[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： %|tDb  
lhx"<kR4  
\ r^#a  
eWgqds&#  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） hnk,U:
7}  
Q|DVB  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 n0ZrgTVJ
 
!iys\ AV  
流  速：1.0 mL/min hLv~N}  
nmH1Wg*aW  
波  长：242 nm u . xUM  
o4^|n1vN  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） XY_zFF  
*NC9S,eSP  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 pL& Zcpx  
`X:o]t@  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） __3s3YG  
G2 E4  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A jDV;tEY#^  
yMd<<:Ap  
柱  温：30℃ L/[b~D>T%  
pGsk[.  
C-}@.wr(  
nB &[R  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） .:b&$~<  
r'bPSu,  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 r=J+  
B1U<m=Y  
附件二 -r'/PbV0  
V?zCON  
9'5`0$,|^  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS JQ~[$OGH  
&Rp/y%9  
色谱条件： !P"@oJ/Yy_  
qj#C8Tc7  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm #GbfFoE  
hRFm]q  
进样口：250℃，不分流进样 z#|tcHVFT  
n([9U0!gu  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） v(`9+*  
Yf?h l  
进样量：1μL _)%Sz"g^Ix  
;xQNa}"V  
流速：1 mL/min 7@NV|Idtd  
>|1$Pv?  
质谱条件： 6.'j\  
) -^(Su(!  
接口温度：280℃ xiy=D5N.=  
35KRJY#  
电离方式：EI A:4?Jd>  
?P%-p  
电离能量：70eV {XEX0|TZ  
Pq(7lua7  
溶剂延迟：7min q
x1+'  
re)7h$f}  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 [:gp_Z&  
TXS{=  

nt_FqUJ   序号  :!/ (N	v|R#[vtFd   保留时间/min q&2L@l3A	jct'B}@X(   中文名称 Q%:Z&lgy	Z]XjN@j"   英文缩写 W1JvLU5L*r	*G8Z[ht%r   SIM离子 fRjp(m
vDIsawbHD   1 T>|Y_3YO_a	a1shP};pK   8.265 bPIo9clq	7AF6aog   邻苯二甲酸二甲酯 ?DE{4Ti/[	OQVo4yl"   DMP QT=i>X	h!`KX2~   163、77 +R_s(2vz
\hdil`{>   2 e?N3&ezp	L) UCVm   9.135 +1r><do;	7=s7dY lu   邻苯二甲酸二乙酯 7d/I"?=|rA	_YN C}PUU   DEP q.j $]?PQ	lYey7tl{   149、177 R,fAl"wMu
+|H,N7a<   3 _w2KUvG-8	E,fbIyX   10.888 P.jy7:dB,	]=59_bkD:s   邻苯二甲酸二异丁酯 sXtt$HID=	*?VB/yO=0   DIBP orbz`IQc	=1xVw5^F   149、223 y'n<oSB}
PZ#aq~>w   4 @1U6sQ	}:[MSUm5   11.637 tK `A_hC	%NfH` %`   邻苯二甲酸二丁酯 i[w&!mn%	wM#l`I   DBP ]mjKF\	y)TBg8Q   149、223 xK4E+^ b
B B^81{A   5 Yp8XZ3	ju4wU;Nu   11.979 Ri}JM3\J	m `b:#z   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 \lyHQ-gWhc	jO`L:D/C   DMEP 6\%#=GG	q~X}&}UT   59、149、193 Yi19VU|/
v{8r46Y~Z)   6 (: mF+%(	En0hjXa   12.72 NIC.c3	~$7YEs)   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 AZ -JaE	|1T[ P)Q   BMPP Su'l &]	AQc9@3T~Bi   149、251 vQ{mEaH
`>0(N.'T   7 tpP68)<ns	qc6d,z/   13.044 X u >]$+u#	Vj[,o Vt$   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 }/7rA)_	t5S!j2E   DEEP q)tNH/	 }]j# C   45、72 0|(6q=QK
dewN\   8 bWMb@zm	EOf*1/Ih   13.41 A)kdY!}	`(@{t:L   邻苯二甲酸二戊酯 Oi~.z@@	7:OF>**   DPP iD:TKB_r	sHHu<[psM   149、237 IHe?/oUL"b
^L's45& _   9 S!7|vb*ko	P".rm0@R   15.552 4-q8:5	Gv6#LcF#   邻苯二甲酸二己酯 J|dj`Z?	6 kAXE\T   DHXP mvGj !'	IsB=G-s   104、149、76 hdxq@%Vs
|&rxDf}W   10 YW^sf,zQ	Y  kc N-   15.694 l\~F0Z/O	P}mn2Hs   邻苯二甲酸丁基苄基酯 FFID<Lf/2	]jwF[D   BBP %jmL #IN)	!;;WS~no3   149、91 d@_|
*9xv0hRQ%?   11 X\'+);Z	G,JNUok   17.153  a 9 f%p	khtYn.eaL   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 OMVK\_oXo	nA>kJSL'$   DBEP "OO"Ab{t	x7l3&;yDv   149、223 eW^_YG%(
tW|K\NL   12 s j{i	S.X*)CBB   17.81 3>t^Xu~	]5}C@W@_   邻苯二甲酸二环己酯 Apx GrCu	u!VAAX   DCHP b;XUv4~V	5VG[FY6Pl   149、167 v2uyn
/X _g[*]?   13 l].Gz`L	dE[nPtstb   18.056 ?4 fXCb]7	XH?}0D(   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ~K-c-Zs#z	y(!YN7_A   DEHP 9svnB@	DKG%z~R*   149、167 UE[5Bw?4X
dBKceL v   14 pS3TD"p	 .UUY9@   20.444 8d90B9	i+2fWi6Z+   邻苯二甲酸二正辛酯 }T}9AQ}|	lAxbF   DNOP X_}2xo|T	L|7F%oR   149、279 dQ5_=(9
dA`.   15 S+mZ.aFS0z	Kd?TIeFE   22.98 5ayM}u%\~	CLb~6LD   邻苯二甲酸二壬酯 D5wy7`c	7fVlA"x   DNP %>dCAj"	QBg~b{h   57、149、71 7IrbwAGZ3

