[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： &<cP{aBa  
di<g"8  
?ea5k*#a  
&M=15 uCK  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） om6`>I*  
Qz$Wp*  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 $MM[`^~  
}Q-Tw,j
 
流  速：1.0 mL/min YI]/gWeu  
q}(f9  
波  长：242 nm c#@L~<  
eUD 5V  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） aED73:
b  
n+s=u$%qn  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 d-I=xpB  
yXf+dMv
  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） w;:{  
/KlSI<T@  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A ( ;KTV*1  
r\q|DZ7  
柱  温：30℃ c2PBYFCyC  
l_ LH!Tu  
B!J&=*=e  
W QeQ`pM  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） Bey9P)_O f  
O#)YbaE  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 n9k-OGJ  
Qgq VbJP"  
附件二 RVr5^l;"  
-e_pw,5c '  
1#|qT 7  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 43!E>mq  
V" KuwM  
色谱条件： pzT`.#N:M  
z#6(PZC}  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm {3``B#}  
NH+N+4d EO  
进样口：250℃，不分流进样 mJsU7 bD`  
OZ&SxR%q4  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） EfX,0NqT  
-=qHwcId  
进样量：1μL 'wo}1^V  
ov1#BeQ  
流速：1 mL/min S"@@BQ#mf  
w=[ITQ|W%  
质谱条件： U}GO* +  
xj Jo WB  
接口温度：280℃ \+<=O`  
iAXF;'|W  
电离方式：EI Q;kl-upn~8  

e<"sZK  
电离能量：70eV ;ih;8  
#/)U0IR)  
溶剂延迟：7min 8cj}9}k  
3C2~heO>|  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ;s5JYR  
%%lJyLq'Vk  

+KIFLuL   序号 4"Mq]_D	au/ 5`   保留时间/min U+VyH4"	m|PJwd6   中文名称 {%6g6 ?=j	Uq.hCb`:   英文缩写 Y$W)JWMY`	ym2"D?P (   SIM离子 igF<].'V
p,7?rI\N   1 W4)bEWO+q	vZXdc+2l   8.265 c,}VC-	Qki ? >j"   邻苯二甲酸二甲酯 &5QvUn 	#{J+BWP\o   DMP :)%cL8Nz]$	2%)~E50U   163、77 nD}<zj$D2
3V<c4'O\W   2 @2TfW]6	{~#d_!(   9.135 ~w(A3I.	He&A>bA)z   邻苯二甲酸二乙酯 ?"@SxM~\	AOx8OiqE:   DEP o%K1!'	'Z nJdj   149、177 l>)+HoD
@Y#TWt#   3 m3|l-[!OA"	Ef=4yH?\j   10.888 lLEEre	/}s#    邻苯二甲酸二异丁酯 ~)5k%?.	wL&[Vi_j{   DIBP > Qh#pn*	'JAe=K H   149、223 Y }8HJTMB
ShOB" J-   4 oSP^ .BJ$	(-{.T   11.637 dVBr-+	K Z0%J5   邻苯二甲酸二丁酯 7] 17?s]t,	xGX U7w:X   DBP =`wnng5m	bd`}2vr   149、223 <Kq!)) J'
PL*kjrLu7   5 )n$RHt+:>	3d>xg%?   11.979 MJ`BlE,Fmb	|FZIUS{]   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 _<;westq	#W=H)6   DMEP 2ee((vO&	y ;T=u(}   59、149、193 X5Ff2@."y|
Lw #vHNf6   6 @1G`d53N	%^66(n)   12.72 b>"=kN/	7"Iagrgw   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 ]NgEN	)nJh) {4\   BMPP N8w@8|KM	EkEU}2   149、251 KF4}cM=.5
4P\?vz"   7 z^ r	k+FiW3-   13.044 B&oP0 jS	=-U8^e_Y   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 F ak"u'~	9s}y*Vp   DEEP >^fkHbgNQ	oTqv$IzqP   45、72 Os# V=P
qrtA'fU   8 K!MIA	rcWr0q   13.41 `zJTVi4	.jfkOt?2   邻苯二甲酸二戊酯 xxlYn9ke	dsh S+d   DPP J,bE[52	k>8,/ AZd   149、237 T@ [ *V[
St6U   9 i5>]$j1/	J1?)z+t9~   15.552 yJ(p-3O5	nQ0g,'o   邻苯二甲酸二己酯 ZR~ *Yof y	<mm.b   DHXP 3 aL8 gE	q F\a]e   104、149、76 HMQi:s7%
nQ/R,+6h   10 vjy59m	XY[uyR4Z   15.694 eIzT(3(	]V,wIyC   邻苯二甲酸丁基苄基酯 ~kdxJP"	,O[HX?>   BBP K&zp2V	DYJ F6O   149、91 'lPt.*Y<u
iXp*G52   11 3g!tk9InG	2 6yjQ   17.153 |{ E\  2U	}P8@\2@=T   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 W ,<P])	xz1jRI$   DBEP AS;EO[Vn	7X\azL   149、223 =|lw~CW
V2< 4~J2:9   12 *XRAM.	[i7Ug.Oi"   17.81 (E'f'g	A"wor\(   邻苯二甲酸二环己酯 |Qq_;x]	Dps0$fc   DCHP `(j}2X'[	Isa]5>   149、167  * A B
?:bW@x   13 Y{]RhRR	Eeemy*U   18.056 b"-eQb	s_} 1J,Y   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 !"\UT&	/"d5<B`%   DEHP cES3<`[K	%zg&eFRHI   149、167 q=8I0E&q
x|/zn<\^   14 W2Y%PD9a	z@hlN3dg   20.444 PE1F3u>O	V6'"J   邻苯二甲酸二正辛酯 <F!On5=W*	;'!G?)PZ   DNOP >jU. R;H5	Sw~jyUEr   149、279 F"xD^<i
f]H[uzsV   15 L 1=HD	Uu xbN-u   22.98 T-pes1Wu	<o G+=h   邻苯二甲酸二壬酯 fNOsB ^Y	]JB~LQz]k   DNP z6e)|*cA$	$ )ps~   57、149、71 Nx>WOb98

