[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

`P#8(GU  
b6]e4DL:R  
9W$mDw6f  
Z5yt]-WN&  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： 9*f2b.Aj  
GCZu<,  
OCvml 2 vP  
B#;s(O  
1、样品提取方法： $>nkGb%Kp  
?G2qlna  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 nLzX Z6JlU  
YK(XS"Kl  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 2O}s*C$Xav  
U`?zC~  
,Zf :R  
6R3"L]J  
2、固相萃取方法： N]3-L`t  
f\U?:83  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： awj}K  
F^/~@^{P  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； "jkw8UVz  
XL"v21X  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； U|y;b+n`  

Vsm%h^]d  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 4 L~;>]7  
hAxuZb7 ?  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 Kj1#R
 
r* /XB0  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 ^?S@v1~7d  
uI:3$  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 C&s }m0R  
N mjBJ_G  
h C`p<jp/  
\$\(
9!=  
补充说明： =iN_Ug+  
~\s &]L  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 aFc'_FrQ  
"YvBb:Z>  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 >_%g8T'  
9NoPrR=x1  
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CvSG!l.6f<  
{1&,6kJF&9  
(Jr;:[4XC  
SmEd'YD!J  
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c oz}VMp  
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@G{DOxE*  
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J}u1\Id%  
z,P7b]KVe  
h--!pE+  
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"MN'%"/  
=w>QG{-N  
K;lC#  
d(XWt;KK  
n-_w0Y  
56dl;Z)  
5. i;IOx  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ~K`blW
47  
x.RZ!V-  
色谱条件： 8%Lg)hvl  
gy.; "W  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm G39t'^ZK*#  
[<hiOB  
进样口：250℃，不分流进样 uwJkqlUOz  
v:'y&
yS  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） y5I7pbe  
bmLNR  
进样量：1μL U,N4+F}FR  
&IPT$=u  
流速：1 mL/min w}iflAnjq  
ts ] +W!:  
\hz)oC  
+=O:z *O  
质谱条件： <"-s N  
],LOkAX  
接口温度：280℃ nv={. H  
c;WS !.  
电离方式：EI ]b[3 th*  
\"Np'$4eu  
电离能量：70eV giPyo"SD  
$wBUu  
溶剂延迟：7min KMZ% 1=a  
4|~o<t8  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 2nf{2edC  
v +7<}  
RxAZ<8T_  
lK{h%2A\b  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

aK'BC>uFI  
H>2)R7h  
BjSLbw-C  
c1c8):o+V  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 x139Ckn  
vtq47i  
Ft@ZK!'@  
I.1(qbPkF+  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 &Z+.FTo  
?Lr: >  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 .b<wNUzP  
c`#4}$  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 6/|"y  
D!bi>]Yd  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 w)Y}hlcq  
P1 "g62R  
/gE9 W  
$)7Af6xD  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 P)hawH=  
MZSyu  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， /Pa<I^-#  
BsN~Z!kd  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 0
"=}d y  
7>|p_o`e  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 +4Lj}8,  
n0ls a@l  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 2v\-xg%1  
.ZOyZnr Z  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 K?aUIkVs  
;V3d"@R,  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 j<*`?V^  
Mt`XHXTp  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 _a,XL<9I  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 Ke ?uE  
[)3 U])w/  
附件三  4Z}bw#  
t%U[\\ic  
%]ay
W$4  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 QklNw6,  
]VWfdG  
Fd[h9 G  
;x-H$OZX  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 sdf%  
U+;>S$  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 YvruK:I  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% h1XMx'}B  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% Hl3
)R*&'J  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% gKN}Of@^1  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% ADGnBYE  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% n}A?jOSAe  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% xP/OsaxN  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% e3eVvl5]  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% e40udLH~x  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% )C {h1 `  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% gF[6c`-s  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% dL_QX,X-]  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% l"J*
)P
 
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% \=!H2M  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% TD lZ!$g(  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% r6`\d
k  
+z\\VD  
vsKl#R B  
   qZaO&"q  
x>%joKY[
 
~m=$VDWm  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 R" *R99  
W;q+,Io  
d$K=c1  
'M8aW!~  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 Cxm6TO`-;  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97%
.+yW%~0  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% +I52EXo  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% o.Oq__>$H  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% >)Gd:636+  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% cy|%sf`  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% dl0FQNz8@B  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% eA=WGy@IcN  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% {%b }Z2  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 6~8F!b2  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% &yIGr`;  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% uzBz}<M=  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% Y3',"  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% ".U^ifF  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% '6-$Xq0^E  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% kV&9`c+  

附件一： *D,T}N  
k;sUDmrO  
!ZRV\31%  
:|a[6Uwl\V  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） b}fH$.V@  
$)U RY~;i  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 LE;c+(CAU  
+mJAIjH  
流  速：1.0 mL/min q45n.A6a  
VD4(
  
