[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

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lk4$c1ao2@  
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A1x   
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： NtQ#su$  
Q8NrbMrl  
?7 w7Y;FuR  
+(oExp (!  
1、样品提取方法： &}FWpo!  
(b+o$C  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 a-9sc6@  
>%85S>e  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 aTE;Gy,W  
C59H| S  
R5fZ}C7  
0#/Pc`zC  
2、固相萃取方法： v|2+7N:[;  
i [6oqZ  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： b%e7rY2  
r&nEM6  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化；
me@EKspX  
u{|^5%)  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； BV]$= e'  
H2E'i\  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； ShMP_?]P  
uar[D|DcD"  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 zCSLV>.F  
4m6%HV8{}[  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 \"$jj<gc  
Lq{/r+tt/  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 H:X(><J  

fnudy%oo  
qEnmms1  
]0;,M  
补充说明： >TS=tK  
u1/q8'RW  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 g (V_&Y  
9v76A~~  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 ?)FY7[x.  
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a}7P:e*u  
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k{pn~)xg  
}7/Ob)O  
v$bR&bCT  
w}Xy ;0c  
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=s[P =dU  
wq`\p['Q,  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS LQ=Fck~[r  
D_Cd^;b  
色谱条件： qAR}D~t  
K9f7,/  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ~CL^%\K  
<t4l5nr#  
进样口：250℃，不分流进样 3Ho<4_I ,  
n{r
_Xa  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） OX/}j_8E^(  
^LJ
?GJ$g  
进样量：1μL 'aW<C>  
t=oTU,<  
流速：1 mL/min 7U{g'<  
wXxk+DV@  
nH]F$'rtA  
YKs^aQm#  
质谱条件： Q!dNJQpb  
d6hso  
接口温度：280℃ ;qT7BUh(%  
A1,- qv1s  
电离方式：EI p6'wg#15  
oZ(T`5  
电离能量：70eV L E>A|M$X  
N2^B  
溶剂延迟：7min 4aQb+t,  
"m:4e`_dz  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 :h+gSvn:  
p KF>_\   
:9`T.V<?  
s) vHLf4T  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

/WJ*ro]Hd$  
n8eR?'4  
Vnv9<=R  
B|Rnh;B-  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 ^lB1- ;ng  
>wdR4!x!?  
pYI`5B4  
rV"<1y:g  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 S$%T0~PR~  
L
P7t*}PK  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 vXR-#MS`}  
p` B48TW  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 ^%)'wDK  
E&#AX:  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 ]N:SB  
Gz+Bk5#{  
UVUbxFq:  
y)"aQJ>  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 b guhx3s  
z/.x
*A=  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， 5:hajXd  
go|/I&
  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 R KFz6t  
n (C*LK  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 * Od_Cl  
]N*q3y|)  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 ZK27^oG  
z. VuY3  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 WLP A51R  
 ~
Hd{+0  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 1/jJ;}  
U-QK   
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 6^H64jM  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 y?Vsp<  
FQ6jM~  
附件三 ]&;M78^6  
x,LQA0  
V'n4iM  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 ^R;Qa#=2  
UB5X2uBv  
vdS)
EIt  
b Ag>;e(  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 zI$24L9*  
uIeD.I'@{5  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 "V7 SB   
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% @)h
rj2Jw  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% ^TWMYF-  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% ccCe@1RI  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% %+A z X  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% >wPMJ> 2  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83%
wfE%` 1  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% ueimTXk  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% !X 8<;e}2  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% Z,x9 {  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% ? FlV<nE"J  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% |N^z=g P[  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% 'J0Erk8(  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% *CnrzrKtQ  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% ;:0gN|+  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% {1jywb }  
G iF})e}  
r]0UF0#  
   G0u3 *.  
A\6Q
*VhK  
;4g_~fB  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 :2n(WXFFI  
.x^`y2'U  
fK$N|r  
HOb-q|w  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 1f.xZgO/2  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% gUrb&#\X  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% B-OuBS,fwC  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% ,0~/ Cn  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% jgr2qSUC  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% MKuy?mri~  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% oc2aE:>X  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% >%"Q]p  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% J{Z-4y  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% \E'Nk$V3  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% biFN]D  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% lRn6Zh  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% kUJ\AK  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% \w 6%J77  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% ,u}n!quA  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% ZOFBT(oV  

附件一： 1AF%-<`?s  
II;Te7~  
k#C f})  
3pSj kS|?>  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） :=<0=JE#  
qbiK^gR  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 =A@>I0(7  
mu[Op*)  
流  速：1.0 mL/min B>z?ClH$R  
sWHyL(C@  
波  长：242 nm #f{lC0~vA  
6Ps.
E  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） #DFp[\)1  

83 I-X95  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 nPFwPk8=M  
raE Mm  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） D!F 2l_  
* geN[[  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A UKtSm%\  
8{0 k0 &x  
柱  温：30℃ y('k`>C  
PFrfd_s{>\  
0;<)\Wt=i9  
GZ3 ]N  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） 6C [E  
+=BAslk  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 MHi8E9_O  
=0qpVFvU  
附件二 %lw! e  
y_p.Gzy(^}  
:E&g%'1  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ^D{ lPu 3  
!w39FfU{  
色谱条件： Gl}Qxv #$  
lpB3&H8&  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm fC WGAO2  
=
elpH^N  
进样口：250℃，不分流进样 ntVS:F
 
