[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： \7(OFT\u:  
I]~UOl  
kPp7;U2A  
5bprhq-7  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） /.@"wAw:  
y)+lU  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 )ocr.wU@  
2lRE+_qz  
流  速：1.0 mL/min pK@8=+  
0ZJt  
波  长：242 nm q!\4|KF~  
4
|Ay;}X \  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） ;30SnR/  
yttaZhK^u  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 l~Rd\.O  
x>$e*  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） !QSj*)V#  
j9xu21'
!%  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A ( 4(,"  
CorV!H4  
柱  温：30℃ h:RP/0E  
H*e+ 2  
(9R;-3vY:S  
*YSRZvD<\  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） axpZ`BUc  
Nt e$cTjX  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 iGkysU<wcp  
eIfQ TV  
附件二 marZA'u%B1  
KVJ, a  
p*&0d@'r  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS %KXiB6<4  
J+J,W5t^  
色谱条件： a/,>fv9;$  
{O^u^a\m  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm jdP
)y]c  
DH-M|~.sf^  
进样口：250℃，不分流进样 hm`=wceK  
Y$ys4X  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） H\67Pd(Z6  
Tlsh[@Q  
进样量：1μL Ts 5)r(  
;c(a)_1  
流速：1 mL/min BUO5g8m{  
A6N6e\*  
质谱条件： {Su?*M2y  
51#*8u+L  
接口温度：280℃ g9_zkGc7  
jkAjYR.  
电离方式：EI =~#mF<z5  
@=-(H<0  
电离能量：70eV '\:4Ijp<"  
q6zVu(  
溶剂延迟：7min j-<]OOD  
]\,?u /  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 0'^M}&zCi  
kmQ:wf:  

l`v5e"V   序号 5'!fi]Z	e=Ox ~2S   保留时间/min *|&Y ,H?	It*U"4 lgi   中文名称 PqspoH 0OI	g0 f 4>m   英文缩写 E8C8kH]	p,=IL_   SIM离子 D)MFii1J~
Cuylozj$&   1 J"#6m&R_q	N[9o6Nl|a   8.265 .NWsr*Tel	;=0-B&+v   邻苯二甲酸二甲酯 Mg0a i6KD	 )%9:k9   DMP gjiS+N[	$v8T%'p+   163、77 [ P*L`F
aTaL|&(   2 1"l48NLL|	PywUPsJ   9.135 [L2N[vy;	%8KbVjn   邻苯二甲酸二乙酯  {>yy 3(N	y#J8Yv8   DEP ~T\:".C	A{wSO./3   149、177 kXZG<?
cG4$)q;q   3 `>\>'V<&	 kSU]~x   10.888 yxL(mt8	hBNA,e:   邻苯二甲酸二异丁酯 \[W)[mH_	#^eXnhj9   DIBP db5@+_	ZBl!7_[_   149、223 :|PgGhW
YK 6zN>M}E   4 )HJ#|JpxC	k5/W'*P   11.637 mo	8m"jd+   邻苯二甲酸二丁酯 br4?_, 	$BUm,   DBP /;clxtus	;<N%D=;}@   149、223 X(JE]6_
_(:<l YaY   5 lFZl} x	iOJ5KXrAO   11.979 uZe"M(3r$	Z]08gH   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DPr~DO`b	|Pi! UZB   DMEP 2{<o1x, Ym	o[)*Y`xq<w   59、149、193 ,ygUy]
HZqk)sN   6 uHq;z{ 2GI	0f#xy S 3   12.72 =Cd{bj.8	lffw "   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 [&g"Z"	Z~F*$jn   BMPP F^Bk @	*d`KD64   149、251 a@J/[$5
W* %(J$E   7 {,u})U2	s/.P/g%tA>   13.044 @meT8S9t	Oxa8ue?   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 {o 2 qY|S	+g kJrw   DEEP yCA8/)>Gm	jw9v&/-   45、72 {?5iK1|}K
@aZTx/   8 ~^V&n`*7D	[GI~ &   13.41 @)uV Fw"\	:86:U 0^   邻苯二甲酸二戊酯 O*~z@"\	[3G{NC|'   DPP q2vD)r	i D IY|   149、237 Xb%q9Z
@|a nu&Hm   9 j#5a&Z	8!{*!|Xd   15.552 XjGS.&'I	mAW.p=;   邻苯二甲酸二己酯 $gUlM+sK	TJ"-cWpO1   DHXP zXY8:+f	DSU8jnrL   104、149、76 X4V>qHV72
/$c8 7\   10 #t ;` 	?:"ABkL|+Y   15.694 hF2e--	 2v{WX   邻苯二甲酸丁基苄基酯 qf? "v;	$bTtD<a   BBP ' _c/ CNs	v) n-   149、91 FV^jCseZ
qAjtvc2   11 D$ds[if$U,	5H3o?x   17.153 'va[)~!	ASXGM0t   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 ^|/mn!7wD	j7!u;K^c   DBEP P'~`2W0sz	e:G~P u`   149、223 @5Tl84@Q
_9BL7W $;   12 KS_+R@3Z	#IH9S5B [   17.81 $#V'm{Hh	K+Him] b   邻苯二甲酸二环己酯 fDr$Wcd~	gb,ZN^3<-   DCHP xn, u$@F	|}{gE=]   149、167 Fepsa;\sU
QE/kR!r   13 #i~P])%gNP	G#Bm ">+   18.056 p+Q9?9	?h1g$SBxk   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 \DlMOG	qYoU\y7   DEHP ouyZh0G	Vo[.^0   149、167 } PL {i
(I6Q"&h]   14 00SS<iX	Kc@Sw{JR#7   20.444 xY.?OHgG/	lSoAw-@At8   邻苯二甲酸二正辛酯 ang~_Ec.	?I+$KjE+   DNOP &Cm]*$?	>o3R~ [   149、279 eR`Q7]j] -
wZJbI[ r   15 RED@|[Qh	xoGrXt9&   22.98 u]`0QxvZ	f#7=N {wm   邻苯二甲酸二壬酯 W:9l"'	&h!O<'*2   DNP !;d>}iE	+ 660/ e8N   57、149、71 CPeu="[

