[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

tx` Z?K[  
O0Z!*Hy  
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RSfB9)3D  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： NL^;C 3u  
Ew< sK9[o  
PF+ F^;C  
AU$<W"%R  
1、样品提取方法： F 
,;B  
ge#0Q L0K  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 PIHix{YR  
Vg^yjP{sv  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。
Dz3~cuVb  
 ^:^  
)%JjV(:  
V.e30u5  
2、固相萃取方法： /[qLf:rGI  
`l'Ine11  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： j;<s!A#  
l h?[wc  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； '};mBW4z  
9T\\hM)k  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 3F8KF`*  
k*rG^imX  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； eF(oHn,  
~Zw37C9J  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 VFK]{!C_  
1*f/Y9 Z  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 ,uD}1 G<u  
RJ-J/NhWyI  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 Rl (+TE  
I5]58Ohx  
6%V#_]  
PB# EU9  
补充说明： xs?]DJj  
1i#U&  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 0IQ|`C.  
C9j5Pd5q1L  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 ? Hbi[YD  
7 .xejz  
h[] 3 #  
u73/#!(1=H  
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e0<L^|S  
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G/8G`teAZ  
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`=f1rXhI+1  
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.v:K`y;f\(  
5:H9B  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 3q.O^`y FU  
b%<i&YY#  
色谱条件： @E$PjdB5M  
&@xixbg  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm [$Ld>`3  
B&`hvR  
进样口：250℃，不分流进样 Rt<8&.m4  
sgo({zA`i  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） Q-
%Q7n'c  
D!~-53f@  
进样量：1μL
EW{z?/  
0!rU,74I=  
流速：1 mL/min `av8|;  
{
hX.R  
tgDmHxB]0  
I;L$Nf{v  
质谱条件： =V1k'XJ  
(
=->rP  
接口温度：280℃ hZ.Sj~>7`  
mUzNrkG(G  
电离方式：EI !'B.ad  
7( eWBJfTo  
电离能量：70eV Vy{=Y(cpF2  
C+,;hj  
溶剂延迟：7min 0kpRvdEr-  
oGly|L>  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 E$34myOVf  
c&3 ]%urL  
~kYUp5f  
Y1H8+a5@  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

=ILs[p  
)~T)$TS  
rm;'/l8Y-E  
-f#0$Z/0  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 tY[y?DJ  
|xf%1(Rl@  
DJ<c  
I)Y$?"  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 QPFpGS{d  
5:s]z#8)  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 )E4COw+  
.4^Paxz  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 Mq7|37(N[  
]3I_H+hU  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 pD>3c9J'^F  
~]yqJYiid^  
Kp&d9e{ Yc  
*FAg^G&1  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 Z6*RIdD>  
"*T)L<G  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， +amvQ];?Q8  
[Ytia#Vv  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 K)14v;@  
7]^Cg;EtM:  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 ;'Y?wH[  
*dQRs
6  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 A1@-;/H3  
^U =`Rx  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 MPB6  
j@ "`!uPz  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 N!v@!z9Mu  
4"2/"D0  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 yjO7/<2  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 Rv98\VD"  
KE<kj$  
附件三 cgyp5\*>+  
@
<2d8ed  
9CB\n  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 KF_?'X0=  
KF+mZB  
,of]J|  
9t?L\
  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 ;\qXbL7  
?1peF47Z
 
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 C`QzT{6!  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% $ KB  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% @E%DP9.I  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% o_f-GO  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% b*EXIzQ  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% 7 &U&E|  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% MzkkcQLK  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% I4=Xb^Ux  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% pK}=*y~$  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% |^a;77nE_^  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% lG:kAtx4  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% UzG[:ic%  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% n p9 dM  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% {tiKH=&J  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% ztll}  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% BuOgOYh9  
A7Po 3n%Q  
1q7tiMvV-  
   Lgk  
}H> ^o9  
OHv!  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 GLMm(  
').}Nz  
\y`+B*\i  
/D&%v*~E  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 V"\0Y0  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% |1b_*G4|  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% &Mq~T_S  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% TxjYrzC  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% J%09^5:-z  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% *4+3ObA  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% 3.22"U\1:  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% ];'v8
)Y  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% Bjk]ZU0T  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% &j(+/ ;A  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% bM8If"  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% 0#w?HCx=  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% GKN%Tv:D_  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% X[f=h=|  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% \ [a%('}  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% (aD_zG=k5  