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 A8JEig 3Ix  
AL/`Pqlk  
附件三 Y$3H$F.+  
%
R~9qO  
9OB[ig  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 Y7R"~IA$  
V. ;,1%  
L{$ZL&  
@YyTXg{ZK  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 11}fPWK  
$3](6  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 b?h9G3J_a  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% 0 1[LPN  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% JDVMq=ui  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% BDY@&vF  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% xKKL4ws  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% *&B1(&{:V  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% 'Omi3LXfDT  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% p2|c8n==  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% |E-0 P=h  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% ay#cW.,  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% "/hM&  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% 94r8DkI  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% O!='U!X@ P  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% hNUAwTH6  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% yyh L]Uq"=  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% j~V@0z.  
]9)pF L  
tA$,4B?  
   k
|-`d  
?HVsIAU  
i0,{*LD%^  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 -h*Yd)  
AL! ^1hCF  
FQB)rx P  
*wP8)yv7  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 ]>/YU*\  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% *103  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% v83uGEq(  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% .=rv,PWjZ  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% 1O45M/5\o  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% rfYu8-  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% xC`Hm?kM  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% mW1Sd#0  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% Zqd&EOm  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% V|}9d:&O  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% /}2 bsiJT  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% jp8=>mk  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% E{T\51V]%  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% N ED`GU  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 10}oaL S  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% vc6UA%/f  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 v\(m"|4(i  
i `QK'=h[  
Xm:=jQn  
@gSFvb bc  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 $Cd;0gdv  
?h)3S7  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 r@[VY g~  
zLw h6^?Y  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 BQ9`DYIb  
w}W@M,.^  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 8jjk?PUD8  
sb|3|J6=  
qSoBj&6y  
<a+eF}*2  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 3 W-NS~y  
tC?Aso  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， otz_nF;E  
ci,o8 [Y  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 PUE'Rr(Q  
UN*dU  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 iM/*&O}  
fXu~69_  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 KkdG.c'  
!bZhj3.  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 Y( 1L>4  
l:zU_J6  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 28T\@zi  
?AV&@EX2C  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 QJM-`(  

kfIbgya  
?##y`.+O  
r]Z.`}Kkm  
y& Gw.N}<r  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： ! vi4* @:  
e1Dj0s?i~K  
:K5V/-[|V1  

(p'/p  
1、样品提取方法： y;*My#  
VN1#8{  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 }qTv&Z3$  
15RI(BN  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 kvY} yw7  
s2kGU^]y  
Sf# \6X<B  
%l0_PhAB  
2、固相萃取方法： g#pIMA#/  
'lSnyW{  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： -sruxF  
Mr@<ZTw  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； C{U[w^X  
Rq~ >h99M  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 5+#?7J1  
0DW'(#`  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； [v>Z(  
Hj-<{#,  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 `t/@ L:  
>8.v.;`  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 .jrR4@  
UlLM<33_)  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 6>P  
[f0oB$  

LgD {!  
bl+@}+A  
补充说明： 6vp8LNSW  
GhfUCW%  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 osgS?=8  
s5Bmv\e.i5  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 ]oWZ{#r2  
`__?7"p )\  
Ubos#hP  
CFS3);'<|  
r{N{!"G  
bQ\-6dOtv  
lVp~oZC6[  
SYW=L  
bCx 1g/   
BQJ`vIa  
P@S;>t{TD  
I~5fz4Q  
'?>O  
AL$Ty   
8JOht(
m  
/B
?SaKh  
iYQy#kO  
HF=C8ZtlL  
WyJfF=<  
o/[yA3^  
JO6vzoS3  
1eyyu!
  
B+$Q"  
MdboWE5i  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS w,#W&>+&  
0BP~0z  
色谱条件： <mgTWv  
ITqigGan%  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm VP[!ji9P  
? /X6x1PN  
进样口：250℃，不分流进样 Nv]/L+i  
XlJux_LD:  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 'R5l =Wf  
lc(iy:
z@  
进样量：1μL gm$MEeC  
3evfX[V#  
流速：1 mL/min %=  ;K>D  
:%]R x&08  
@<JQn^M  
RtQfE+  
质谱条件： leJd){  
&c ~)z\$  
接口温度：280℃ 8gm[Q[  
o[6"XJ  
电离方式：EI &g>+tkC  
!qve1H4d2  
电离能量：70eV v]S8!wU  

Vp4]  
溶剂延迟：7min <2A'   
d_B5@9e#  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 &>t1A5  
j`l K}  
IW*.B6Hw8  
wyM3|%RZ  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

,_O[;L  
?OFvGd  
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