[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

l SuNZYaO  
uD ;T   
2t=&h|6EW  
Oj2=&uz  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： !Uhcjfq`e  
C"k]U[%{  
V9`jq$  
Ka"1gbJ|  
1、样品提取方法： q+lCA#Sx  
AJP-7PPD  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 8BnsYy)j  
EDA6b]  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 ?A 5;"  
`Z (`  
In}~bNv?  
U H6 Jvt  
2、固相萃取方法： -L2%,.E>4  
a &hj|  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： 3O?[Yhk`.  
H`jvT]  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； F6 f   
v`~eg E17  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； Dmn{ppfyb  
u!I =|1s  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； =~{W;VZt'  
BPC>  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 p|'Rm]&jb  
0t P{
K  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 h>&t
``<  
]gB:ht  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 jMQ7^(9-  
dZ'H'm;,!  
a #Pr)H  
o9AwW  
补充说明： P/doNv}iG  
gWHjI3;  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 oAxCI/  
]{ PJ  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 ^fxS=Qs+  
,NoWAmv  
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Cv;\cI "&  
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Kx\m*  
8w]>SEGFs  
`p{,C`g,R  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS &6}] v:  
'YUx&FcM  
色谱条件： RS`~i8e'  
RIQw+RG>  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm /n|`a1!  
.0zNt  
进样口：250℃，不分流进样 H!NyM}jsr  
P5*~Wi`   
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） < <v E.  
dw v( 8  
进样量：1μL t TAqln|  
?1?zmaS  
流速：1 mL/min gqje]Zc<  
}T?0/N3y&  
R7o3X,-iwn  
xm}9(EJ  
质谱条件： =rA"|=  
L7
*,v5  
接口温度：280℃ j~(s3pSCo  
GJ:65)KU  
电离方式：EI $TON`+lB  
'OIOl  
电离能量：70eV H ?Vo#/  
P.L$q e>O  
溶剂延迟：7min lSGtbSyDI  
zX{O"w  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 |mx)W}  
-~ w5yd  
s(~tL-_ K  
!V<c:6"  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

+c7e[hz  
Th\
w#%'N  
dBWi1vTF  
=3~5I &  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 A9ZK :i7  
</23* n]  
-\V;Gw8mD  
Dj x[3['  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 Ql?>,FZ  
Tu-I".d+  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 1-?TjR  
V;1i/{  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 +M.!_2t$2  
vL~j6'  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 }7Y@u
@R  
s78V\Vw3  
7G9o%!D5  
:qO)^~x  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 Xsv^GmP+  
s+E-M=d0e  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， _U/CG<n  
8WL*Pr 1I  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 _4MT,kN  
NlV,] $L1T  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 kmfxk/F}  
? {vY3~  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 GMRFZw_M  
!K319 eE  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 S((\KL,  
ra*(.<&  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 :k*3?*'K  
Udbz;^(  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 2%F!aeX  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 \'6hv>W@  
TG'_1m*$  
附件三 GL'zs8AKf  
<[Ae0UK  
e*. l6H/B  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 {(#Dou  
?bu-6pkx]  
C;#vW FE  
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#lkMr  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 O+hN?/>v  
^F/gJ3_;  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 (F9U`1~4  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% ~kM# lh7At  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% X}Heaqn  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% wJ 0KI[p(S  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% Y#[jDS(ip  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% f'501MJu  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% IpX.ube  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% &z'NQ!uV  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% UEkn@^&bg  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% yDmNPk/  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% q.xt%`@aA  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% x}\_o< d  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% Vp"=8p#k  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% I%
4)%  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% [Un~]E.'J  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% x-hr64WFK  
9i^dQV.U=  
\w6A-daD0  
   "A4 .2  
$;k2b4u  
Kw/7X[|'G  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 <3SO1@
?  
 l,lfkm  
flXDGoW  
p~evPTHnrX  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 9sId2py]W  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% 4UISuYg'  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% g~v>{F+u  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% hVl^vw7o  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% Js0hlWu  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% QG8X{'  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% 0w9[Z  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% Ug C{  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% 1@6FV x  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% i286`SLU  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% a%N
SL6  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% xu(N'l.7&  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% K'u66%wAL  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% _X"G(  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% Kjfpq!NYE  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% o5`LLVif5y  

