2,zo  
UROj9COv  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm xv$)u<Ve  
[EmOA.6  
进样口：250℃，不分流进样 T1(j l)  
9'n))%CZ.  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） &gA6+b'  
b$v[@"1  
进样量：1μL 0Oc}rRH(C  
;V(H7 ZM  
流速：1 mL/min #ox 9&  
>P\h,1  
质谱条件： }iua] 4|  
/`+Hwdk  
接口温度：280℃ ` URSv,(  
a{]g+tGH  
电离方式：EI 3:[!t%Yb  

<I7(eh6d  
电离能量：70eV x
?,~TC4  
lo+xo;Nd  
溶剂延迟：7min X0y?<G1(a  
L
!;^#g  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 |H ^w>mk  
";PG%_(  

&sm @   序号 C(-[ Y!	ow2M,KU6Z   保留时间/min O6y @G .+	N0=-7wMk(Z   中文名称 Bu7A{DRf	S?*^>Y-e;   英文缩写 3 YR* ^	qE>i,|rP`   SIM离子 mT96]V\
hIR @^\?   1 hzaU8kb	\WWG>OUh.U   8.265 $zdd=.!KiK	#`/bQ~ s   邻苯二甲酸二甲酯 I$n+DwKcN	+<&E3Or   DMP >gr<^$	cI5N"U@yN   163、77 ]*0(-@
5\WUoSgy   2 "c6<zP	v{r1E]rY   9.135 GSP?X$E	Uls+n@\!   邻苯二甲酸二乙酯 sa G8g	sM P:sCRC   DEP QCWf.@n	DY8(g=TI|1   149、177 *#zS^b n
"e@n:N!   3 SyAo, )j	;=a_B1"9u   10.888 LX\)8~dp	1eHe~p ,   邻苯二甲酸二异丁酯 D*QYKW=)	a$}N W.   DIBP 4@h;5	QXs8:;T   149、223 *1 $
LL.x11o3   4 ;}K62LSR	w^Ag]HZN   11.637 {jW%P="z$"	f!x[ln<   邻苯二甲酸二丁酯 gw+eM,Yp	O%&cE*eX   DBP FY4T(4#	)c+k_;t'+   149、223 @^&7$#jq%
~x#vZ=]8   5 "(f `U.	\f%. n]>   11.979 <<,>S&/	C?o6(p"b   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 :G =FiC	50$W0L$   DMEP :o8MUXH$	g`[$XiR   59、149、193 :c=.D;,
(>7>3   6 s`;f2B/|	D(\$i.,b2   12.72 !Z|($21W	*x(Jq?5O7X   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯  3+U]?7t	K 1W].(-@4   BMPP q-_' W,	<]U1\~j   149、251 z7T0u.4Ss
\TbVS8e^   7 '*T]fND4	75NRCXh.   13.044 {x@|VuL=	Mvcfk$pA   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 Vw~\H Gs/~	rRb+_]Lg   DEEP =.Tv)/ea	(S/F)?   45、72 m9":{JI.w
:dnJY%/q   8 "![L#)"s	3z8 C   13.41 zP)~a	GbZ;#^S   邻苯二甲酸二戊酯 2A:,;~UH	MMQ;mw=^]   DPP kOrl\_!z3	<4 8<86TP   149、237 5iX! lAFJ
~r*P]*51x   9 E6MA?Ax&=	nt :N!suP3   15.552 ~mp0B9L%	qUJ aeQ   邻苯二甲酸二己酯 }JgYCsF/f	1DJekiWf   DHXP ]0j9>s2|Z	 A[N {   104、149、76 <[~,uR7
zGo |JF   10 | A)\ :	YT aLjITG   15.694 e@<?zS6	j;~ % lg=)   邻苯二甲酸丁基苄基酯 =d`5f@'rl	M[]A2'fS   BBP PL=^}{r	&2.u%[gO[q   149、91 R{hf9R,
E /<lGm:.   11 % ZU/x d	s][24)99   17.153 P5 <vf	TD@v9   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 LRb,VD:/Y	8MwK.H[U   DBEP tOl e>]	SI:ifR&T   149、223 |bv,2uWz
2h=%K/hhY   12 vG41Ck1	D@ek9ARAq   17.81 32)tJ|m	|,C#:"z;   邻苯二甲酸二环己酯 Pt, ebL~	3INI?y}t   DCHP 1`0#HSO	Kb;dKQ   149、167 qQ[b VD\*
(t^n'V   13 Dr<='Ux[5	q<vf,D@{ !   18.056 )=pD%$iq	<i?a0   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 Njc%_&r	+FG$x/\*0   DEHP dIweg=x	~`8hwR1&z   149、167 )EM7,xMz
}Nj97R   14 7 u. |XmUz	V)M1YZV{   20.444  %V G/	F'8T;J7   邻苯二甲酸二正辛酯 l*aj#%ha	S: Q! "U   DNOP #^#Kcg	3k$[r$+"   149、279 z$lF)r:Bc
&-l8n^   15 *V^ #ga#A	;^u*hZN[Up   22.98 .9G<y 4	$o?@0   邻苯二甲酸二壬酯 l3o#@sz:	fIC9WbiH-   DNP +t)n;JHN	Iry   57、149、71 G* b2,9&F

