[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： eD?f|b
if  
x5 ?>y{6D  
0. mS^g,M-  
vnD
`+
y  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） ;T*o RS  
QI*<MF,1  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 #gSLFM{p  
B<oBo&uA  
流  速：1.0 mL/min YuFR*W;$  
*=zv:!  
波  长：242 nm VCQo3k5 {  
j9~lf  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） DhD^w;f]  
/X%+z5  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 45;ey }8  
nYE%@Up  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） i>e?$H,/  
w|c200Is}e  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A `IT]ZAem`/  
 zPN:)  
柱  温：30℃ wSi$.C2  
q _Z+H4  
)]kxLf#  
_@W1?;yD  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） me@)kQ8M  
f-p$4%(  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 t&Q(8Hz  
LosRjvQ:  
附件二 V>/,&~0  
4}s'xMT!  
*<X1M~p$  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS 3dlY_z=0  
(Ldvx_
 
色谱条件： yjsj+K pL  
7e\Jg/FU  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm OTE,OCB[  
oyr b.lu/  
进样口：250℃，不分流进样 g$^-WmX\m  
/,\U*'-  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） s .<.6t:G4  
pZ}B/j  
进样量：1μL z=) m6\  
}oA>0Nw$K  
流速：1 mL/min %~ PcJhz  
""jW'%wR  
质谱条件： SMD*9&,  
lYCvYe  
接口温度：280℃ R|$AcNp  
Y4HN1  
电离方式：EI #i@f%Bq-  
38p"lT  
电离能量：70eV q+\<%$:u  
% S;AM\o4  
溶剂延迟：7min cyJ{AS+  
m6mGcbpn  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 Cjr]l!  
8C@u+tx  

]6^<VC`5D   序号 hJ{u!:4	\uOM,98xS   保留时间/min nUP, Yd	X>[i<ei   中文名称 Dm}eX:'{	OKMdyyO<l   英文缩写 w. k9{f	fwz:k]vk   SIM离子 _U^[h!
!Ap5Uwd   1 V8M()7uJ	Czjb.c:a.Y   8.265 C(XV YND3	eyMn! a   邻苯二甲酸二甲酯 _aFe9+y	G+<XYkz*   DMP :01d9|#	WA(x]""   163、77 unFRfec{
`7=$I~`   2 |HmY`w6*z	'OA*aQ=K   9.135 Y$ jX	P2'N4?2   邻苯二甲酸二乙酯 2=_$&oT**	Og1-LP|X   DEP =^KgNQ 	EX8+3>)   149、177 3=d%WPgQ
qnp}#BZ   3 IAQ<|3Q	dL$ iTSfz"   10.888 tu}!:5xi	z6R| 1L 1   邻苯二甲酸二异丁酯 A`uHZCwJ5	-zFJ)!/?   DIBP .aT@'a{F	[\W&   149、223  2 q4p-
1L!;lP2   4 N)"8CvQL	~pZ0B#K J   11.637 WJD2(el	)Dz]Pv]H'   邻苯二甲酸二丁酯 Z4 i))%or	i6WPf:#wr   DBP  R>0[w$	%e]G] B%   149、223 rNk'W,FU
U*~-\jN1pb   5 mI7lv;oN<5	#A5X,-4G   11.979 }W'j Dz7O	Zy+ERaF|]   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 c~tl0XU1	T */I4"   DMEP FQ4R>@ @5	^"7-`<J   59、149、193 he~8V.$
<5G(Y#s/?   6 -m}'I8	Lan|( !aW   12.72 CtM qE+j^	9 @CRL=   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 i&H^xgm	iT&4;W=72~   BMPP 4AEw[(t	)A*53>JV   149、251 T(u;<}e@[
q`mxN!1[   7 . 'o=J`|	_*UI}JtlS   13.044 U;iCH	\},H\kK+^   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 @+t |Aa^g	\mLEwNhRY   DEEP G^ k8Or2	]#4kqj}   45、72 jMBMqQNU
5cf?u3r!qJ   8 [)}P{y [&	9c4p9b!   13.41 An#[ +?	_;^x^    邻苯二甲酸二戊酯 KsTGae;ds	h{o, *QL   DPP w5y.kc;	%"c;kvw   149、237 Zjn1,\(t~u
4J`-&05O   9 Am3j:|>*	fA?Wf[`x   15.552 )IK%Dg(v	JcP<@bb>B   邻苯二甲酸二己酯 <l,e6K	Q ijO%)   DHXP \QSD*	z,C>Rh9Id   104、149、76 2.j0pg .
Y8s-cc(   10 -"^"& ) 	Nt<Ac&6 s   15.694 hZe9Y?)	xU.Ymq& 5   邻苯二甲酸丁基苄基酯 ;' 'S};	n n8N 9w   BBP |])Ko08*tE	Q6X}R,KA1   149、91 -cXVkH{
79lG~ BGE   11 9JC8OSjJ	|-AR)Smt   17.153 v".u#G'u	CH h6Mnw   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 >\!>CuU	QNm.8c$   DBEP !}uev	^Ul* Nm   149、223 <wt9K2,
Mj@ 0F 2hy   12 Mio~CJ"?	?_c*(2i&^   17.81 (PCv4:`g	7e-l`]   邻苯二甲酸二环己酯 !Q5ip' L	pYs"Y;%   DCHP zZ=.riK	e$^O_e   149、167 Q4MTedj1H
1vQj` F   13 K G~fDb	b&Sk./ J6   18.056 )S|}de/a2	Bk1Q.Un   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ds4)Nk4% O	SL/ FMYdd   DEHP fO.gfHI	#]|9aVrr   149、167 lV^sVN Z]
VWG#v#o   14 X.g")Bt7	|_%|   20.444 5sx-u!7	}$;T.[ ~   邻苯二甲酸二正辛酯 jpaY:fcF	rsvZi1N4w$   DNOP s%J|r{F6	l<{]%=Qg   149、279 p(~>u'c
*n2Q_o   15 sN7I~	7vcYI#(2 Y   22.98 Nd#t !=	C_PXh>H]'   邻苯二甲酸二壬酯 o~gduNG#	DhY9)>4M   DNP >;HbD p	~DPg):cZ   57、149、71 7l7eUy/z