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 b((>?=hh  
Uf}u`"$
F  
附件三 f(Su  
E4QLXx6Wa&  
K[
q{)>,9  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 :pH
3M[7  
I/B*iW^  
,f@\Fs~n  
%,UTFuM`  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 e>T;'7HSS"  
koa-sy)#L  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 eH]9"^> o  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% 2,6~;R  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% K(,MtY*  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% Alk+MwjR  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% c'INmc I|  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% .L~ NX/V  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% t)5.m}  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% Iqci}G%r  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% {%\@Z-9%q,  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% H)h$@14xu  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% 5@J]#bp0M  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% &]tm'N25  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% ?[|A sw1t  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% ::_
bEmk  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% /#z"c]#  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% yFn~rv
|&G  
6HPuCP  
Rt7l`|g a+  
   <(_Tanx9Q  
g{ ;OgS3>  
-GMaK.4=  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 #?`S+YN!q)  
b@Dt]6_UL  
EM@EB<pRX  
Wsp c;]&  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 s(ap~UCOw  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% db=S*LUbl  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% MBLDxsZ-  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% j6};K ~N`  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% ,j9?9Z7R  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% lFduX D  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% UCkV;//.  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% WbBd<^Q  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% ?=^\kXc[  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% KF5r?|8M  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% {~j/sto-:  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% *9w-eK1{  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% GQJ4d-w  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% 'ey62-^r6  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% vceD/N8  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% XJKns
  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 83gp'W{|  
|),3`*N  
`1U?^9Nf  
Kx5VR4f`J@  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 SRpPLY{:F  
FaE,rzn)iD  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 j= Ebk;6p  
QGQ}I  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 ojQjx|Q}  
Z4'8x h)-  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 '-5Q>d~&h  
4! V-- F  
j* \gD  
w-M,@[G  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 / MUa b*h  
C:WXI;*cr  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， {"x8q  
hLf<-NM  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 i`}nv,  
?onTW2cG;  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 hH|m
oj]  
nA#FGfZ{Ge  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 8IX,q  
+hJ@w-u,G  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 ^-yEb\\i  
0A}'@N@G)  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 ~$O.KF
:  
Q,.[y"m9Y.  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 $Z!$E,@c  

Nk~dfY<s  
xWZcSIH!  
0mi[|~x=  
e{+{,g{iu  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： JX<W[P>M  
U:jf9L2  
>U/g*[>  
sYI':UQe  
1、样品提取方法： W>nb9Isp  
F
;&e5G  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 <~+  
Z?mg1;Q  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 GA}^Rh`T-  
H-w|JH>g  
w'XgW0j{  
Ghc0{M<  
2、固相萃取方法： "mK (?U!A  
pN_!&#|+$  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： 2zu~#qU[)M  
[{$0E=&0  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； "s9gQAoaO  
_B FX5ifK  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； >nEnX  
%=y3  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； :Xh`.*{EX  
6FMW g:{  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 Q9tE^d+%  
}(EOQ2TI  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 166c\QO  
9Ru%E>el-  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 `R52{B#&/  
;VlZd*M?  
'S4E
KV]  
&}6ES{Nr8  
补充说明： avt>saR  
K l0t yeT  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 xV>iL(?  
 !` M;#  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 Z'}(
t,  
O\4+_y  
'ybth
 
pFsCd"zv  
2JiA
d*WK  
cPq Dsl3  
Nm6Z|0S  
rU=b?D)n!w  
eyeNrk*2o  
m:)Z6  
B{7Kzwh;  
j/)"QiS*?  
p"Ot5!F>  
\Sg<='/{L;  
y Wp i|   
/-h6`@[  
4|`Yz%'  
[`d$X^<y;  
r#A_RZ2~@  
Z,K7Ot0  
Zmf'{tT5  
in<}fAro6  
Jic}+X*0  
C)Jn[/BD  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS H2
;X  
vMla'5|l  
色谱条件： ~GJN@ka4%  
FJNF%a)x2I  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm (\a6H2z8l  
k(%QIJH  
进样口：250℃，不分流进样 J*fBZ.NO  
&o3K%M;C?  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 7piuLq+  
j2l55@  
进样量：1μL LPYbHo3fq  
COzyG.R.  
流速：1 mL/min ORXm&z)  
7pA/   
!o=U19)  
2&c9q5.b  
质谱条件： Y HSYu  
\0lnxLA  
接口温度：280℃ + dA,P\  
FOq1>>a0  
电离方式：EI Ig3;E
+*>  
s"Pf+aTW
 
电离能量：70eV 6#IU*  
Us+pc^A  
溶剂延迟：7min !"8fdSfg w  
*N{emwIq  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 Ok n(pJ0  
Mi]L]-L  
-WYAN:s  
4C FB"?n0  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

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