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ?q`0ZuAg\<  
|as!Ui/J/  
附件三 Gz I~TWc+G  
QR?yG+VU  
#H [Bb2(j  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 +.B<Hd   
}TRAw#h  
gbOp
j3  
@tohNO>  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 S>G?Q_&}?D  
e<7.y#L  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 s..lK "b  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82%  %R#L  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% *,C(\!b !?  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% Tm^89I]L  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% 682Z}"I0  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% r?m+.fJB  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% 2Y}?P+:%>  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% J]W5[)L  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% { pu85'DV  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% g71[6<D  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% wIkN9 f  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% Yw _+`,W   
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% b[ z]CP  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% 8eA+d5k\.  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% Q 4CjA3  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% ys_`e  
d0'JC*  
XC{eX&,2x  
   XdH\OJ  
I ZQHu h  
a^,(v  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 04r$>#E  
=4d (b ;  
o\vBOp?hj  
n~VD uKn9  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 q -8t'7  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% !!Z?[rj  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% |7x\m t  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% }@.|?2b +  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% ~/j\Z  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% Jmx Ko+-  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% V59(Z  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% g}]t[}s1]  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% 4j)tfhwd8  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% hpU2  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% >rvQw63 \  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% y+7PwBo% e  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% 3do)Vg4  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% D_Bb?o5  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% fDSv?crv  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% 4!KoFoZt*  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 noml8o  
]);%wy{Ho  

7G}2,ueI  
{pnS Q  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 %&w3;d;c  
mUdOX7$c>  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 !`,Sfqij  
1+jAz`nA:T  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 GS a[ oh  
&3J_^210  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Kgi<UkFP  
UQC=g  
$m].8?  
gy 3i+J  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 s/q7.y7n{  
#>< .oreXq  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， w[S pw<Z  
$o0iLFIX/  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。
WaVtfg$!  
T`\x
,` ^  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 #Ssx!+q?  
.<x&IJ 
/  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 QS` PpyBkd  
1 u| wMO  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 bm?sbE  
aJ-K?xQ  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 7VqM$I  
JEahG zO  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 4'`{H@]tb  

^OcfM_4pN  
$T%<'=u|E  
~v,KI["o  
}oxaB9r  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： +(k)1kC Mn  
Z*Hxrw\!0  
 DlkKQ  
4uVmhjT:X  
1、样品提取方法： ->25$5#  
pnw4QQ9  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ?m7"G)  
(tz]!Aa{s  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 vo<#sa^,j  
MifgRUe  
eii7pbc  
$I]x &cF  
2、固相萃取方法： `.-k%2?/  
Ln%_8yth  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： zLK ~i>aW  
Q&'Nr3H#tZ  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； d7zE8)DU7  
fw};.M  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 0J-ux"kfI  
,#;ahwU~s  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； hQxe0Pdt  
rAdcMFW  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 _[tBLGXD  
p6\9H

G  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 w%H#>k  
Wfw9cxGkf  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 6FFv+{2^@  
]F-6K eBc  
1vd+p!n  
b4PK  
补充说明： "t`e68{Ls  
.}>[Kr  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 9:~^KQ{?  
 \hc9Rk  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 I2Q?7p  
y +vcBuX  
xGPv3TLH^  
q=(wK&  
QKQy)g  
~vS.Dr  
z05pVe/5  
`Y9@?s Q  
LYv2ll`XP  
$]86w8?-N  
W;W\L? r  
$^F2  
d4tVK0 ~  
W=+ag<@  
Jr zU-g  
y6\#{   
(>'d`^kjk  
>~k Y{_  
Ft7l/  
U6"50G~u  
O,PHAwVG%L  
i[swOYz]X  
z841g `:C  
!+U.)u9 '  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS A2 rRYzN;  
[
;}c@  
色谱条件： Z]dc
%>  
L'(^[vR(  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Uz6B\-(0p
 
$vd._j&  
进样口：250℃，不分流进样 7e4\BzCC  
#i?TCO  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） D UeT  
mDhU wZH  
进样量：1μL vv3?ewr y  
6FfDif  
流速：1 mL/min ^gy(~u  
mmi~A<  
'W)x<Iey1  
}v?{npEOt+  
质谱条件： QP'* )gjO7  
^^Y0 \3.  
接口温度：280℃ MFVFr "  
4o_1F).\D  
电离方式：EI RZ -w,~  
^T"A9uaG  
电离能量：70eV L^22,B 0  
XHW {EVcF  
溶剂延迟：7min d(&vIjy  
PUI.Un2C_  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 iS{)Tll}&  
<1ai0]  
F"LT\7yjyG  
,y^By_1wS  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

|^FDsJUN  
#GTmC|[  
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luV%_[F