[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

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kk/+Vx~  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： Y0L5W;iM  
]EVe@  
dp UdFuU"  
_8x'GK tU  
1、样品提取方法： 5v!DYx  
qr'x0r|<>  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 Ere?d~8  
wuBlFUSg  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 "RV`L[(P*k  
5#TrCPi6A  
QD.zU/F~>  

 Qq,i  
2、固相萃取方法： *Fa)\.XX  
0On?{Bw  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： w?]ZU-  
_'!aj+{  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； :r1;}hIA9  
82j'MgGP  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； Zu\p;!e  
<Vz<{W3t  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； [leW/2i  
S304ncS|M  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 :z B}z^8-  
{F'Az1^I=  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 'Pf_5q  
DC&A1I&  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 1<`
9HCm  
Xad*Iulj  
\ZS\i4  
4GVNw!V  
补充说明： eK9TAW  
~wTX>qV  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 N0Gf0i >  
J/t!-!  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 R*yU<9Mm8  
2Pp&d>E4  
O6iCZ  
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SH8/0g?  
KhaYr)&~  
4TRG.$2[  
Xl%0/o  
MZv\ C  
/8gL .i$  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ?IYY'fS"  
]tt} #  
色谱条件： ?S#\K^  
GJQc!cqk  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm u Jow7-FD  
HW_& !ye  
进样口：250℃，不分流进样 RA/EpD:H  
#V_GOy1-  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） Of7+/UV  
J !#Zi#8sF  
进样量：1μL jX */piSq  
X>l*v\F9  
流速：1 mL/min 8b&uU [  
mN}7H:,  
Px;Cg 6  
X[hM8G  
质谱条件： *e4TSqC|  
l(kr'x  
接口温度：280℃ (xT*LF+  
c@du2ICUc  
电离方式：EI =uV,bG5V1  
F[E?A95W  
电离能量：70eV 7_)|I? =0d  
2{o10eL  
溶剂延迟：7min 32>x^>G=>  
aiux^V  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 :5# V^\3*  
ExrY>*v  
n0fRu`SNV  
HeS'~Z$  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

l,y^HTc}7/  
+by|  
k3yxx]Rk/  
p qfT\Kb>  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 #^V"=RbD  
S7Fxb+{6D  
xGA0] _  
X>>rv lDN  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 ISmnZ@  
5?MvO]_  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 ZZ5yu* &  
i=T/}c)  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 8<xy *=%  
IM/\t!*7  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 j@2 hI,+  
`h'^S,'*  
$;1~JOZh  
0&x)5^lG  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 H NPr| (  
,3j*D+  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， 0)NHjKP  
i/L1KiCLx  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 1\p
[mN  
SUw{xGp  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 +uA<g`4  
g`j%jQuY  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 
xOT3>$  
ZBGI_9wZ  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 }&j&T9oX  
;kbz(:wA  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 <L-L}\-I"  
sxqXR6p{  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 q\,H9/.0k  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 7h9[-d6  
_q$LrAT  
附件三 Rk jKIa  
D7WI(j\  
/z)3gsF  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 CziaxJ  
c."bTq4tJ  
$dZ>bXUw:  
cbu nq"  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 ]o[X+;Tj|  
A eGG  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 z>mZT.  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% uhTKCR~  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% J)$&z*!  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% /zl3&~4  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% sP6 ):h  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% @)OnIQN~  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% !cN?SGafZI  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% ZRXI?Jr%  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% FylWbQU9  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% 9E
q^B 9(  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% 0NL :z1N-h  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% '^Pq(b~  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% FasI'Ulk  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% ?vZWUWa  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% /Y;+PAy  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% ((-aC`  
I`/]
@BdgY  
r@|R-Binz  
   jv*Dg (  
8BHL  
jZa25Z00  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 z8g=;><  
NU|qX {-  
kXigX
-  
O-i4_YdVt  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 Z/xV\Ggx  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% k - FB  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% S<V-ZV&_:U  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% 3*G5F}7%=  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% TS1pR"6l  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% u',b1 3g(  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% >xZ5ac I  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% >Dxe>Q'df  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% \Ps5H5Qk;  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% nMkOUW:T!  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% |hc\jb  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% N0nj`  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% =)(0.E  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% d @m\
f  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 0t+])>  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% ##v`(#fu  

