[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

|k,-]c;6  
vbZ!NO!H  
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Q;A\M  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： Uqy/~n-v<  
4-Jwy  
\xv(&94U  
`Pc<0*`a  
1、样品提取方法： QG2 Zh9R  
5,g +OY=\  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 8N?D1;F;  
/>/e  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 Y0A(-
"  
OE9,D:tv  
aekke//y  
L \E>5G;  
2、固相萃取方法： oW6Hufu+o  
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EYg  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： #?j sC)  
FpA
t  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； _#6Qf  
\&;y:4&l8  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； #]tDxZ] 6  
/}8Au$nA  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； pka^7OWyN  
fJc(  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 LkS t U)  
@tm2Y%Y!  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 *af\U3kx  

jc9C|r  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 E2>{seZ  
J4::.r  
e72Fz#<q  
KqntOo} y)  
补充说明： !?JZ^/u  
x;u#ec4
  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。  YFm%W@  
/e>%yq<9B  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 .>R`#@+I  
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K^fs#7  
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$3"hOEN@5`  
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I^A>YJW  
q!Ek EW\n  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 3=n6NTL  
j
z" >Kh.}  
色谱条件： lU!_V%n  
V7U*09 0*5  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm g N<7(F  
;MGm,F,o  
进样口：250℃，不分流进样 !IR cv a  
_k]R6V:  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） jo&j<3i  
ZB1%Kn#zo4  
进样量：1μL =XQGg`8<LB  
K
Kk~vwW  
流速：1 mL/min Vp; `!+z"  

%?n=In(F  
rr
,A Vw  
#Ev}Gf+5Q  
质谱条件： vbJdhaf  
^7>~y (  
接口温度：280℃ pvl];w  
}U=}5`_]D  
电离方式：EI =/j!S|P  
%n6<
6t`$  
电离能量：70eV A#']e8  
#s(ob `0|  
溶剂延迟：7min Ha]vG@?+  
-]}#Z:&  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ze9n}oN  
IC"ktv bHz  
v1+.-hO  
6NyUGGRq  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

QTF1~A\  
(I;81h`1G  
<o|k'Y(-  
pcOKC0b.  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 r`Dm;
@JU  
|qpFR)l  
YI2x*t!  
Q;GcV&f;f  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 _%(.OR  
l[[^]__  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 &a)d,4e<M  
H3( @Q^9  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 1\nzfxx
 
$LiBJ~vV<  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 tJmy}.t1  
|(CgX 6 l3  
&P"13]^@  
&.qLE  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 (G(M"S SC  
j8aH*K-l{  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， F>GPi!O  
DQ9aq.;  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 a
 <Iikx  
1/&^~'  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 JSmg6l?[u  
C6h[L  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 IiJ$Ng  
kD7'BP/#  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 rBi6AM/  
YB!f=_8  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 3Bvz& `\  
S)W?W}*R\  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 7oc Ng  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 rW3fd.;kss  
5bKn6O)K  
附件三 yf6&'Y{  
%Gs!oD  
VN8ao0^d;d  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 WChJ <[]W  
^T|~L
<A3  
jM3{A;U2  
QY<2i-A  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 PZ"=t!  
xGeRoW(X  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 BS;_l"?  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% fNx3\<~V=  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% &la;Vu"dp  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% *#,wV  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% F%x 8y  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% [(Pm\o  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% 2mbZ6'p {  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% 1 {dhGX  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% !t6:uC7H  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% QdL ;|3K9  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% E[>4b7{g:  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% #m6 eG&a  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% GM{m(Y  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% |Z<NM#1  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% cejSGsW6q  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% 16[>af0<g  
+s c|PB  
w%)=`'s_  
   P}y}IR{6  
)Fk%,H-1  
iV[g.sP-  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 PmO ut
YV  
/pZLt)=P  
h
gX@?WWR
 
h #Od tc1)  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 }9 N, +*  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% ^[Cpu_
]D  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% 2@@OjeANsX  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% O E0w/{  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% :2{6Pa(eg  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% mBSa*s )  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% 3~}G~ t  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% E1usxF)  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% ^EWkJW,Yc  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% eRc+.m[  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% u+Utvz
UC  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% (+q#kKR  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% 9J h"1i>x2  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% _jg&}HM  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 1$T;u~vg  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% ef8_w6i  

