[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： G{ 9p.Q  
?%RN? O(  
Z?7XuELKV  
^`96
L  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） TbY<(wrMZ  
_Py/,Ks.q  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 ? ^EB"{  
$!(J4v=X  
流  速：1.0 mL/min 5iG+O4n%  
'q#$^='o  
波  长：242 nm VI}.MnCa  
YkPc&&#  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 4
4uM:;  
bVB_KE  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 ,9(=Iu-?1  
@_gCGI>Q  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） Y7|R vLWoP  
dSD7(s!  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A 0@FZQ$-  
?!N@%R>5rN  
柱  温：30℃ D{Zjo)&tF'  
'T(7EL3$}  
R]0p L   
fM[Qn *.  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） >L\ >Th{o  
9#:b+Amzz  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 nqG9$!k^t  
D1&%N{  
附件二 < ag|
#  
ubC(%Y_k  
W/(D"[:l%  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS !
.\EU*)1  
`>M-J-J  
色谱条件： X^!n'$^u  
pwg$% lv  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Gp0H[-oF  
=T73660  
进样口：250℃，不分流进样 ?hpT"N,hF9  
w! J|KM  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） Y ^s_v_s  
RrFq"  
进样量：1μL XRZj+muTZ  
&|/@;EA$8  
流速：1 mL/min LAe>XF-5  
j-l#n&M  
质谱条件： 4LG[i}u.N  
W<f-  
接口温度：280℃ _?]0b7X  
\a<7DTV  
电离方式：EI 968<yO]  
+8<|P&fH  
电离能量：70eV M~rN17S  
kM:Z(Z7$  
溶剂延迟：7min k.."_4  
ojc m%yd  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ;JuBybJb  
<<FBT`Y [  

~=P#7l\o1   序号 ngt?9i;N	1 $m[#3   保留时间/min ]/#3 P	h@2YQgw`   中文名称 e"d-$$'e	Q)/oU\   英文缩写 \Dx;AKs	<~bvfA=   SIM离子 LOEiV
Aa`R40yl   1 >c@jl	I]-"Tw   8.265 x yrlR;Sk	P r2WF~NuO   邻苯二甲酸二甲酯 f;%=S:3	w\1K.j=>|N   DMP XC!Y {lp	R9-Uoc/   163、77 7 &iav2q
mq+x=   2 i|x C# hV	ZKJhmk   9.135 |`p DOd	_Mi*Fvj   邻苯二甲酸二乙酯 N_E)f	_~ 3r*j   DEP ^;[^L=}8$	XHm6K1mGZ   149、177 aWY# gI{
drJUfsxV   3 1-.(pA'	\"9ysePI   10.888 aZmac'cz{	xu@+b~C\   邻苯二甲酸二异丁酯 6%MM)Vj+u	]'<"qY   DIBP |21*p#>	'JJ :   149、223 eIbz`|%3
{*X|)nr   4  *LQt=~	E0eZal],   11.637 <<&SyP	(]$&.gE.F   邻苯二甲酸二丁酯 RA}Y$}^#'	"F?p Y@4   DBP "Jg* /F	1r<'&f5   149、223 .19_EQ>+
QS<)*   5 sX(rJLbD	U)SQ3*j2D   11.979 $  3R5p	WU6F-{M"?   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 h[gKyxZ/t	mnM$#%q;%   DMEP *4g:V;L	!H`uN   59、149、193 f:h<tlob
-aIB_   6 :Q >{Y	<is%lx(GDX   12.72 nPjN\Es6	0zXF{5Up   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 MW)=l | G	Ve4@^Jy;   BMPP VY "i>Ae	`6y\.6j   149、251  ehQ~+x
mf)E%qo   7 `Qo}4nuRs	Vc|uQ8Mi   13.044 ftbOvG/ I	O@? *5   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 =j S	%Dm:|><V$b   DEEP nN!R!tJPa	wT-@v,$   45、72 ex-W{k$
?<-ins   8 yaKw/vV	B5fF\N^   13.41 F5FzT^	C# 4/~+   邻苯二甲酸二戊酯 [*AWCV	>*cg K}!@   DPP yCG<qQz	nH% 1lD?:   149、237 #8[iqvE
EU"J'?   9 &9F(uk=X	'fkaeFzOl   15.552 ;c;n.o.)/#	`DPR >dd@   邻苯二甲酸二己酯 (&a<6k	"Nn+Zw43   DHXP sUP!'Av	mzX <!   104、149、76 &MlBpI
F|DKp[<]8   10 MK<VjpP0(	OZ$"P<X_"   15.694 L#`9# Q	v^lR]9;   邻苯二甲酸丁基苄基酯 B9Dh^9?L	$<UX/a\sH   BBP #&1Y!kbdd	LaZF=<w(   149、91 ~PNO|]8j
{/BEO=8q2   11 vtFA#})~	\2<2&=h?   17.153 Q ;P~'	wN)R !6   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 yj$S?B Ee	Z"?AaD[   DBEP Wsz='@XvB	1MJ]Gh]5   149、223 , m|9L{
r-YQsu&   12 HHnabSn}{q	C6"!'6 W   17.81 Rg[e~##	PYHm6'5BtB   邻苯二甲酸二环己酯 Mqh~5NM	#6H<JB   DCHP X3m?zQbhv	*>'R R<   149、167 *Yr-:s9J9
fcZOsTj   13 UUU^Y T \	Ksp;bfe   18.056 y*(YZzF	l46F3C|   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ~+np7	*@& "MZ/M   DEHP fA8 +SaXW%	4r. W:}4:   149、167 itF+6wv~
 +o   14 6\ 3k0z	X4$e2f   20.444 !T*B{+|	xiF%\#N   邻苯二甲酸二正辛酯 q&E5[/VK:	:6? &FzD`   DNOP %20-^&zZ	cf'}*$[S   149、279 rhTk}2@h
_ -\s[p5   15  #>jH[Q	 hu(K!>{   22.98 .eNwC.8i	pE/3-0;}N   邻苯二甲酸二壬酯 /v)!m&6]>	|C6(0fgWd   DNP m2uML*&O5K	gVA}?t;   57、149、71 uM)9b*Vbo

