[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： P1PP#>E-2  
)9,*s!)9  
=hV-E D  
!g? ~<`  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） Z
$R2Z$f  
9Ao0$|@b  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 >Kl78 w:  
nf< <]iHf  
流  速：1.0 mL/min A>L(#lz#ek  
@ ADY?  
波  长：242 nm FH8?W| G  
?xf59mY7  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） >Dtw^1i  
He !0&B\7h  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 Jy|Mfl%d  
bkOm/8k|4  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） &tRnI$D   
U'lmQrF!  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A PPq*_Cf  
Og*1pvN<  
柱  温：30℃ }bnkTC
 
\U-5&,fP  
ud#8`/!mq  
JWdG?[$  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） <A&R%5Vs  
c]&VUWQ  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 HWU{521  
0`thND)?O  
附件二 P3|<K-dFAK  
dEp=;b s  
sP 
|i'  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS <am7t[G."  
[<;2C  
色谱条件： G<
eJ0S  
Ei<:=6EX?8  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm 4{g|$@s(  
hH/O2  
进样口：250℃，不分流进样 ( -@>  
}"Cn kg  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） dFFqs&cQ  
z;
fSd  
进样量：1μL >6 #\1/RP  
sD+G+  
流速：1 mL/min .*blM1+6i/  
OvG0UXRU  
质谱条件： >g"M.gW  
xm,` 4WdG  
接口温度：280℃ j5h 6u,^:  
O][Nl^dl  
电离方式：EI l*\~ew  
7kX$wQZ_  
电离能量：70eV 1S(\2{Ylo  
^L-w(r62<  
溶剂延迟：7min 4`U0">g
Y  
E R]sDV  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 Y%0d\
{@a  
FJf~vAQ  

R{) Q1~H=q   序号 %/y`<l Jz(	)XP#W|;   保留时间/min ?jri!]ux#	oe!:|ck<   中文名称 ok`]:gf	W}XYmF*_?   英文缩写 Z&FkLww	ohrw\<xsu   SIM离子 P</s)" @
)n7|?@5U   1 K8?zgRG3~N	\\jIl3Z   8.265 ,e9CJ~a	7zD- ?%   邻苯二甲酸二甲酯 /ZHO>LNN|	[#p&D~Du&   DMP yI8 SQ$w0y	q69H^E=   163、77 \/!ZA[D|E\
lzEb5mg   2 wxj>W[V	P*YK9Hl<   9.135 ryg4hHspl	M ?*Tf&   邻苯二甲酸二乙酯 [![ G7H%f	1* ^'\W.   DEP 3;-^YG	E"#Xc@   149、177 ;wR 'z$8
T6Ctf#   3 +?[BU<X6u	'e@=^F C   10.888 cSK&[>i)4	\?Mf_   邻苯二甲酸二异丁酯 _w(ln9	l-Nly>~   DIBP S1J<9xqSQ8	~@4'HM Q   149、223 W^\d^)
VDGCWg6z   4 ROc`BH=	MYLsHIPC   11.637 o[1yl zk}+	|=dC )Azs   邻苯二甲酸二丁酯 %|"g/2sF[G	&M/>tEZ)   DBP w ej[+y-	I5m][~6.?   149、223 3 < Od0J
#/2$+x   5 ^' M>r(t	[U@;\V$   11.979 7R4z}2F2	yifY%!@Xu   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 B~ S6R	sZ,Y60s8a   DMEP fA/m1bYxg	xL|;VyD   59、149、193 2*"Fu:a"`I
m7EcnQf   6 fXI:Y8T	QrO\jAZ{Ag   12.72 `w I/0	niB`2J   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 4DZ-bt'	y.KO :P?5{   BMPP q6YXM	9tF9T\jW   149、251 J!5$,%v
D3|I:Xm   7 &b:1I7Cp*	03C0L&   13.044 A~-b!Grf	| Bi!   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 wmTb97o	^ 0Mt*e{q   DEEP . mR8q+I6	.[_L=_.   45、72 uA< n
2WdyxjQ   8 9iQq.$A.	tS6qWtE   13.41 #p nI\	X9V*UXTc   邻苯二甲酸二戊酯 oG_~q w|h	asppRL||   DPP b gK}-EU	L0TFo_   149、237 8p 'L#Q.
8V`WO6*   9 ^@s1Z7	1Y\DJ@lh   15.552 5H<m$K4z	u&Yz[)+b=g   邻苯二甲酸二己酯 x}Eg.S	mp1@|*Sn   DHXP .5_2zat0H	NIry)'"   104、149、76 +Mb.:_7'
cKI9#t_   10 oJz^|dW	g*_&   15.694 :g0zT[f	&j"?\f?   邻苯二甲酸丁基苄基酯 dUZ ,m9u	VU3upy<   BBP hRhe& ,v	U'bEL^Jf   149、91 0M[EEw3
lt8|9"9<   11 eeB{c.#	yY q,*<G   17.153 C,4e"yynb	=t?F6) Q   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 Zj'9rXhrM1	Ig{0Z">   DBEP ^U/O!GK	G  01ON0   149、223 %8v\FS
N?8!3&TiV   12 ))Za&S*<	\Vk:93OH21   17.81 8eRLy/`gd	o2ECG`^b   邻苯二甲酸二环己酯 nJ;.Td	_#8MkW#]~   DCHP W%w~ah|/]	q.}CU.dp   149、167 Uw:"n]G]D?
!n%j)`0M   13 .]K%G\*`:	p K$`$H   18.056 oL<St$1	WY]s |2a   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 "Rl}VeDY	;n},"&   DEHP ?h2}#wg	?X;RLpEc|A   149、167 MO]&bHH7;
i6N',&jFU   14 <-0]i_4sK	g `4<9RMun   20.444 ?1".;foZ	:H[6Lg\*   邻苯二甲酸二正辛酯 'm9` 12H	$]8Q(/mbK   DNOP ,2)6s\]/b	,=N.FS   149、279 fn!KQ `,#
V1JIht>Opo   15 v9UD%@tZ	Y4(   22.98 2:=	O| hpXkV   邻苯二甲酸二壬酯  rXU\	eR"<33{   DNP ?F ;8Pa/	8&aq/4:q0   57、149、71 m9Hit8f@Q

