[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： a.g:yWL\  
C AF{7 `{  
)V*V

  
4O3-PU>N  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） (cqVCys  
Tg.}rNA4  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 s:#\U!>0`  
F]~>qt<ia  
流  速：1.0 mL/min )F) (Hg  
IXef}%1N?  
波  长：242 nm V0x;*)\PYm  
G\ht)7SGgf  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） UMbM3m=\  
3ud_d>  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 <wZ2S3RNA  
.v{ok,&  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） yy%'9E ldc  
r#%z1u  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A i/%+x-#  
Io81zA  
柱  温：30℃ _Fz]QxO  
eI7 FbOze  
n5~7x   
|ZAR!u&0  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） axSJ:j8  
qBKRm0<W  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 PYYK R  
s^@?+<4:  
附件二 0GtL6M@pP  
arR9uxP  
6 K+DgNK  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS i:6`Rmz1.  
Ua>lf8w<  
色谱条件： g ni=S~u  
^usZ&9"@P  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm [z2XK4\e1T  
pSjJ u D  
进样口：250℃，不分流进样 Rqi=AQ  
3@qy}Nm  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） X"4:#s  
VH.mH<  
进样量：1μL WR&>AOWAD  
p#5U[@TK  
流速：1 mL/min Fgx{ s%&-  
|WiE`&? xP  
质谱条件： eb6Ux  
Jy#c
6
 
接口温度：280℃ b^*9m PP  
[>2iz  
电离方式：EI |/qwR~  
Xkqq$A4  
电离能量：70eV eD|p1+76  
D*%?0  
溶剂延迟：7min WE{fu{x  
^n?`l ^9c$  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 R)@2={fd}  
@A5'vf|2;.  

!K8Kw W|X   序号 3 T1,:r	;u8a%h!   保留时间/min #n7F7X	E0*KKo%   中文名称 |AQU\BUj	+a'LdEp   英文缩写 68UfuC	T4nWK!}z   SIM离子 S}b^_+UbP
U*:ju+)k   1 Dr)jB*yK	l*$~Y0   8.265 dBkM~ "	3L CT-rp   邻苯二甲酸二甲酯 %a?\y_a=b	mKqXB\<   DMP ~dC. ,"	@ 6 a'p   163、77 m^~5Xr"
va:<W H   2 jl>TZ)4}V	*r[V[9+y-D   9.135 Y#Q!mbp	c_S~{a44Ud   邻苯二甲酸二乙酯 {d*OJ/4	=R'O5J   DEP d5>&, {o7N	g) ^s+Y   149、177 i0$*):b
8U(o@1PT   3 h2T\%V_j	k9OGnCW\   10.888 1s@QsZ3	,lA@C2c   邻苯二甲酸二异丁酯 O+|C<;K	dt:$:,"    DIBP qE[YZ(/f0&	P'OvwA   149、223 PBb&.<
U< Xdhgo?   4  B8T$<	}q@#M8b   11.637 ] 5S`y{j1	`"&Nw,C   邻苯二甲酸二丁酯 L cpe*C x-	:}v-+eIQ   DBP tj@ (0}pi4	$!.> )n   149、223 %|(c?`2|
4kM/`g6?,q   5 v{a%TA9-	M/Yr0"%Q<.   11.979 jn V=giBu	dyWp'vCQs\   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 v<!S_7h	:'Qiwf&   DMEP \tI%[g1M	F(HfXY3   59、149、193 )Fv.eIBY
~ 1h#   6 K?^;|m-	.*z S2z   12.72 FXof9fa_B	wX"hUu   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 O^@8Drg c	AFz:%m   BMPP ")|/\ w,	b{ A[\ "   149、251 ;>J!$B?,
Tru{8]uMH   7  q#K{~:	5p0~AN)   13.044 N"S`9B1eD(	!vSI"$xd   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 ZoG@"vr2	11H`WOTQF   DEEP Ebnb-Lze,	w 3t,S3!   45、72 jl,gqMn"V
@kYY1mv;   8 }LUvh	uzd7v,   13.41 o0H^J,6gV	S:xXD^n#H   邻苯二甲酸二戊酯 UTA|Ps$	'@n"'vks(\   DPP N*IroT3	TegdB|y7O   149、237 UF9={fN1
x\yM|WGL   9 (j8*F Bq	(Jq m9   15.552 S>lP?2J	vn.5X   邻苯二甲酸二己酯 |~9jO/&r	W{NWF[l8O?   DHXP MW wqon|	` nX,x-UM   104、149、76 < F5VJ
9/"&6,   10 A rE~6X	ZK4V-?/[6   15.694 $HwF:L)*	\O*ZW7?TJ   邻苯二甲酸丁基苄基酯 PTHxvml	T4x%3-4;   BBP xWLZlUHEu	c@>ztQU*   149、91 Ry[7PLn]
+1#;s!e   11 Gd!_9S`68	{]Mw uqn   17.153 m 70r'b]	K yIUz9$   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 548L^"D	P}'B~~9W   DBEP bV:<%l]	]9_t to!/   149、223 ebEI%8p g
NJJ=c h   12 r5[pT(XT]	}r1 8Y6   17.81 z}} P+P/	'<,Dz=   邻苯二甲酸二环己酯 ^$dbyj`	] 0L =+=w   DCHP m*1	iN[6}V6Sm   149、167 E"[p_ALdC
a/s5Oit2'X   13 c?<)!9:	22y SMtxn   18.056 (!b)<V*	L1+s0g>   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 #:[F=2@,A	uDJ;GD[yc   DEHP og8hc~:ro	e*`ht+   149、167 ]Ue aXwaU
7jxx,#I:   14 vP#*if[V5	Odw'Ua   20.444 )2l @%?9	:_xfi9L~W0   邻苯二甲酸二正辛酯 i?b9 zn	\p.yR .   DNOP nql9SQ'\\	L#'XN H "   149、279 M:oM(K+
Eq tL&UHe   15 ?Be}{Qqlg	gjz-CY.hz   22.98 _[E+D0A	H"UJBO>$   邻苯二甲酸二壬酯 yZ[g2*1L	T\$i=,_$   DNP w< Xwz`O	N8Zz6{rp   57、149、71 $Z;/Sh