附件一： C&
(N I  
^'PWI{ O  
uxr #QA  
Po^?QVJ7  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） Yi.N&&o  
p8Qk'F=h  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 )vE~'W  
86=}ZGWd  
流  速：1.0 mL/min 8V`WO6*  
V]lLw)  
波  长：242 nm ^@s1Z7  
-b9\=U[  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 1Y\DJ@lh  
3
Ei#q+7  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 5H<m$K4z  
NX*Q  F+  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） NRs13M<ftf  
JzQ_{J`k  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A l`lk-nb  
%D{6[8  
柱  温：30℃ C_}]`[  
C2kPMB=Xo  
b|:YIXml  
AlaW=leTe  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） vH@ds k  
-l*|M(
N\  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 W:2( .?  
N#_H6TfMG  
附件二 p?OoC  
zR:L!S  
-uG+BraI  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS *w\W/Y  
%ntRG!  
色谱条件： 6%_nZvRv  
gR;i(81U  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm .Yn_*L+4*  
0'C1YvF  
进样口：250℃，不分流进样 (uE!+2C  
p_%Rt"!  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） h*](a_0  
"+G8d'%YV  
进样量：1μL !%c\N8<>GD  
|@d\S[~^G  
流速：1 mL/min M .mf
w#*  
Gyc]?m  
质谱条件： ~Mxvq9vaD  
4,DeHJjAlE  
接口温度：280℃ aPL+=58r  
C?eH]hkZ3  
电离方式：EI S)@j6(HC4  
pEA:L$&  
电离能量：70eV 0o&5]lEe  
'm$L Ij?@  
溶剂延迟：7min EfT=?  
^U/O!GK  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 0w7DsPdS  
cH2K )~  

2&cT~ZX&'   序号 1_G^w qk	!5!<C,U   保留时间/min |DwZ{(R"W	+kD R.E:   中文名称 *m(=V1"	}6ldjCT/,   英文缩写 c Z3v= ke^	6L ~n.5B~o   SIM离子 wuo,kM
\{YU wKK/A   1 E"  vS $	1.>m@ Slr>   8.265 jb)ZLA;L_c	k;W XB|k   邻苯二甲酸二甲酯 y_[vr:s5pG	yCo.cd-   DMP Q59W#e)	: E?V.   163、77 IRbfNq^:
B/C,.?Or   2 nj4 /#W	g=I})s:CTp   9.135 et+0FF ,	2TuU2 f.   邻苯二甲酸二乙酯 -Qe Z#w|	CQ2jP G*py   DEP O9p|a%o	D#z:()VT(   149、177 3N:D6 w-R
9C i-v/M]   3 Xm2'6f,	[8*)8jP3   10.888 |WUG}G")*x	E~:x(5'%d   邻苯二甲酸二异丁酯 Tb-F]lg$	yCX?!E;La   DIBP VD\=`r)nT	FsryEHz   149、223 ~3 bPIg7D
&! ?eL   4 O7IJ%_A&	veh<R]U   11.637 ?3xzd P	I 2|Bg,e   邻苯二甲酸二丁酯 z]9MM 2+	`^y7f   DBP (*)hD(C5	6f*CvW   149、223 t1y4 7fX6
\)?HJ   5 w=J3=T@TD	b`O'1r\Y;   11.979 fDU !~/#	eM?I$ePTN   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 'u |c	DG:Z=LuJr   DMEP oHn Ky[1	'Xq|Kf (   59、149、193 )"aV* "
G^4hd i3@   6 V7fq4O^:	i E^84l68   12.72 JL }_72gs	9u}Hmb   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 Tc`=f'pP)4	RF4vtQC=   BMPP q"sed]	Tg)|or/%   149、251 {xB!EQ"
(G4at2YLd   7 @oY~..d`	a /l)qB#   13.044 )j(7]uX`	D] jzAx   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 #Z`q+@@]A	~tUl}   DEEP Mxsa-?R;v	3kIN~/<R+7   45、72 ^HThN
YpZ+n*&+   8 YEs&	I<4Pur>"   13.41 D>@I+4{p	YTX,cj#D^&   邻苯二甲酸二戊酯 \H~T>j{N	u\x}8pn   DPP wj<6kG	SSg8}m5)Q   149、237 ?|C2*?hZ+
He/8=$c%   9 %2/EaaR	'8.r-`l(   15.552 $Sx'sA2	nH'e?> x~e   邻苯二甲酸二己酯 VUGmi]qd	YnS#H"   DHXP FP`b>E qOH	&|ex`nwc0   104、149、76 !cLo>,4
EIAc@ $4   10 EhvX)s	^_W#+>&--   15.694 A#<?4&	rJTa   邻苯二甲酸丁基苄基酯 Fb>?1 i`RN	k FD;i   BBP ?4&e;83_#y	lU\[aNs   149、91 9T9!kb
7U"g3a)=   11 >\#*P'y`d	$( kF#   17.153 `UaD6Mc<Mz	i9|Sa6vuI   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 ?e4YGOe.	: *#-%0   DBEP U'_Q>k	pah'>dAL   149、223 C.-,^+t;g
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