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 MnF|'t  
*!BQ1] G  
附件三 `RE>gX  
-#/DK   
-@#],s7  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 h@ ZC{B  
<im}R9eJ1  
tCR~z1  
06.8m;{N  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 `uusUw-Gf  
?^7X2 u$nm  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 0ZI}eZA j  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% N;!!*
3a9=  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% /6y{ ?0S  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% K~3Y8ca  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% r[7*1'.p  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% {36N=A  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% Wy/h"R\=  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% V joVC$ZX  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% ~>~qA0m"m  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% })J}7@VPO  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% AA= eWg  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% fl2XI=[v4  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% %9S0!h\  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% T"g k^.  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% uaU2D-ft"  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% AS;qJ)JfzQ  
YgS,5::SU  
v'S5F@ln  
   (+/d*4  
:Q@/
F;Z?  
PwthYy  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 z0SF2L H  
ctjQBWE  
}f?[m&<  
5Pn.c!  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 =|ODa/2p  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% ,qv\Y]  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% 8B?U\cfa^  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% NLG\*mQ  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% E1OrL.A6  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% ~U"m"zpLP  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% k)S1Zs~G  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% ,mp<<%{u  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% NF6xKwRU]_  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% S1U0sP@o  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% S=!WFKcJR  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% nXLz<wE  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% uNyN[U  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% IRm}?hHf  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% K'Ywv@  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% ,6;n[p"h|r  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 |WkWZZ^  
*x!j:/S`n  
;S_Imf0$v  
1La?x'{2MP  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 \? n<UsI  
eK
[9wEdn  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 wzj:PS
  
tXCgRU  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 Yc:>Yzj(z  
WR9-HPF  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 RGLJaEl !  
cpm *m"Nk  
gSHN,8. `  
QBCEDv&j  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 6n\){dkZ~  
or"
9I1o  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， &srD7v9M8  
D|2 lBU  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 6A4{6B  
`j'gt&  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 JmuoYlf|  
1
]aya(  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 @9g!5dcT  
`n
L^]i  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 u]<`y6=&C  
'x=y:0A  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 .DcuJC=  
nb|"dK |  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 ++0xa%:  

g;8jK8Kh  
`P8Vh+7u  
U
]vYV  
WeQk<y
 
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： <p\6AnkMr  
S<WdZ=8sA  
mysetv&5  
!\"5rNy  
1、样品提取方法： ;+<&8.=,)  
lI-L` x  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 3'c0#h@VD  
\yd s5g!:  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 8ZKo_I\  
$P
(v{W)  
T.We: ,{  
cu%
C"  
2、固相萃取方法： kH4Ai3#g  
EC\yzH*X  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： E[*Fz1>
 
@E-\ J7 yh  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； qR8u$2}NY  
x#Q>J"g  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； K"0PTWt  
n':!,a[  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； KMV=%o  
OZIW_'Wm/  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 (lGaPMEU}  
}->.k/vc  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 2<][%> '  
`zR+tbm  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 p[@5&_u(z  
`xc^_781\  
%',F  
/Ux*u#  
补充说明： 2iU7 0(H  
Pe_!?:vF  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 :qvI%1cP=  
YxGcFjJ  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 Nk;iiz+_p  
$ 3d}"D  
&6j<ca  
A;J MV+2N  
QR> Y%4 ;h  
e.o;eD}"  
y\F=ui  
`*\{.;,]#  
m~],nl   
R[1BfZ6s  
~~8rI[/  
ecX/K.8l  
n~Szf  
BN@,/m9OQ%  
.h;S e  
>]}yXg=QK+  
qi+&|80T.  
( :Cc3  
=p&sl;PsLw  
Dw |3Z  
v3JPE])/  
):bu;3E  
W@B7y P7Rz  
V:\]cGA{  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 9bn2UiJk  
b~W)S/wF$P  
色谱条件： ,QS'$n  
>Zdi5') 5  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ? : m
d  
rBevVc![  
进样口：250℃，不分流进样 ja7 5c~RUw  
\[T{M!s  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 9>{t}Id  
%|jzEBz@  
进样量：1μL IM$0#2\  
:K;T Q  
流速：1 mL/min O8 $~*NFJf  
lY->ucS %P  
:4iU^6  
+Tp%5+E  
质谱条件： HrDTn&/  
y]J3hKs  
接口温度：280℃ %P(;8sS  
2J)74SeH  
电离方式：EI k3C"  
a6k
(9ZF  
电离能量：70eV db<q-u  
R04.K!  
溶剂延迟：7min //~POm
  
|OOXh[y  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 1 pa*T!  
E!dz/.  
<"hb#Tn  
\C!%IR  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

m$7x#8gF  
wCV>F-  
Y8D7<V~Md  
Sg/:n,68