附件一： )I-?zyL  
c^)E:J/  
J8?6G&0H  
'CAukk|  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） '2J6%Gg  
8=o5;]Cg  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 H;Qn?^  
*vE C,)  
流  速：1.0 mL/min [ .uaO  
'wnY>hN  
波  长：242 nm ;/3/R/^g  
3C[4!>|  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） u0hbM9U>  
h`rjD d  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 #LgoKiP!Y  
lfeWtzOf  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） ,O{ 5   
[IA==B7  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A e`1s[ ^B  
tKG
sr
goV  
柱  温：30℃ H,` XCG  
!$#4D&T  
.c og9H'  
)/N! {`.9  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） N6%q%7F.:  
)!72^rl  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ?=rh=#  
&H{>7q#r  
附件二 -v@^6bQVp  
Wf Z#:G9  
<{kj}nxz  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS oGJI3Oh  
GssoT<Y)Z  
色谱条件： 4R6 .G
O  
k2;yl_7  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm tnntHQ&b  
0"Hf6xz  
进样口：250℃，不分流进样 QH:i)v*  
UPsh Y  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） .H"gH-I  
'1aOdEZA*  
进样量：1μL N?p$-{  
UNJ|J$T]  
流速：1 mL/min 'tc$#f^:  
TG($l2  
质谱条件： {k>m5L  
y}|zH  
接口温度：280℃ ;tj_vmZ@R  
LY"/ Q  
电离方式：EI Jyn>:Yq
(  
hFKYRZtP.8  
电离能量：70eV mu(S9  
5(,
WN  
溶剂延迟：7min 4Hu.o7  
U*zjEY:A  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 <K)^MLgN  
q4VOK 'N  

sLCL\dWT   序号 K2!KMhvQ	x3]es"4Q   保留时间/min 8K{ TRPy	poeKY[].   中文名称 "GgK,d}%	;g*ab   英文缩写 ) =sm{R%T	10{ZW@!7   SIM离子 nJlrBf_Kj
J)6f"{} &   1 W& w-yZ	` A])4q$   8.265 $xJVUV	q3#07o_dV   邻苯二甲酸二甲酯 G BV]7.	MPhO#;v   DMP /{#1w\	J*IC&jH:   163、77 *+{umfZy
g-q~0   2 v,#*%Gn`%	icLf;@   9.135  df;-E	,{!~rSq-l   邻苯二甲酸二乙酯 z 'GYU=	P]hS0,sE<(   DEP bq{":[a	OLp;eb1g   149、177 \}[{q
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u&Ze$z   6 eQBR*@x	Z<@Kkbj   12.72 ~T<y p	fFG, ^;7-O   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 /|{Yot e	S"FIQ&n   BMPP LQVa,'	hQ!slO   149、251 2mVcT3
vywd&7gK   7 tB "amv	Kfnn;   13.044 @=o1q=5@8	y7#$:+jQv   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 ^p#f B4z	Ui6f>0?   DEEP a' "4:(L	%lZ++?&^   45、72 q0Fq7rWP
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k$kq|   9 |33pf7o	8r/]Q   15.552 g#~jF	h4H~;Wl0   邻苯二甲酸二己酯 4xhV +Y	Woa5Ov!n0   DHXP N( E\	L?&+*|VxI   104、149、76 /A\'_ a|
=[(1u|H9   10 0z/tceW 'F	)v;>6(   15.694 -[i9a:eRM	soW .   邻苯二甲酸丁基苄基酯 {,.1KtrSN	&+6XdhX   BBP ]Rohf WHX	?;>s<   149、91 &tw.]3
GV6! `@<   11 15VOQE5Fl`	g[*+R9'   17.153 wfM$JYfI	[%YA42_`LD   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 m46Q%hwV	gsI"G    DBEP T=:O(R1*0	QO lm#S   149、223 @}!1Uk3u d
qw&Wfk\}   12 l?NRQTG	bRJYw6oA<   17.81 t]P[>{y	'j !!h4   邻苯二甲酸二环己酯 pAtHU(}	R/waWz\D   DCHP j.uN`cU!	sD1L  P   149、167 9.qIhg
m( C7Fa   13 ZO2u[HSO>	SDcxro|8i   18.056 _b<Fz`V	b,Ed}Ir   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 p>Ju)o	tv+q~TFB=Z   DEHP `4.Wdi-Si	t^&:45~Q   149、167 `=^29LC#
7,!Mmu   14 /R''R:j	mbsdiab#N   20.444 ?#qA>:2,	M`FsKK`   邻苯二甲酸二正辛酯 Q0gO1T	s2@N&7"u)   DNOP KA`1IW ;	l'&l!D&    149、279 +LQ 2To
iEr|?,   15 Ki^m&P 	9$~D4T   22.98 PP.k>zsx	3cT   邻苯二甲酸二壬酯 n j; KnZ	xE9^4-Px*   DNP i/C#fIB2	:7W5R   57、149、71 }=?r`J+Ev;