[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： Tt`L(
oF  
W\'Nv/L  
`(!W s\ :  
I'xC+nL@  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） '
N*!>mZ<  
>1m)%zt  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 Fgsk
b"k/  
(rAiDRQ[  
流  速：1.0 mL/min O<4Q$|=&?  
+g)_4fV0|  
波  长：242 nm :jBZK=3F>  
ESn6D@"  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） j.<:00<  
7U&5^s )J  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 gW'P`Oxw  
Po'-z<}wS  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） 1RCXc>}/  
mYiSR  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A di"C]" ;  
LKIW*M  
柱  温：30℃ m$7x#8gF  
IRlN++I!  
<sgZ3*,A  
NS7@8 #C  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） a];BW)  
Ko1AaX(I'+  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 nw~/~eM5=  
bc `UA  
附件二 ;[;)P tFz\  
/1IvLdPIu  
\Pw8wayr%  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ATKYjhc _  
^t\kLU  
色谱条件：
?l6>6a7  
B`g<Ge~  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm UiJ^~rn  
#g@  
进样口：250℃，不分流进样 w^ixMn~nLF  
u3Zzu\{  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） Z
_iAn TT  
Y&?|k'7  
进样量：1μL ^/_\etV  
SRA|7g}7W  
流速：1 mL/min LVPt*S=/  
PY^^^01P  
质谱条件： vDu0  
Q3B'-BZe  
接口温度：280℃ >uBV  
Rz<d%C;R  
电离方式：EI o9U0kI=W  
<.PPs:{8#  
电离能量：70eV v$gMLu=  
jjS{q ,bo  
溶剂延迟：7min
BiHiVhD_  
E1Ru)k{B  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 p|bc=`TD  
{V]Qwz)1  

EzD -1sJ   序号 F:*[	egxJ3.   保留时间/min Z,|1G6f@	Q.pEUDq/   中文名称 _V_ 8p)%	I{?E/Sc   英文缩写 [p( #WM:	0p:ClM2O   SIM离子 in=k:j,U0
Y2=Brtc[@   1 L#7)X5a__	dPH! V6r   8.265 4,w{rmj	[5RFQ!   邻苯二甲酸二甲酯 #czyr@	x;ICV%g/   DMP 7kX 7\[zN	7'{Yz   163、77 @R'g@+{I
D)O6|DiO   2 s iss_1J	p(x1D] #Z[   9.135 RXx?/\~yd;	6wpND|cT   邻苯二甲酸二乙酯 w371.84	9?}rpA`P   DEP 5QL9w3L	i"sYf9,   149、177 S\ v&{
F;MT4*4   3 :i,c<k	,3@15j   10.888 B yy-Cc	W &0@& U   邻苯二甲酸二异丁酯 /_k hFw	u'~b<@wHB   DIBP X^ ^?}>t[	YAC zznN   149、223 >nIcFm
!{]v='    4 %\{?(baOA	EkjK92cF   11.637 H`6Jq?\	?;KJ (@Va   邻苯二甲酸二丁酯 xwH|ryfs,Z	E]eqvTNH   DBP RkH oT^	)V$ !   149、223 QRmQ>
kJ<Xq    5 i8[Y{a*	Uo[5V|>X6   11.979 mKFHT	UVBw;V   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 *~<]|H5~	b5  C}K   DMEP d >"$^${	 gl7vM   59、149、193 %:;[M|.
v/00LR   6 dt0E0i	.6Lhy3x   12.72 -^xKG'uth	; 7v7V   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 er7/BE&	4k2c mM$   BMPP D*r Zaqy	RJsG]`   149、251 ;s B:s9M
nI KT w   7 Cv(N5mA2	V #\ZS{'J   13.044 (Rg!km%2T	+ET   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 I4X+'fW,	78inh %   DEEP .,K?\WZ	-%gd')@SfD   45、72 ~+iJp W
/(pD^D   8 Rf0\CEc	Qg$Nj=Cw   13.41 +rpd0s 49	i\4"FO?v   邻苯二甲酸二戊酯 ^PR,TR.	ot<o&   DPP 8+cpNX	E0A|+P '?   149、237 L[r0UXYLV
GJ_)Cl+5E   9 TaO;r=2	s1$#G!'   15.552 +Qvgpx>	F1*rUsRKN   邻苯二甲酸二己酯 \.|A,G=	I>o; %}    DHXP ?q}wl\"8	`e|Lw   104、149、76 D % ,yA
>d V@9   10 2Wf qgR[3	.p~;U|h"   15.694 na:^7:I	3CPOZZ   邻苯二甲酸丁基苄基酯 #R4KBXN	U (7P X`1   BBP iB`]Z@ZC	 lG#&1   149、91 `b'J*4|oGo
rL3Vogw'e   11 $%8n,FJ[	b Y$!"b~   17.153 Q9zpX{JT	(kOv   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 *sVxjZvV	gdNp2b   DBEP G_4P)G3H	)!-'SH   149、223 9GaER+d|
nDw 9   12 jhM|gV&	@sO.g_yM   17.81 L-gF$it\*b	dsuW4^l   邻苯二甲酸二环己酯 Zotv]P2k	rdg1<Z   DCHP '#6DI"vJ	vb!KuI!:p   149、167 *E_= 8OV
U6PUt'Kk@   13 8, ^UQ5 x	t$iU|^'uV   18.056 ;\.&F Mi	`<G+N   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ]F!h~>	e~dU "   DEHP BJ/%{ C`g	;ecF~-oku   149、167 2c]O Mtk
JJXf%o0yq   14 ppA8c6	u e~1144   20.444 u5[Wr:	3kg+*]tLx   邻苯二甲酸二正辛酯 je\UfEo%	d"a`?+(Q   DNOP lM]7@A	de[_T%A   149、279 -v] 0@jNe
V-57BKeDz   15 1Mqz+@~11	;Lx5r=<Hx   22.98 Sw~<W%! ?	3? "GH1e   邻苯二甲酸二壬酯 I|hG"i	aqlYB7   DNP ~W4<M :R	Z|.. hZG   57、149、71 v,s]:9f`\>

