[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： bJD$!*r\%!  
~g
Mt U  
qdv O>k3  
Nf3UVK8LtS  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） PRTjXq6)5  
S5y. H  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 y;8&J{dd  
"z3rH~q72  
流  速：1.0 mL/min mOn_#2=KF  
ozRTY9S _;  
波  长：242 nm Kmx^\vDs  
n%J=!z3  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） P%(9`A  
X(nyTR8  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 AT~,  
r%ES#\L6+|  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） ][MtG  
=W. }&  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A 2(xC|  
? W'p&(;  
柱  温：30℃ 
s
V  
s 3Vb2C*  
ump ~)?_B  
w6% Q"%rp  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） *Y m?gCig  
F1t(P 8  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 /fr>Fd  
n{;j  
附件二 9oWU]A\k>  
W(s4R,j  
7;"0:eX  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 200yN+ec  
P#,u9EIJ  
色谱条件： >qjV{M  
$B+|
&]a  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm kNEEu !G  
RgE`Hr  
进样口：250℃，不分流进样 GF'wDi}  
0J)s2&H  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） I$n=>s  
y}Ky<%A!P  
进样量：1μL bf3! |Um  
o_b[
*  
流速：1 mL/min ]|;+2@kDR  
g(DD8;]w<  
质谱条件： W+nu=iQ!  
q^@*{H  
接口温度：280℃ ej RK-!  
)fH Q7  
电离方式：EI g jF5~ `  
eh#37*-  
电离能量：70eV
-F[8ZiZ  
_iwG'a[`  
溶剂延迟：7min -luQbGcT3  
E}^V@ :j>  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 G1:}{a5i_  
2Gyq40  

Wzq W1<*`   序号 <J%qzt}	Po>6I0y    保留时间/min 2:LUB)&i	N$=YL @m8   中文名称 0%xktf	F6{g{ B   英文缩写 +=WBH'	Y XhZWo{B   SIM离子 GzEw~JAs
su0K#*P&I   1 /G5KNSi	['QhC({   8.265 h5{//0 y	-raK   邻苯二甲酸二甲酯 B^19![v3T	5hqXMs   DMP !'\(OFv9Im	.yzXw8~S   163、77 1 >_$O|dE
yl<=_Q   2 $ z+ =lF	aBF<it>   9.135  GwD"j]	is-{U?-   邻苯二甲酸二乙酯 3TD!3p8 	*!( ?=9[   DEP u`X}AKC	HaamLu   149、177 ?+#E&F
g'b)]Q   3 5B(r[Ni b	R\=y/tw0H   10.888 G>{;@u	o0Hh&:6!M   邻苯二甲酸二异丁酯 15gI-Qb	5kJ>pb$/   DIBP 2Sb~tTGz79	J/wot,j^   149、223 8X*6i-j5E
^O[qCX   4 GXRK+RHuBi	d%4!d_I<   11.637 G e[N5N>	ep ,kImT   邻苯二甲酸二丁酯 0sk*A0HX-	qeSxE`E"   DBP }N*6xr*X+	T Q.d|{B[   149、223 >j_ ,3{eJ
\O^b|0zc   5 6*/0 yGij	q[] "`?   11.979 P'KaWu9z	<}pqj3   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 d>M&jSCL	{W62%>v   DMEP \( LKLlam	R|Z$aHQ   59、149、193 $h0]
L[)+J2_<   6 >G92k76G	DKqFe5rw   12.72 6cp x1y]~6	M6vW}APH[n   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 )fP,F(	"\Jq 2vM   BMPP Wznz	aj51%wKMb:   149、251 d% Jl9!u
>};,Byv!%   7 L~x3}o$-o	>& TSz5Q   13.044 !CtY.L p	NLyvi,svS   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 >s1FTB-$W	b5Rjn1@   DEEP _55T	E87/B%R   45、72 XtT;UBE
C@pDX>~2=b   8 6Kh:m-E9	Mki(,Y|1~   13.41 x?:WR*5w	mb0${n~fz   邻苯二甲酸二戊酯 )#ic"UtR	Zx}=c4I(y   DPP Ng'f u|	*sAoYx   149、237 .vG6\U7
gjo\gP@   9 T]CvfvO 5	f$2lq4P{   15.552 1ed#nB%	dr9I+c7 u   邻苯二甲酸二己酯 VJ;'$SY x	Lo;T\C N   DHXP Zqx5I~	R \`,Q'3   104、149、76 @8/-^Rh*
xY_/CR[,   10 vk[Km[(U'	8+GlM+>4   15.694 m3,]j\	4}?Yp e-   邻苯二甲酸丁基苄基酯 bh_i*DJ]	qFvtqv2   BBP \.Q"fd?a_D	A!@ D } n   149、91 Ks!.$ y:x
m"@M~~bh   11 {P-KU RQ	bxEb2D   17.153 >^> \y8on	y&9v0&o   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 .|KxQn}	t`H^! b   DBEP B >#zrCD	: bT*cgD{   149、223 QR w306
!) ;}zW!   12 T?^AllUZQR	w0^(jMQe^   17.81 REnRpp$	TBrAYEk   邻苯二甲酸二环己酯 `k^ i#Nc>	XrFyN(p   DCHP H6bomp"	H Y.,f_m   149、167 j3Cpo x
# s(B,`?N   13 F{bET	Fr/8q:m&   18.056 xyBe*,u	]*sXISg1   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 &q``CCOF&	z=n"cE[KtB   DEHP 9oc.`-e\?	5<,}^4wWZ   149、167 :HMnU37m W
,%v   14 x_2 [+Ol	GT|=Apnwr%   20.444 g=o)=sQd	C8-4 m68"   邻苯二甲酸二正辛酯 dfO@Yo-?*'	L XJ" ct   DNOP :G9.} VrU	y4C _G?   149、279 DSM,dO'
AVZ-g/<   15 ",B92[}Ar	{[m %1O1   22.98 zRx-xWo	nBgksB*A   邻苯二甲酸二壬酯 =nh/w#	P5yS`v$@   DNP U] riBlg>	_Jn-#du   57、149、71 K9\`Wu_qL