附件一： _RbM'_y+E  
5IOGH*'U8  
B
-$?5Ft!  
W$2\GPJt  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） Shn=Q  
K;WQV,  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 pgiZA?r*<  
/RMtCa~  
流  速：1.0 mL/min :9ia|lN  
bGL}nPo  
波  长：242 nm ymqv@Byi8A  
BYMdX J  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） Z!~_#_Ugl  
L&)e}"  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 f3G:J<cL  
xok T  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） tmq?h%O>  
/huh}&NNu  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A JD0s0>q_  
y[.lfW?)  
柱  温：30℃ X$\CC18  
W[DoQ @q  
:Ob^b3<t  
;`pIq-=  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） C4ktCN  
qzO
Rv  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 bXOM=T  
<m~8pM  
附件二 QR(;a:  
N.Q}.(N0  
sl@>
GbnS  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS *PFQ  
0uM&F[.x@g  
色谱条件： '`<Fys&:  
Nr*X1lJ6  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm \k"CtzoX  
KkpbZ7\@  
进样口：250℃，不分流进样 d8 Jf3Mo  
xb0,dZb  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） #QcRN?s  
T!41[vm(  
进样量：1μL c[ 0`8s!  
ZADMtsk  
流速：1 mL/min M,li\)J!&  
7(tsmP  
质谱条件： =GF=_
Ac  
qsbo"29  
接口温度：280℃ +By '6?22  
h\3-8 m  
电离方式：EI 2YW;=n  
Khc^q*|C)  
电离能量：70eV },JJ!3  
kVKAG \F  
溶剂延迟：7min _Q I!UQdW  
>Q=^X3to  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 8t*sp-cy|  
vZTXvdF  

DWKQ>X6   序号 ur'<8pDb$	S5TVfV5LI   保留时间/min ;NRh0)%|o	tjXg   中文名称 kMch 	)>FAtE    英文缩写 'M"z3j]m-,	Zwc&4:5%   SIM离子 L!Y|`P#Yr
K _VIk'RB   1 Q;3`T7	@ ,X/Wf   8.265 p+=zl`\=|	3:jxr   邻苯二甲酸二甲酯 4Y5 9^	Cty{   DMP .S, E=	PR|z -T   163、77 5?H8?~&dz
*yT>   2 '8)kFR^9	tx d0S!   9.135 *y?6m,38V	AR( gI]1   邻苯二甲酸二乙酯 9soEHG=P	3m75mny   DEP G@Z%[YN w	d6*84'|!   149、177 o_Z 9\'u
:|kO}NGM   3 ZKrK>X	:Ef!gpS}?R   10.888 N KgEs	C ibfuR   邻苯二甲酸二异丁酯 gQik >gFr	:T$}@& -   DIBP ,9 ^ 5	hU(   149、223 ! weYOOu
|af<2(d   4  gHUW1E	Y uZ    11.637 z&GGa`T"	 h;K9 }w   邻苯二甲酸二丁酯 AsZyPybq	2(D&jL   DBP t.O4-+$ig	[qt^gy)   149、223 u q y~hY
}S&SL)   5 :Ws3+OI'm3	ae1fCw3k   11.979 `0 F"zu	->#7_W   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 pcl_$2_	b o"I:)n;   DMEP Wl2>U(lj	&\K#UVDyhh   59、149、193 Q&\k"X1
t 8[:}[Jx   6 mnia>; 0H	1$W!<:uh   12.72 & Hqu`A/^	ZjK~s)RC   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 N@$%0!	BTyVfq sx   BMPP ;=OH=+Rl	%U7B 0-   149、251 P>-,6a>
B(LV22#   7 KoJG!Rm	@`D6F ;R   13.044 )g_zPt	V bOL Tc   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 wtS*w	FSs$ ] d;   DEEP 4ZpF1Zc4B	gEHfsR=D6   45、72 t`t:qko
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ZYA.1VrM   9 Msa6yD#	+>!B(j\gx   15.552 `Ge+(1x	ra9cD"/J &   邻苯二甲酸二己酯 :zj9%4A	`s>UU- 9   DHXP T}n}.JwU	Zp7yaz3y   104、149、76 f=:3!k,S
0^GbpSW{   10 <#+oQ>5s	On{~St'V   15.694 I?_E,.)[ I	yWj9EHQU[   邻苯二甲酸丁基苄基酯 F,*2#:Ki	a @6^8B?w;   BBP hVMYB_<~	mO#I nTO   149、91 QQ@9_[N
l1&5uwu F   11 XTV0Le\ f	qmEo qU   17.153 `mrCu>7	[UoqIU   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 u#FXW_-TK	p5-<P?B   DBEP !Av1Leb9$	`E W !-v)   149、223 <(YF5Xm6$h
0wFh%/:   12  P?J kP	x> \Bxa8   17.81 Vv4H:BK$	v9rVpYc"   邻苯二甲酸二环己酯 X*O9JGh	b_vTGl1_6   DCHP sPCMckt	~`R1sSr"   149、167 rk,p!}FqL
e{C6by"j{S   13 Y6ben7j%-	e<5Y94YE   18.056 `^##b6jH	NHkL24ve   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 3ATjsOL	6f wY$K\X   DEHP $(q8y/,R*-	Z$;"8XUM   149、167 ]d'^Xs
MF.[8Zb   14 D1X{:#|	@"8R3BN   20.444 0IzZKRw	)zJ=P F   邻苯二甲酸二正辛酯 -P#nT 2	( V4G<-jG   DNOP   cht	:[?!\m% 0   149、279 p&5S|![\
Nza; O[   15 P6we(I`"2	'w6hW7"L   22.98 ohplj`X[21	_BwKY#09Zp   邻苯二甲酸二壬酯 ' =}pxyg	yM|g|;U   DNP (HJ$lxk<2h	GoL|iNW`   57、149、71 dFMAh&:>