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 d~u+:[\=/  
qQv?J]l  
附件三 "WV]| TS"]  
J.N%=-8  
K\v1o  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 T1.
`*,t)=  
p(f YpD  
R-+k>_96|  
7g^=   
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 +ffs{g{  
p)NhV  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 tG+ E'OP  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% I'%vN^e ^  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% Y;JV9{j  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% 4RTuy+ M  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% Z6#}6Y{  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% xj~5/)XX|X  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% LT']3w  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% {L^b['h@  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% bR"
hl? &c  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% 8DHohhN  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% pVbgjJI  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% JFf*v6:,  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% ]N
gK(IU  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% %QH "x`;  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% R%B"Gtl)  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% huVw+vAA  
^|-*amh  
 &0! f_  
   S?_/Po |  
)bN|*Bw3  
ODa+s>a`^  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 ?`T< sk8c  
-ZwQL="t  
$=?1>zvF  
{hYH4a&Hb  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 #
m yiZL%  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% DL0jA/f  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% P>q"P1&{  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% Q(Q.(  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% Ucnj7>+"  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 1HOYp*{#wP  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% ukM11LD5x  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% mY[s2t  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% \Y;LbB8D  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 15PFnk6E|  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% FnkB z5D  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% N$u;Q(^  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% rzmd`)g  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% F<SCW+>z2a  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% Ph[P$: 9  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% gT 8^  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 gd'#K~?  
xlVQ[Mt  
G)\s{qk  
.J' 8d"+  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 Pxu!,Mi[d  
%]%.{W\j3  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 xB{
0lI  
&T?>Kx  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 "pq#A*  
2UY0:ye  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 9_'xq.uP  
jI@0jxF  
X}'3N'cbkU  
I@P[}XS  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 DUf=\p6`f  
jLC,<V*  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， P0U=lj/b  
_F xq  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 uy\<t  
E :*!an  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 L>$yslH;b  
P(G$@},W  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 !o~% F5|t  
dA>t  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 qgrRH
'  
# 'G/&&<  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 #*q`/O5n  
!zLd,`  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 t/WauY2JUC  

E rmlM#u  
~~,] b  
hq
[;QF:B  
oZm)@Vv;  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： \~u7 k  
h$
]=z\=  
5Us$.p  
+ZOjbI)  
1、样品提取方法： {yFCGCs  
I|&<!{Rq  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ]34fG3D|  
gt]
k#(S  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 ppL*#/jYt  
.T;:6/??1  
 rvPY  
n[|*[II  
2、固相萃取方法： )T2 V<3l  
\_GG 6  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： 7S^ba  
4G ?Cu,$  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； P_7QZ0
k/  
Vc2(R^  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； ^~dBO%M^  
0[\sz>@  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； w?;j5[j  
&7-ENg9 [  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 *P:!lO\|  
ab-z 7g  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 A-6><X's6  
.<fn+]  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 NUN~T (  
?R!?}7  
OTy{:ID  
s@$SM,tnn  
补充说明： jx=5 E6(h  
NsJ]Tp5!  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 z JBcz,  
1#w'<}h#U  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 #{8t ?v l  
S\poa:D`  
C CDO8  
y$,j'B:;4m  
8 *Y(wqH  
)k~{p;Ke  
:OKU@l|  
oC  }  
G<m6Sf  
hfL 8]d-  
c#L.I  
 6j6P&[  
P3_&(  
y,F|L?dIq  
l xh}N,  
TjWMdoU$J  
5uAUi=XA>S  
Egm-PoPe  
$.Qu55=z<  
VD0U]~CWR  
 0N`'a?x  
JPmZ%]wA  
IuOQX}  
,/Yo1@U  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS mKZ^FgG  
x)prI6YMv\  
色谱条件： 1vL$k[^&d  
IEQ6J}L  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm e=4k|8G  
Mb\[` 4z  
进样口：250℃，不分流进样 =G-u "QJ6  
t
OVYA\]  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） >YP ]IQ  
:}[[G2|9  
进样量：1μL  G{{Or  
s[tFaB1  
流速：1 mL/min 1`I#4f  
QAK.Qk?Qu  
VkDFR [k_  
&xjeZh4-  
质谱条件： ^bckl tSo  
8- ]7>2?_  
接口温度：280℃ aShZdeC*f  
ICI8xP}a?  
电离方式：EI 0CS80 pC  
`Ao;xOJ  
电离能量：70eV s7#|'jhZt  
vy+9Q5@W  
溶剂延迟：7min !WReThq  
q{t"=@lX01  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 c&T14!lfn  
.+cYzS]!  
5cE!'3Y  
G ]mX+?  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

6}6ky9  
V6ioQx=K#  
:4 D#hOI  
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