附件一： P1G;JK  
N!lQ; o'  
LS%;ZKJ  
p N+1/m,  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） fx=HKt  
,V &RpKek  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 ZTzh[2u*  
@+&QNI06S  
流  速：1.0 mL/min <sor;;T  
VRA0p[  
波  长：242 nm Al^h^ 9tJ  
}0 b[/ZwQ  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） !cA4erBP  
$;As7MI  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 A5kz(pj  
SwdUElEp  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） n+H);Dg<8  
-Ou@T#h"  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A /5r!Fhx  
-eQ70BXvB  
柱  温：30℃ eG\`SKx_  
i5CBLv  
\zv?r:1t  
6U[bAp  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） nWb 0S  
mIm.+U`a2  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 E'wJ+X9 +  
-1<*mbb0  
附件二 $pGdGV\H  
J-)9>~[E<  
,+hH|$  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 0tyS=X;#e  
;!H|0sv  
色谱条件： eh5j  
fBRU4q=^T  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm yo@S.7[/  
di5>aAJ)D  
进样口：250℃，不分流进样 GfMCHs   
B
y7?<A  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） |NoTwK  
vl
67Xtk4  
进样量：1μL d?Y|w
3lB  
Y!C8@B$MR3  
流速：1 mL/min r3_O?b  
g{d(4=FM  
质谱条件： Gi=s|vt  
&?)? w-$p  
接口温度：280℃ !um~P  
!`h^S)$  
电离方式：EI YooPHeQ  
Wp2$L-T&$  
电离能量：70eV &Fg|52  
61 8k-  
溶剂延迟：7min [0M`uf/u  
s'4%ZE2Dr  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 LuE0Hb"S8  
vXLGdv::  

a9N$I@bi]   序号 9@^N* E+	nIEIb.-   保留时间/min >Hwf/Gf[	x,j%3/J^2   中文名称 fJK;[*&Y	U7xKu75G1   英文缩写 otmyI;v 7<	;-quK%VO!   SIM离子 ,?c=v`e
*(o^w'5   1 :v%iF!+.P	5|g#>sx>`q   8.265 :MILOwF	*n`8 -=   邻苯二甲酸二甲酯 vFK!LeF%	)%bY2 pk   DMP x?2y^3<5	WZf}1.Mh*   163、77 k7=mxXF
r~sQdf   2 t**o<p#)f	*!u a?   9.135 }zqYn`ffD	X-J<gI(Y   邻苯二甲酸二乙酯 e]u3[ao	J2Eb"y>/;   DEP NT L`9b	^n8r mh_%   149、177 tJ@5E^'4
x@480r   3 :s`\j J	H}B%OFI\+   10.888 $E]W U?U	by8~'?   邻苯二甲酸二异丁酯 1C'_I	e4/Y/:vFO   DIBP D!d1%hac	Au-h#YV   149、223 lboi\GP|
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<n-}z[09   5 -$2a@K,i	.;$Ub[    11.979 aJ/}ID	LpYG!Kl   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 {KGEv% 	yCvP-?2   DMEP /Bw <?:	T@%\?=P   59、149、193 m!K`?P]:N
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D8<C7   8 0|RofL&o	+4.s4&f)   13.41 y-db CYMc	|82q|@e   邻苯二甲酸二戊酯 ;U|(rM;	%(1OjfZc   DPP W!wof-1	-;7 xUNQ   149、237 `*3A7y
 E.h   9 \ZZ6r^99	u%~'+=   15.552 t1Fqq4wRi	bzFac5n)Q   邻苯二甲酸二己酯 R iLl\S#	qWhW4$7x   DHXP 8"j$=T6;W	F9 r5 Z   104、149、76 yv4x.cfI2W
k+9F;p7   10 R4 '.QZ-x	@rYZ0`E9   15.694 nX (bVT4i	%@PcQJg U<   邻苯二甲酸丁基苄基酯 SSI> +A	 vc: kY   BBP r ~{nlLO}	cIO/8D#zU   149、91 12 )
`lY-/Ty   11 eYv^cbO@:	w?D=   17.153 w8+phN(-M	*fY*Wy9   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 <1vogUDW	]#N8e?b,   DBEP V~Guw[RA	^Cp;#|g,   149、223 MNh: NFCRA
E\2 f"s   12 =m|<~t	 de8xl   17.81 7iy2V ;}	xJ^B.;>   邻苯二甲酸二环己酯 1q ZnyJ	6R2F,b(_   DCHP ?J|	2L.6!THG   149、167 Wa!C2n B
(j%"iQD   13 i: & $I=	Ln4Dq[M   18.056 bdBLfWe	/BS yanro   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 /mn'9=ks	LmK Y$~5P   DEHP nwi8>MG	94lz?-j   149、167 )'/xNR
F~GIfJU   14 aC3Qmo6?m	!^aJS'aq   20.444 o#-^Lg&	8&y#LeM1TT   邻苯二甲酸二正辛酯 VP }To	fHgvh&FU   DNOP qKI)*o062	/!pJ"@   149、279 GjX6 noqT
Lr*\LP6jx3   15 (~?p`g+I.P	AK&=/[U>   22.98 2CV?cm	5Rae?*XH   邻苯二甲酸二壬酯 9`7>"[=P	U,Fyi6{~   DNP k\-h-0[|	H4<Q}([w   57、149、71 .Gb!mG