[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

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J.Fy0W@+k4  
fq<JX5DER  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： Me2qOc^Z-  
tl"?AQcBR  
)8&;Q9'o  
%3Tz%>n  
1、样品提取方法： HY2*5#T  
?:DUsg  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 <^d a-b>C  
f!Mx +ky  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 Sp/<%+2(  
N~|Z@pU"  
N4)ZPLV  
{RC&Ub>  
2、固相萃取方法： -?p4"[
 
F1u2SltR
 
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： }D[j6+E  
3IG<Ot9  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； y.$Ae1a=  
s63!]LDr  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； [`kk<$=,&  
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EnLZ  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； G%ZP`  
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3)tm;  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 o V pq*"  
jG{OLF6 !  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 JwQ/A[b  
( 8X^pL  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 )|/%]@` N  
Lg~ll$ U  
[ ebk u_  
~1{ppc+  
补充说明： O?O=]s u  
%>$Puy\U  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 t3h){jZ  
je5[.VTM  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 - AU{Y`j  
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I I+y  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS <Gi%+I@szl  
N)H "'#-  
色谱条件： e @Lxduq  
.9rYBy  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm #wI}93E  
`m 7<_#Y  
进样口：250℃，不分流进样 #i[:oC6m:  
mGjB{Q+  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ~5f&<,p!  
jk9f{Iu  
进样量：1μL |O{N_-];.  
)G/bP!^+(  
流速：1 mL/min m+<&NDj.  
7q?ZieR  
[';o -c"!  
q)?%END  
质谱条件： 79T_9}M  
ZcN0:xU  
接口温度：280℃ y2A\7&7  
'Z{`P0/^o`  
电离方式：EI Kxsd@^E  
^E70$yB^  
电离能量：70eV 7{#p'.nc5  
)s!A\a`vEd  
溶剂延迟：7min iC#a+G*N_M  
T9yI%;D  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 Zu x L2W  
QbJ7$,4  
{]IY;cL  
C. .|O  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

3Dr\ O_`u  
Y~Uf2(7b5  
M&iXdw&  
'l < #;{  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 )P:^A9&_n=  
'|^:,@8P9  
=79R;|5  
:OY~Q3 @  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 cj8cV|8@  
&&X,1/  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 mU h]`/MK$  
a[O6xA%  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 _6ZjF>f  
6g g8h>b  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 @Iv;y*y  
BPba3G9H  
5yy:JTAH5  
n{;j  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 IY`p7 )#i  
C9n%!()>  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， =Ph8&l7~sp  
u/zBz*zh  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 o\IMYT  
A=Wg0eYy\  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。  T~TP  
l4Xz r:]  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 $B+|
&]a  
*z=_sD?1  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 hRcb}>pr  
U=on}W3V2  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 'Ts:.  
5gszAvOO  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 h~MV=7 lE  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 Q-)(s   
M:O*_>KF  
附件三 e"@r[pq-{u  
fwppqIM  
TJ)Nr*U3_  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 'q}Ud10
c  
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{9J|\Zz3  
H:
b"Vd"x9  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 Q3=X#FQ  
aT/2rMKPF  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 yO-2.2h  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% =$}`B{(H  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% %B&O+~  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% ]Vfp,"op  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% VK9E{~0=  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% [3irr0D7 l  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% PazWMmI  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08%
:wzbD,/M  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% wV-N\5!r%H  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% 1 >_$O|dE  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% ABE EJQ  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% >iJxq6!  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% z:n JN%Qb  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% Ux,dj8=o  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% }k1[Fc|  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% Rlr[uU_  
Xp^>SSt:4  
g2lv4Tiq-  
   H]lD*3b  
 wZ8LY;  
,"5p=JX`  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 x(zW<J5X"  
*u<@_Oa  
RK]."m0c~#  
)ULxB'Dm  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 #`Et{6WS  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% -aMwC5iR@  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% -Kf'02  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% {Q~A;t  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% gs|%3k|  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% t\+vTvT)RE  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% K31rt-IIt  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% {=d\t<p*n  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% U`"nX)$  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% bsmnh_YRj  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% #/1,Cv yj  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% R\=y/tw0H  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% VL<)d-  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% L*VGdZ
 
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% AuU:613]W8  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% L+QEFQ:r5  

附件一： bn~=d@'  
&]16Hb~  
j'X]bd'  
B9>3xxp(by  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） @&83/U?  
%kKe"$)0  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 tceQn ^|<  
(C!u3ke2D  
流  速：1.0 mL/min ^7.864  
z"Gk K
T  
波  长：242 nm A+iQH1C0h  
0^?3
hK  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） N|h`}*:x=  
uV#/Lgw{M  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 H8`K?SXU  
V=H87^b  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） V#ZF0a]  
bO>Mvf  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A #W @6@Mv  
Gm}ecW  
柱  温：30℃ l-Xxur5M'  
:5L9tNr{_  
RnE=T/VZJ  
a<kx95  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） t,]r%  
@{+c6.*}  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 k
#_B^J&d  
ytf.$P  
附件二 'JsP9>)  
@MW
rUx  
>V2Tr$m j  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 2>80Qp!xO  
AifnC4  
色谱条件： Q&}`( ]k  
.>%(bH8S  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm GD<xmuo  
|_@ '_  
进样口：250℃，不分流进样 (%=[J/F/  
T$RVz   
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） fA{[H:*}G  
#q'J`BC  
进样量：1μL 6K501!70g6  
#/a>dK  
流速：1 mL/min H/n3il_-I  
w7aC=B/{?i  
质谱条件： /qp)n">  
b3]QH h/  
接口温度：280℃ w ryjs!  
Gzy"$t  
电离方式：EI  1 XsB  
w$%d"Jm#X  
电离能量：70eV y!JZWq%=  
q{v?2v{  
溶剂延迟：7min lQ/u#c$n  
5>{   
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 mc37Y.  
l!UF`C0g  

|cK o#nfzZ   序号 Y [8~M8QX	cO}`PD$i   保留时间/min ~%)u g3 %e	liu%K9-r   中文名称 H\W/;Nn	>;|~ z\8   英文缩写 p%MH**A	Zp:(U3%   SIM离子 bo>4:i
8HL$y -F   1 RZKdh }B?\	g>g]qQ   8.265 /HlLfW	a?635*9K   邻苯二甲酸二甲酯 dS+/G9X^	\ U(;%V   DMP -o\o{?t,	qM~;Q6{v   163、77 BYhF?
WAd5,RZ?   2 2hD(zUSy	Nft~UggK   9.135 [:vH_(|	H K]-Q TEn   邻苯二甲酸二乙酯 8Uv2 p{ <#	<%_7%   DEP s *8)|N	a/@F?\A   149、177 >EacXPt-O
-@I+IKz   3 @zQ.d{	iJ-z&=dOe   10.888 ?o>JX.Nl&7	kWSei3   邻苯二甲酸二异丁酯 VB}4#-dG?	*v}3So   DIBP 'joc8o sS	+46m~" ]   149、223 X2PyFe
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