[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

WE#^a6  
iWkWR"ysy  
G~a ZJ,  
`$9x1dx  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： uH^-R_tQ  
WpP}stam/  
h(dvZ= %  
T'9'G M  
1、样品提取方法： 4pF*"B  
$h"\N$iSq  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 Bsvr?|L\  
_TZRVa_  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 \}b%E'+_T  
J/$&NWF  
X+9>A.92  
6 cX
yJW  
2、固相萃取方法： d$!RZHo10V  
CD~.z7,LC  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： Y$_B1_  
PJH&  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； )y$(AJx$  
wmLs/:~  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； (!WD1w
 
NBGH_6DROw  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 6i/(5 nQ  
F)eelPZ+,  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 I!K6o.|1  
$!t4r  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 gcT%c|.  
|+9&rAg  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 -
iZ`Y?  
SmO~,2=  
y:uE3Apm  
+ZP7{%  
补充说明： R:qW;n%AF  
Z%UP6%  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 pQB."[n  
9\(| D#  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 Nh+H9  
J{G?-+`  
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#X"@<l4F  
A+{VGP^  
i!Ga5v8n:  
%8x#rohP  
:BTq!>s  
Z/J y'$x  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ehY5!D1Q  
rVsJ`+L  
色谱条件： "zy7C*)>r  
bN@ l?w  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm `P ,d$H "  
T]p-0?=4vv  
进样口：250℃，不分流进样 GuL<Z1<c  
7VI*N)OZ8  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） mj@13$=  
)
sp+8  
进样量：1μL }o{
(S%%  
`@|$,2[C  
流速：1 mL/min ~y[7K{{ ;T  
Y[S1$(K&*  
B?o7e<l[  
p
Y$Q  
质谱条件： A.w:h;7  
5 rUdv}.  
接口温度：280℃ y18Y:)DkL  
sUm'  
电离方式：EI 3DG_QVg^v  
/|&*QLy  
电离能量：70eV O<W_fx8_'  
d*Fj3Wkx  
溶剂延迟：7min PE5G  
@$K"o7+]   
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 :T(|&F[(  
Jqi%|,/]N  
HiJE}V;Vq  
*G9V'9  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

t5IEQ2  
26x[X.C:  
%C_HXr@  
^D-/`d  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 1V4s<m>#  
f]|ysf  
m~P CB_ifW  
|_*O'#jx  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 bRJMYs  
y?m/*hh`  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 %?uc><&?e  
Lz!,kwg  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 [t7]{d*  
RIXMJ7e7  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 d`nVc50  
 ,^;)<[  
|e?64%l5P  
r>"   
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 /X(t1+  
2H6,'JK@F  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， `'c_=<&n  
j!4et;  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 !z<%GQ CT  
gu<'QV"  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 < hO /jB  
 Tekfw  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 079'(%  
 D <&X_  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 }_;!hdYq  
$
Y_i4(  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 8&~~j7p
,  
IlE_@gS8  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 +$(2:S*r  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 w3D]
~&]  
VAYb=4lt  
附件三 cf[vf!vi  
re,.@${H  
9 K  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 DcV<y-`'1  
%W|DJ\l8"  
q:HoKJv4  
7-9;PkGG.A  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 !Zwf 397  
K :qOoY  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 RyRqH:p)3  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% ZZ A.a  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% e.6Dl_  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% z-0:m|=yH  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% iWXMKu  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% ,p,Du F  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% x|apQ6  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% 135Par5v  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% 4IGxI7~27#  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% u"F;OT\>g  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% oa9)Dv  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% O=O(3Pf>  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% @]3*B%t  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32%  gv` h-b  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% VA]ZR+m  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% .D@/y uV  
V/ UB9)i+  
@c"yAy^t  
   r|8V @.@i  
U~g@TfU;  
'j /q76uXV  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 |2UauTp5yK  
7dhn'TW  
cd"wNH-  
#8qyg<F  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 LsotgQ8   
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% G+Ei#:W,  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% @S}|Ccfc _  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% w\v&3T   
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% e>(Wvb&4  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 1'OD3~[R  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% |=OpzCs  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% *%f3rvt7@)  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% Rmgxf/  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% u> In(7\  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% 1uj05aZh}  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% Suj}MEiv  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% HO G=c!b  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% J4&XPr 9  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% | )S{(#k  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% .k|-Ks|d|  