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 p4mi\~Q  
1P4cBw%  
附件三 p7et>;WRx  
o>WB,i^G  
<A|X4;  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 V"Cx5#\7C  
w`BY>Xft0
 
L& =a(  
(=A61]yB  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 J?6.yL;  
Z9 z!YaOL  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 rR Kbs@1M  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% CdBpz/  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% I+oe{#
:.  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% o*MiKgQ&  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% '/OcJVSR  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% 1Kjqs)p^  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% Vc[aNpE  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% @V?T'@W7D  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% Z";&1cK  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% ^4b;rLfk@  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% ~8 B ]  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% ]'NL-8x">  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% y Nc@K|  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% bm*.*A]  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% C'y4 ~7  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% f,|g|&C  
" Xg~1)%  
*@{  
   {Rdh4ZKh  
$bDaZGy  
o}&{Y2!x  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 YQ@2p?4m  
cyLl,OA  
%Z+**>1J  
=:Yrb2gP_\  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 .EPv4[2%F8  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% fLpWTkr0  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% Zb&pH~ 7  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% v`c;1?=,q  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% n!.=05OtX  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 7x=4P|(\}  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% nbB*d@"  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% ]=%6n@z'  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% mBJr*_p  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% Mo<q(_ZeRP  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% L&y"oAp<  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% 'e*w8h  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% >d=pl}-kOQ  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% !4cY^4>o  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% '<YBoU{e*  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% N6of$p'N  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 *W2] Kxx*  
im>/$!&OyI  
3mE8tTA$R  
;mV>k_AG  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 vRmzj
d~  
{>R933fap  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 $ ga,$G  
99zMdo S  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 R8% u9o  
_=5\$6  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 6>d3*  
'#r^W2  
]G~u8HPH!m  
y3 S T"U  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 }Oy/F  
YH[HJ#:7r  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， .V^h<d{  
]O
M?e  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 EO.}{1m=hx  
EG!):P  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 9O#?r82  
ZltY_5l  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 2k""/xMF'  
h|&qWv  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 _M}}H3  
,1-#Z"~c  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。
mMV-IL  
wpPCkfPyL  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 '@+a]kCMev  

e)!X9> <J  
kj@#oLd%  
=!{}:An1$  
;[gv-H  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： <JF78MD\  
X*$ 7g;  
!G`w@E9M)  
&rcr])jg[  
1、样品提取方法： AGK+~EjL@  
Ujq)h:`  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 s![=F}ck  
vQ u) uml  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 @_N -> l  
(Clf]\_II  
q_cqjly<  
oJ
yC{G  
2、固相萃取方法： la|#SS95  
iO<O2A.F  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： nfRo:@  
5>h2WL  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； MW'z*r|,  
Pbm;@V  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； GN=F-*2  
0A5xG&  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； $Cc4Sggq  
6\~m{@  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 _
@?]!J[  
{) Y &Vr5  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 Jv7
@[<$  
TN/I(pkt1B  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 2<u vz<B  
F!zZIaB]  
1<bSHn9  
Hb!Q}V+Kb8  
补充说明： }"q1B  
l9P~,Ec4''  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 VMen:
  
)I!l:!Ij*D  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 S&
.DpsK  
J fsCkS  
#;?z<  
9%\q*  
atl0#FBd  
.lTGFeJqZ4  
m;Sw`nw?  
CHBCi) '6h  
W&+UF'F2  
27,WP-qie  
<
7^_M*F9  
Q v{q:=k  
\Sm.]=br  
3R4-MK  
z KJ6j]m  
*h-nI=  
xx9qi^  
eeB^c/k(P  
5F <zW-;  
`n5|4yaG~  
G4<'G c  
Is?0q@  
$?;aW^E  
`wk#5[Y_  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS | LfH,6  
7,Z%rqf\)  
色谱条件： rxm!'.+  
CS6,mX  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm HjV83S;  
*qKwu?]?>  
进样口：250℃，不分流进样 m0un=>{  
c%i/ '<Afr  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ]6$NU [  
F(@|p]3*  
进样量：1μL wm@1jLjrQ  
p~=%CG^5  
流速：1 mL/min {WFYNEQ[  
iFga==rw  
1N:eM/a  
^B]M- XG  
质谱条件： W&Fa 8  
SznNvd <  
接口温度：280℃ 7xWX:2l*?  
FC vR  
电离方式：EI <0&];5 on  
2+y4Gd 7  
电离能量：70eV I /> .P  
%H%>6z x  
溶剂延迟：7min ~-'nEATE  
! =|{  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 :5C9uW#  
=]etw  
<3ovCqa  
|A0kbC.  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

h*d&2>"0m?  
d+"KXt5CV  
@Q TG
  
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