波  长：242 nm 'G&w[8mqY  
K$4Ky&89  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） >">-4L17m  
c5JxKU_  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 ;aSEv"iWX  
y@F{pr+dA  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） ~MOIrF  
ig6F!p  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A Ls( &.  
eKt~pzXwm  
柱  温：30℃ :AL nm0d  
p~qdkA<  
fnB[b[  
NbH;@R)L  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） u{J$]%C   
|Y4c+6@_  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 \Cx2$<8  
*jM]:GpyoU  
附件二 dSkMA  
x.8fxogz  
{\hjKP   
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Ir#]p9:x  
g8kS}7/  
色谱条件： 42M_ %l_  
|yS  %  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm [4w*<({*  
M0yv=g  
进样口：250℃，不分流进样 .+A)^A  
+-C.E
 
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） x$;RfK2&p  
{]2^ b)  
进样量：1μL fV@[S  
"AU.Eh"-1  
流速：1 mL/min XLC9B3Jt  
}f;WYz5  
质谱条件： 3m= _a  
f`:GjA,J$  
接口温度：280℃ md*U  
:h5G|^  
电离方式：EI <4+P37^~  
4^uSW&`;/  
电离能量：70eV dpTsTU!\  
&y5"0mA  
溶剂延迟：7min uG^CyM>R`  
<Cv(@A->  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 wkM1tKhy/  
H"FK(N\  

y6nP=g|')>   序号 m,lZy#02s3	~Jk&!IE2   保留时间/min 6;Z-Y>\c	j|t=%*   中文名称 KLyRb0V	riDb!oC   英文缩写 fzIs^(:fl	/eI|m9ke   SIM离子 3YHEH\60^
DZSS   1 $G".PW c	=Hg!@5]H   8.265 V&*IZ t&	~CNB3r5R   邻苯二甲酸二甲酯 y bhFDx	@IL04' \   DMP M& Z Kc	+F)EGB%LXs   163、77 $gl|^ c\
%Psg53N   2 v3DK0MW	B ~v6_x   9.135 fEBi'Ad	YuhfPa   邻苯二甲酸二乙酯 F@<cp ?dR	-C2!`/ U   DEP /we]i1-9	2bCfY\k   149、177 "~VKUvDu
^li3*#eT   3 >,,`7%Rv	Kb]}p   10.888 l$5nv5 r	#e.x]v:   邻苯二甲酸二异丁酯 Gd|kAC g	^Zvb3RJg   DIBP a(~ X	-0xo6'mD   149、223  kMW9UUw
;i.MDW^N   4 ?Sh"%x	p8XvfM   11.637 |11vm #	%h(%M'm?   邻苯二甲酸二丁酯 ]["%e9#aX	D?%[du:V   DBP =}tomN(F~[	?7pn%_S   149、223 k?Hd W(HA
"*/IP9?]   5 t$,G%mi cj	2%fzRXhu%   11.979 wbOYtN Y@	\:s%;s51   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 %Iflf]l	<sm"3qs"_   DMEP eD(5+b m	f?^-JZ   59、149、193 E<tR8='F
'MX|=K!C   6 OAiW8BAe	A{-S )Z3}   12.72 H;_Ce'oU(	3B%7SX   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 3^&`E}r	QPLWRZu@   BMPP s&o9LdL	6y Muj<L   149、251 \hI?XnL #
s}Go")p<:   7 OMmfTlM%	3k>#z%//   13.044 WdS1v%	>#mKM%T2MJ   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 0]DX KI	XZ$g~r   DEEP {*CG&-k2D	u}R| q   45、72 JDnW BEV
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#iD`Bg!VXc   9 FB~IO#E8W	?%Pi #%P   15.552 _(@Vf=t	lj*=bK   邻苯二甲酸二己酯 ZtI@$ An	BUBtK-n~"3   DHXP yW}x	ae+*gkPv8   104、149、76 D<^K7tJui
Gfle"_4m8   10 ;Z&w"oSJ	6.3qux9   15.694 *nY$YwHB	,LDdL   邻苯二甲酸丁基苄基酯 6"o@d8>v	h] ^= y.Q   BBP xcXnd"YYE	t[bZg9;   149、91 ;#dzw!+Y
I- WR6s=   11 <ta#2	e\H1 IR3   17.153 MVe4[<	j{H ,{x   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 @DCw(.k*	9{n?Jy   DBEP !l#n.Fx&3	+>o} R?xj   149、223 sWX\/Iyy2p
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7(oX1hN   14 ,J63?EQ3	V`/D!8>   20.444 d|RqS`h ]	bXw !fYm&   邻苯二甲酸二正辛酯 l#;DO9	>m-VBo   DNOP " A}S92	1"4Pan   149、279 f 0lpwwe
jrKRXS   15 <V~B8C!)	aA|<W g   22.98 #BZ2 %\	{|E'   邻苯二甲酸二壬酯 @ gv^	C;UqLMrOI   DNP hT0[O	hn-!W;j   57、149、71 wigs1