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ^_W#+>&--  
c )g\/  
附件三 6OIte-c  
`?
@}>.  
RJ&RTo  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 a0E)2vt4  

}?i0 I  
,PW'#U:  
_8J.fT$${  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 ~jk|4`I?T  
6;d*r$0Fc  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 5Ln,{vsv  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% P3=G1=47U  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% .`H5cuF `  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% h7oo7AP  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% \*?~Yj #  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% RbnVL$c  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% eo?bL$A[s  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% >]TWXmx/w  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% !f[_+CD  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% tDcT%D {:  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% kDioD  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% W{+2/P
 
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% (L&d!$,Dv  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% C1)!f j=  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% r,p%U!S<hV  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% T8$y[W-c  
L="}ErmK  
GD$l||8  
   7!E,V:bt'  
~]2K^bh8&  
|Cy E5i0  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 z2GY:<s  
lThB2/tV\  
;2QP7PrSY  
"w<#^d_6  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 ,ig/s2ZG6X  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% JxU5 fe  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% N;%6:I./  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% jPkn[W# 6  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% $*m-R*kt  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% Tlr v={  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% N'=gep0
V@  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% \_fv7Fdp{  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% aw>#P   
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% BJ(M 2|VH  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% RD&PDXT4  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% &cTU sK  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% SgOheN-  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% ? =+WRjF  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 9_s`{(0?  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% Af{"pzY  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 I} t 3 p|z  
n?ctLbg  
bY2 C]r(n  
!!V#v9{  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 N2$I}q%  
lR`'e0Lq  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 #9fWA
F  
eo!zW  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 %Lrd6i_j  
dg7=X{=9jv  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 9 ASb>A2~  
yag}fQ(XH  
l\!-2 T6Y  
E%TpJl'U  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 rJ'I>Q~x6  
XfzVcap  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， >7U>Yh  
hsG#6?l3  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 TE-;X,gDV_  
FkupO I  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 dd7 =)XT+  
Y&r ]lD
 
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 +MO E  
EZ(^~k= I  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 JK~ m(oQ  
-Ubj6 t_K  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 dNVv4{S  

+3bfD  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 FyEDt@J  

)r +o51gp  
$,&3:ke1  
u@ psVt   
8h=Rfa9  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： tX u_o6]  
_=s{,t &u  
^@a|s Sb  
d_r1}+ao  
1、样品提取方法： pZA0Go2!IN  
r:QLO~l/  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 re-; s  
c&rS7%  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 rgOc+[X  
/ivA[LSS  
K>a+-QWK3  
2U Q&n`A  
2、固相萃取方法： =bwuLno>  
-T0@b8  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： `1T?\  
;*Z.|?3MM  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； oieZopYA  
@-ms_Z  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； CI~P3"`]  
zv%9?:  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； e9 `n@  

3ZF-n`  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 )l|/lj  
xXJl Qbs  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 :JEzfI1  
SG)hrd  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 '}Tf9L%  
-j6&W `  
905%5\Y  
/hojm6MM  
补充说明： aMxg6\8  
y(#Aze{yC  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 c%5G3j  
Jvk!a~e  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 lf<?k  
* [\H)Lz  
N3_r qRd^  
PD-<D~7  
;^Q- 1  
5#DtaVz  
( }]ae*  
gPo3jwo$  
?)8OC(B8q  
0[f8Gb3  
Lrr1) h  
>=
T\=y  
u_;&+o2  
55mDLiA  
8hKyp5(%l  
X-Yy1"6m1  
B%. XWW$  
,h#U<CnP#  
%  T2C0P  
9b8kRz[ c  
Qd{h3K^hlu  
"1-|ahW  
ZjOUk;H
?  
09r0Rb  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS T VuDK  
WX2w7O'R  
色谱条件： Yw\7`  
gOE3x^X*{  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm 3 E~d  
#h Np1y2  
进样口：250℃，不分流进样 ZgXn8O[a  
Vd'KN2Jm  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） Sb9In_* 0  
0B4&!J  
进样量：1μL 4/Vy@h"A3  
PR&D67:Jy  
流速：1 mL/min L?@TF;
 
f[@M  
-*?Y4}mK  
jJpSn[{  
质谱条件： ~dIb>[7wy  
a.|4`*1[;  
接口温度：280℃ 5(/
5$u   
+[ _)i 9a  
电离方式：EI vT<q zN  
,w.`(?I/  
电离能量：70eV ~Od4( }/G  
_tfZg /+)  
溶剂延迟：7min Ae,-.xJ  
1#
AdEd[  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 { ~yj]+Im  
\s2hep  
5_+vjV;5  
8T'=lTJ  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

v*5n$UFV  
u~yJFIo  
58*s\*V`\  
|,bsMJh0