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 laX67Vjv  
go[(N6hN  
附件三 |-! yKB  
%yJ $R2%*y  
Rb=8(#  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 @c{rqa v  
X1GpLy)p  
fNllF,8}  
LsGu-Y5^  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 w6w'Jx  
m?$peRn3{  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 Gd08RW  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% QxjX:O  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% AvNU\$B4aG  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% xn)eb#r  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% v-J9N(y"
 
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% =CE(M},d  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% EpO5_T_  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% >WsRCBA  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% 4ZZ/R?AiK  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% H9^DlIv('  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% c==` r C  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% qGE?[\t[6  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% |$r|DX1[  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% cNW[i"  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% tNskB`541  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% GRanR'xG  
UGy~Ecv  
9HOdtpQOV  
   Tc6H%itV  
a G^k
L  
R$@| t?  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 J9^RP~>bs  
3&!X 8Lhv  
*<2+tI  
d-g&TSGd  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 h Ns<Ae  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% D}l^ow  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% {X<mr~  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% !fr /WxJ  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% =wH
H
R1e  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% xcr=AhqM  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29%
w-\U;&8  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% {ve86 POY  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% Z\6&5r=  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% |E$Jt-'  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% QxCZ<|  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% R< @o]p  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% +F q`I2l|  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% CK[2duf^~  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 0-cqux2U  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% `EVTlq@<  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 _h4]gZ  
P>u2 ""c  
hSxK*.W*3  
xv Xci W  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 x0>N{ADXQ  
4"Qb^y  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 >r C*.  
(=WbLNBS  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 \!jz1`]&{  
K@
DFu5  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 rNicg]:\x  
D3,)H%5.y  
>dgq2ok!u  
A /c  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 ToKG;Ff4b  
{*g{9`   
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， ]Lg~I#/#  
s:_j,/H0A}  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 i
FcSz  
sKs`gi2  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 UA]T7r@  
UH+#Nel+!  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 )Spa F)N8  
2~ETu&R:  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 _/.VXW  
eAjR(\f>  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 n
i )G  
2S[:mnK  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 t%k`)p7O  

/(Se:jH$>  
I6d4<#Q@L  
P MzPe"3M  
1'wwwxe7  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： ],l w  

ns|)VX  
UX3 ]cr  
+L(0R&C  
1、样品提取方法： H'N$Vv2q  
l AF/O5b  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 bo^d!/;  
ub^v,S8O  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 TE+d?  

q0
Rd^c  
=Rnx!E  
q3.L6M  
2、固相萃取方法： _;*|"e@^  
BmrP]3W?  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： *D<S \6=  
(
uOW5,e7  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； h9+ylHW_cp  
CR934TE+  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； +7 F7Kh  
qsvUJU  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； tEN]0`  
)sV# b  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 ~|uCZ.;o  
,j_{IL690  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 c<D
Yk f  
Q}=RG//0*  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 <rC#1wR4  
3FXMM&w  
<>e<Xd:77{  
YSwD#jO0  
补充说明： ZbrE m  
@s@  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 b5|p#&YK~  
64vSJx>u  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 @j (jOe  
Za6oYM_z  
nAg(lNOWN  
duS #&w  
LU{Z  
pPZ/O6  
J,O@T)S@  
zy[=OX+  
t^,Qy.L0  
(nD$%/uK'  
A+*oT(`  
6b70w @P!  
cIvYfgIo9  
"&#WMi  
k!/_/^{  
|SP.S 0.y  
9LEilmPs  
<`xRqe:&9  
TFC!u0Y"$  
!UBDx$]^  
LD~Jbq  
Ie2w0Cs28  
c#n4zdQd]5  
-; us12S Z  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS hB P$9GR  
%UUp=I  
色谱条件： 'ZGT`'ri  
0a2$P+p  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm _l24Ba$F6  
-Q<z1vz  
进样口：250℃，不分流进样  OLk9A  
Np.no$_  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） \ V[;t-  
-Nsk}Rnk*  
进样量：1μL h7bPAW=(  
?TIV2m^?  
流速：1 mL/min 8$\Za,)g  
t2"@Ps&1|  
haCKv   
BYS lKTh  
质谱条件： y`4{!CEyLW  
IhE9snJ[  
接口温度：280℃ :s"2Da3B  
JdiP>KXV  
电离方式：EI /g@^H/DO  
+R qbf  
电离能量：70eV hbI;Hd  
V&*D~Jq  
溶剂延迟：7min jXp. qK\"  
_Yq@FOu  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 Y:psZ  
/t5p-  
Td hTQ  
kOjf #@c  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

<1"+,}'x  
KbW9s,:p  
e0HfP v_  
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