2c5-)Dt)T  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ~;]W T
 
m908jI_So  
进样量：1μL Dd/wUP  
`Ag{)  
流速：1 mL/min Om;&_!
i  
[* ?Awf`  
质谱条件： #Lv2Zoi>G  
%a+mk E  
接口温度：280℃ aFz5leD  
+ZM)bbB  
电离方式：EI d?`ny#,GB  
nw> 8GivO  
电离能量：70eV D=m'pL/pl  
VXIP
0p@  
溶剂延迟：7min ,(8;y=wux  
>Cw<BIF  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 7(5xL T$  
)M6w5g  

r\qj!   序号 1%4sHSN	 A);   保留时间/min ^6 _e=jIN	Og,$ sH}`   中文名称 B2-V@06	Y. ,Kl~   英文缩写 yE}}c{hSn	v?KC%   SIM离子 Z?wU
uc;8 K,[t   1 S H! 	/YZr~|65   8.265 vI>>\.ED	^J$2?!~   邻苯二甲酸二甲酯 N<~t3/Nm	:A/d to   DMP O8h %3&	_f$^%?^   163、77 i\,-oO
FoN|i"*l   2 3B84^>U<	P-?0zF/T$   9.135 < jJ	kqFP)!37   邻苯二甲酸二乙酯 0y D9SJn	\G*0"%!U   DEP <g$~1fa	{\8 1i8b]   149、177 37s0e;aF
Zy`m!]G]80   3 9Z4nAc	8Vr%n2M   10.888 e"|efE	hgPa 6Kd   邻苯二甲酸二异丁酯 HiZ*+T.B	d3\qKL!~   DIBP 0XE4<U	k\5c|Wq|g   149、223 i@*{27t
ekWD5,G   4 +^60T$	akp-zn&je   11.637 aTH{'mN	hOjk3 k   邻苯二甲酸二丁酯 u^^[Q2LDU}	f%][}NN)Xr   DBP 'j#*6x D	Ni9/}bb   149、223 ~!B \(@GU
<FV1Wz   5 PxvyN_B#>	n\mO6aJ   11.979 *& BQTZ6	}|h# \$w   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 KLST\Ln:	X8Bd3-B   DMEP Wf+cDpK	d[iQ`YW5   59、149、193 Z@4Arfl
KjD/o?JUr   6 4>wP7`/+y	.73X3`P25   12.72 yuh *	L^1NY3=$   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 Amtq"<h9a	U7?;UCmX   BMPP nGC/R&	iDpSj!x/_   149、251 9Gvd&U
akmkyrz'&   7 %Tfbsyf%f	GV1pn) 4   13.044 1y:-N6	,V7nzhA2   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 4j-Xi	4VHn  \   DEEP W~)}xy	G?yLo 'Ulo   45、72 49eD1h3'X[
aEB_#1   8 [ |v][Hwv	C2!|OQ9A2   13.41 ::`HQ@^	&< z1k-&!   邻苯二甲酸二戊酯 :'Vf g[Uq	1Yq!~8   DPP #`^}PuQ	H8=N@l   149、237 ibcRU y0%
KR}?H#%   9 /WcG{Wdp	{qk1_yP   15.552 !aUs>1i	g>%o #P7   邻苯二甲酸二己酯 4Z3su^XR	rSY!vkLE\   DHXP t9l Pb_70	g&L!1<, p   104、149、76 )D O?VRI
'@v\{ l   10 H*n-_{h"t	b=C*W,Q_#   15.694 7sCG^&Y	bL`T ySX   邻苯二甲酸丁基苄基酯 u[;\y|75	),%%$G\   BBP ELoDd&d8	BKCiIfkZ   149、91 7~h<$8Y(T
C }j"Qi`   11 ,Fl)^Gl8?	QE+g j8   17.153 5DU6rks%	|*xA8&/   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 HVCe;eI	/U*C\ xMm   DBEP p$c6<'UqH	9rX&uP)j^#   149、223 u@)U"FZ
r|8d 4   12 Qy<P463A(l	<NY^M!   17.81 Pj^{|U21	|^I0dR/w:   邻苯二甲酸二环己酯 2jItq2.>	|Zpfq63W   DCHP >2)OiQ`zg	B]wk+8SMY.   149、167 |A~jsz6pI
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,eW%{[g(   14 286;=rN]*	X/!o\yyT   20.444 3{64 @s	]NY~2jmX   邻苯二甲酸二正辛酯 WRbj01v	CS5?Ti6   DNOP '~<m~UXvD#	P>C~ i:4n   149、279 Oh`69 k
,j{,h_Op   15 rig,mv	NjScc%@y   22.98 e0zq1XcZ	m|n%$$S&   邻苯二甲酸二壬酯  .-c4wm}	Egp/f|y   DNP @7]yl&LZ	w^|*m/h|@u   57、149、71 L:j<c5