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ,!#Am13  
6TP /0o)  
附件三 2"IV  
YYWD\Y`8  
@j!,8JQEd  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 GA^hev  
K*~{M+lU7  
V*vQNPey  
qG9a!sj   
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 ?;XO1cs  
.?Eb{W)^br  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 ..N6]u  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% E7X6RB b  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% 4Mt3<W5  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% ,/f\  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% &~:EmLgv  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% "laf:Ty1  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% /YJo"\7  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% i}m' #b  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% "r^RfZ;  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% +SFFwjI  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% }qWnn>h9xv  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% }a"=K%b<\  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% u62H+'k}F  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% ;h Q[-  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% ilL%  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% kFjv'[Y1N  
?dJd7+A  
H9WYt#  
   ^\PRzY  
Ou
[`)|>  
$}vk+.!*1  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 /Xi21W/  
c#x~ x  
+pYgh8w@  
(rFkXK4^J  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 4}C \N  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% 6wpW!SWD  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% $'l<2h>4  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% _N;@jq\q  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% l^I?@{W  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% }Bv1fbD4U  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% 8b0j rt  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% :.=:N%3[  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% u$tst_y-  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% iZk4KX  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% z~f;}`0  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% t >quY$}4  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% L[PqEN\i  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% Z:^<NdKe  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% K"[jrvZ=  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% 27R4B O  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 8t >nL  
![j?/376  
bn6WvC3?  
CWw#0  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 kBg8:bo~  
GYwU3`{  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 (rm*KD"]  
omzG/)M:O  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 ce:p*  
W!t
=9i  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 h yK&)y?~  
T7
~
H|%  
7!U^?0?/  
vb`R+y@  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 zd|n!3;  
nM
|Cv  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， s>*xAIx  
w)C5XX30;  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 ;2P  
/mXxj93UA  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 Swr4De_5  
_ee<i8_Va  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 F1meftK  
?N^1v&Q  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 &~=r .T  
Al=ByX@  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 6?'7`p  
1ktxG1"1  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 Z&O6<=bg!  

jq~`rE h9  
[:X@|,1V!L  
3&-rOc
 
+<bj}"  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： H{}&|;0  
Nc+0_|,  
/zIG5RK>  
+5y^c|L0  
1、样品提取方法： VzG|Xtco[  
ucl001EK  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ;.h /D4  
S#ryEgc]  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 D,IT>^[^7  
I_1?J* b4k  
nlv,j&  
H;`F}qQ3  
2、固相萃取方法： Gamn
,c9  
Z}O]pm>=G  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： &g?GF\Y  
i[z 2'tx4  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化；
J`g5Qn@S  
f`4=Bl&"{  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； \]>821r  
3nA^s"#p  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； i&DbZ=n2  
]v<8l4p;  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 .qE  
M[I=N  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 pCkMm)2g!  
}wo:1v8J  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。  -+F,L8  
+aOev kY]  
v,n 8$,  
3^KR{N p  
补充说明： Zf>:h   
t a95]|z"j  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 '-myOM7  
hXFT(J=  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 5ppr;QaB  
}alq~jY  
0(o2<d7  
Qu#[PDhb  
@D[+@N  
N5W!(h)  
'hu'}F{  
S['rTuk  
<FR!x#!   
qsEFf(9G  
VI|2vV6?  
g?iZ RM  
;Tk/}Od!VN  
``]NB=N}{1  
Za ?BpV~  
+BM[@?"hrh  
GB Vqc!
d  
U:@tdH+A7  
XL44pE m  
?.-+U~  
6uUzky  
rmC7!^/  
ru/{s3  
f`rI]v|@  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS :)4c_51 `  
JSylQ201  
色谱条件： hpbi!g  
wSM(!:o
n5  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm eHIcfp@&  
)lz)h*%#  
进样口：250℃，不分流进样 |+[Y_j  
]Nssn\X7  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） e7-IqQA{3C  
M^e}w!U  
进样量：1μL 1D!MXYgm1b  
3xdJ<Lrq  
流速：1 mL/min J,=ZUh@M  
O.\\)8xA  
D6fd(=t1Z  
Jp^#G2  
质谱条件： w8 :  
9%"\s2T  
接口温度：280℃ a({N}ZDo  
f87XE";:A  
电离方式：EI p8?"}  
W:9l"'  
电离能量：70eV .yD 6$!6  
5Fj9.K~k  
溶剂延迟：7min {^:NII]  
R9"}-A  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 G$QN_h,}  
yx*<c#Uf  
BpX`49  
@0NWc c+  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

Br42Qo2"T>  
SXO.|"M  
{c O8q }L  
FUJ<gqL