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 d`85P+Qen|  
&2Q*1YXj  
附件三 ("OAPr\2dw  
h20Hg|   
\04mLIJr9  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 k}HQq_Y(<  

Hng!'  
H'Ln P>@n#  
x/xb1"  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 r1;e 0\?`  
3{e'YD~hP  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 ' S,2  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% ,#d[ad<  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% krjN7&  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% h55>{)(E  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% a+Ab]m8`  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% [7.agI@=  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% \|t{e8}  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% hcyO97@r  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% mmP U  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% r~>,$[|n})  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% #ep
y%>  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% qyyq&  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% S_\ F
 
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% Hg+ F^2<y  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% r} W2Ak\  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10%
Oy_c  
_^\$"nw  
qZ X/@Yxz  
   !'0S0a8
 
zp4W'8  

0rE(p2  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 \x+3f  
-iN.Iuc{b_  
-<f;l_(  
XL5Es:"+?S  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 u8vuwbra!  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% uTvv(f  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% *}!MOqP  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% buMqF-j  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% HOi C  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% Bl;KOR  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% 5OP`c<  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% *nTU#U  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% 8cWZ"v  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% yy2I2Bv  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% !K0JV|-?t  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% ]<w:V`(  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% fnu"*5bE  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% -=}3j&,\R  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 8HErE<_(  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% t-e5ld~a  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 +OKA_b"wB  
X3<SP  
LxIuxt=X|p  
Ni&,g  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 cPx66Dh&  
% cU-5\xF  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 R JQ/y3  
^XtHF|%0T  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 >eTf}#s?S  
F^4*|g  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Yk(NZ3O  
D7 8)4>X  
qdg= Imx  
n:%'{}Jw  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 -K{\S2  
7!]k#|u  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， ulJ+:zwq$  
476M` gA  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 M$E8:  
EV;;N  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 -F~9f>  
D0"yZp}  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 _'o^@v:  
t2U]CI%  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 a|^-z|.  
$T@xnZ  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。
{mq$W  
ag*Hs<gi  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 f%{ ag  

.k:&&sAz  
A^Hp#b@  
#u=O 5%.  
n%ArA])_&  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： A_q3p\b  
bQN4ozSi  
?L#SnnE  
&qI5*aQ8T  
1、样品提取方法： u/:Sf*;?  
p*&LEjaVM4  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 zt?wn*_  
A`/7>'k/q[  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 F5Q.
Vh  
! tP
K"k  
NGQIoKC  
lz0]p  
2、固相萃取方法： K:50?r_-6  
;B7 |tajd  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： ^B=z_0 *  
ct/THq  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； 2qR@:^  
8>+eG
z|  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 2YEn)A@8  
S%|' /cFo  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； ?I
r6*ZyY  
yE/I)GOQjs  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 0drc^rj !  
 F<1'M#bl  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 HM x9M$  
DvKMb-*S  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 7] H4E.(l  
hTqJDP"&F  
OTm"Iwzu@  
JaTW/~ TU  
补充说明： 5 [*jfOz  
o qTh )  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 fz\Az-  
NiF*h~q  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 \(s";@  
:JmNy<  
USY^ [@o[f  
YrX{,YtiX  
{WChD&v  
>jIc/yEYKI  

G}g+2`
  
{Ffr l(*  
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;iWCV&>w  
&7cy9Z~m  
5E]I  
N gr7E  
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S;= D/)[mr  
Ma$b(4dB  
$WDa}~j~^  
>qOhzbAH{<  
<~]s+"oVc  
IRLT-  
d+l@hgz~  
rTQrlQ:@  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS wPOQy~:  
v. !L:1@I.  
色谱条件： M1^pf<!s  
V|Smk;G  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm YjAwt;%-D  
!A qSG-  
进样口：250℃，不分流进样 (X;D.
s  
h{#Hwp  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） v25]}9/C  
Jsde+G,N  
进样量：1μL E
VX*YGxx6  
e i%L[>N  
流速：1 mL/min <2^XKaS`  
F/}(FG<'>I  
2"~|k_  
cc37(=oKL  
质谱条件： w\SfzJN  
&-.NkW@  
接口温度：280℃ df9jT?l  
<+3-(&  
电离方式：EI $OGT
HJ A  
#"&<^  
电离能量：70eV 7^bde<0  
.^hk^r  
溶剂延迟：7min <36z,[,kZ@  
6O@/Y;5i  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 aWg*f*2f  
og$%`o:{  
e^%>_U  
hH.X_X?d%  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

kZU v/]Y.  
N3U.62  
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