附件一： /{QR:8}-Q  
uczOSd  
kqdF)Wa am  
mWN9/+!  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） EFSln*|  
I*hCIy#;  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 tj7{[3~-[  
QU{ |S.\  
流  速：1.0 mL/min 3z5w}qN]M  
6_1v~#  
波  长：242 nm
ZxW4 i  
t|XQFb@}  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） MOp06  
` 9 iB`<  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 d'y\~M9(  
H& L  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） g<d#zzP"T  
:70n%3a  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A UM[<v9NWE  
N!RkV\:X  
柱  温：30℃ rsSE*(T t  
`GGACH3#s  
3"9'MDKH  
#* r u*  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） CB&$tDi  
BC}+yS \  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ~ 8hAmM  
pyvZ[R9  
附件二 SY: gr  
gt~hUwL  
|gl~wG1@  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS =[X..<bW9:  
dM|&Y6
  
色谱条件： G?`x$UU  
y}TiN!M  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm }\p>h  
3>jL7sh%|  
进样口：250℃，不分流进样 HW0EPJ  
HkH !B.H]  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） XI>|"*-l  
G|WO  
进样量：1μL }PdHR00^  
*TacVp  
流速：1 mL/min [8T   
|(mr&7O  
质谱条件： ]{` 8C  
t")+L{  
接口温度：280℃ N{lj"C]L  
\ow3_^Bk  
电离方式：EI [gZz'q&[)  
sk0N=5SB-  
电离能量：70eV TB=KTj  
@@
!Mt~\  
溶剂延迟：7min 1pT v6  

xjm|ewo  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 /zB;1%m-  
:'\4%D=w  

RoL5uha,l   序号 lnXb]t m;	buIy+   保留时间/min w"-'	--ED]S 8   中文名称 Hh/Z 4`&yi	-EwtO4vLJ   英文缩写 XM0;cF	Z0f0tL&A<   SIM离子 amPC C
1QfOD-lv   1 %s]l^RZ	aFI?^"L   8.265 1|4' 3^3	=:fFu,+{   邻苯二甲酸二甲酯 =xO q-M	j( *;W}*^   DMP fO!S^<9,-	&hK5WP6whW   163、77 !&~8j7{
<K8$00l m   2 $EHnlaG8r	$N7:;X"l   9.135 4:!KtpR[O	C*e)UPK`   邻苯二甲酸二乙酯 @IaK:	e`1, jt'   DEP L{>XT	'E/vE0nN?   149、177 B_u+$Odo
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&~ g||rq   4 B\2<r5|QG	w'q}aQS   11.637 w < p	[guJd";   邻苯二甲酸二丁酯 6Lw34R	/}?"O~5M"   DBP [ `P+{ R	62&E]>A(i   149、223 clQN@1] M
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`,ZsKxI   6 m4( :H(Za	: (,uaX>{   12.72 gQf'|%)AJ	aG QC   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 yyfm	$x]'6   BMPP _*B]yz6z	9mkt.>$   149、251 R[5*]$(b
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_3-nw   9 -Wc'k 2oU	) D:M_T2   15.552 @SeE,<	&PWz4hZ   邻苯二甲酸二己酯 JPW+(n|g	pB;)Hii\   DHXP syhTOhOX	C5m6{Oo+-   104、149、76  *e{d^
k ]C+ /   10 289teU	I_N(e|s\U   15.694 u6h"=l{	'^"6EF.R   邻苯二甲酸丁基苄基酯 JVE]Qb_	MFO}E!9`q   BBP zbn0)JO	v`#T)5gl-   149、91 BtDi $d%'
Tx"}]AyB6   11 +~mBo+ ,	U WYLT-^x   17.153 Ym6zNb8 bQ	LQ pUyqR   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 1HK5OT&	+o})Cs`|=A   DBEP GPnd7}Tn	L>Bf}^   149、223 J/Ki]T9
zn|~{9>y   12 -ZqN~5>j)	J@'}lG   17.81 >i=^Mh-bm	/pzEL   邻苯二甲酸二环己酯 bj^YB,iSM	e(E6 t_   DCHP #7K&x.w$	o<2H~2/   149、167 Xao 0cb.R
l%]S7|PKx   13 513{oM:	.r!:` 6   18.056 2@WF]*Z	Z!o&};_j   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 Ht#5;c2/	bf]W_I]B   DEHP xv;'27mUt	EJ& [I%jU   149、167 n|5+HE4@
`PK1zS r   14 ]&%_Fpx	bp Q/#\Z   20.444 _IiT B	y\7 -!   邻苯二甲酸二正辛酯 Cw"Y=`	?:F#WDD   DNOP W]cJP	CC,_I>t   149、279 k fS44NV
L h"K"Uv   15 A?I/[zkc	Cisv**9   22.98 tVJ}NI #	3B|?{U~   邻苯二甲酸二壬酯 1I< <`7'	CjR I!}S   DNP }S84^2 J_	tHgn-Dhzr   57、149、71 Z9rmlVU6!