[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

E]Mx<7;\ .  
+s<6eHpm  
Lx_Jw\YO  
Ys.GBSlHG  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： %f<>Kwr`2  
+tk`$g  
zsuq
RM "  
;HCK iHC  
1、样品提取方法： UIU Pi gd  
@(c^u;  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ]Sj;\
Iz  
Jt}`oFQ5l  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 ~0+<-T  
.(/HUQn  
k5>UAea_  
n;Mk\*Cg  
2、固相萃取方法： --diG$x.  
8N)Lck2PR  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： Y'0
00#+  
]i075bO/  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； |11vm
#  
)a0l:jEOc  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； b5MU$}:  
PZru:.Mh  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 3f$n8>mq  
f"gYX aVF+  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 rRe^7xGe7  
~)#E?
:h5  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 4pMp@b  
OmkJP  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 OY
xYlUq  
=\u,4  
,d*1|oUw  
Pc&dU1  
补充说明： OLt0Q.{  
)2wf D  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 %CYo, e  
c
2Z!Vtd  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 sqpo5~  
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$X-PjQb1Bb  
#r"|%nOfY  
JAjiG^]  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS /'.gZo  
~vpF|4Zn5  
色谱条件： PHT<]:"`<  
\WnTpl>B  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Xl2g Hh  
Go: (R {P  
进样口：250℃，不分流进样 M
UZ]*n&0  
Y~I>mc]  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） #l&*&R~>  
%=
2sz>M+  
进样量：1μL t>%b[ (a  
z}-R^"40  
流速：1 mL/min eJ<P  
`Nvhp]E  
1V[Zk lS  
WdS1v%  
质谱条件： PCgr`
($U  
+,R!el!o~u  
接口温度：280℃ #
SCLU9-  
M^HYkXn[  
电离方式：EI euT=]j  
Glw|*{$  
电离能量：70eV hmLI9TUe6  
,-EN{ed  
溶剂延迟：7min #k>n5cR@0  
yr>J^Et%_  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 /{8Y,pZbu  
H@zv-{}T8  
-b+)Dp~$p  
&u[F)|  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

hV`?, ~K  
AZNo%!)o  
Q2)5A&U\  
Xu_1r8-|=b  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 zUd{9B$  
W)m\q}]FYz  
`{W>Dy  
Y@R9+7!  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 {{ /-v3n  
.z&,d&E  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 g~Agy  
o<nkK+=Afm  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 m #}%l3$  
xO2CgqEb  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 Iji9N!Yx
 
xRPUGGv  
,T\)%q  
$g+q;Y~i0  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 /5 6sPl 7}  
w.6Gp;O  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， w*7BiZ{s<  
tX *}l|;(  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 L>Soj|WUy(  
&$+nuUA  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 >@wyiBU  
rLzN#Zoi  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 oD>j26Q  
"<5su5]  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 qe"t0w|U?  
re;^,  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 i`)h~V
|G  
g(Dr/D  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 xesZ7{ o  

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 #lY_ XV.  
]J(BaX4  
附件三 ]wZlJK`K  
l"rX'g?  

3cA'9  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 f|'0FI  
Pxvf"SXX  
)4e8LO  
6KRC_-  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 F+SqJSa  
U!\~LKfA  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 a_3w/9L4r  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% 2;w`W58  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% k.ttrKy<q/  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% F;L8FL-  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% nCS" l5  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% (2ZkfN  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% bs&>QsI?j  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% agk
GUK/  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% .Im=-#EN  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% 4D}hYk$eP0  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% +'$5Jtz  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% ni85Ne$  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% !pZ<{|cH  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% f~10 iD  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% 1Ror1%Q"?  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% w>o/)TTJL  
5P{[8PZxbV  
`&9iC 4P  
   7$*X   
 P1R5}i  
.JOZ2QWm<  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 M-Ek(K3SRf  
UqD ]@s`  
xnfJruT  
& 'CUc/,  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 _X|prIOb=  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% {- &`@V  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% 2qot(Zs1i  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% d%UzQ*s  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% snWe&-  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% \,fa"^8  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% K9-9 c"cz  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% !B92W  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% pztfm'  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% ,kf.'N  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% dr(-k3ex  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% Ta[\BWR2  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% v2I? 5?j  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% /z_]7]  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% h!ogH >S~  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% }h=PW'M{  

附件一： +m1y#|08  
Jbqm?Fy4X  
#BwkbOgr  
!:<n] -U  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） De:| T8&  
(GDW9:  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 =MokbK2  
)Vnqz lI5  
流  速：1.0 mL/min v?qU/  
)i*-j=  
波  长：242 nm t73" d#+  
:]k`;;vh  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） ^Jdji:  
7!%xJ!  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 u:s[6T0  
We*&\e+"T  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） O 7D61~G]  

M
7g6m  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A 7,&
M
6<~  
"$rmy>d  
柱  温：30℃ S[5e,Ew  
G[M{TS3&Ds  
Y5?OJO{h"  
v[I
,N$:  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） -Ay=
* c.4  
2u?k;"]V  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 q}0xQjpo  
lD\v
q2  
附件二 t,vj)|:  
1O@ D   
+ tza]r:  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Qv l3=[S  
~s4o1^6L  
色谱条件： $Y9Wzv3Ra  
mKN#dmw6  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm S@[B?sNj  
0; BX  
进样口：250℃，不分流进样 na,i(m?l  
_ q<Ke/  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min）
(Y>|P  
CZ4Nw]dtR  
进样量：1μL QssU\@/Q  
b]cnTR2E  
流速：1 mL/min FvVR \a  
'&42E[0P  
质谱条件：  mX&!/U  
Cr#Z.  
接口温度：280℃ yHIZpU|(j  
}{S f*  
电离方式：EI )o%sN'U,1  
"nQ&~KQ  
电离能量：70eV "s.]amC  
5eJMu=UpR  
溶剂延迟：7min QK0-jYG^  
!Un&OAy.!  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 t
Tcff9ee  
TQ&1!~L*  

Gw1Rp   序号 k=M_2T'	"f|xIK`c   保留时间/min cf`g.9pjlx	>^N{   中文名称 v{c,>]@	Kd;Iu\4hv   英文缩写 Y7_2pG vZ	!LAC_b   SIM离子 -XNawpl`
,:=g}i   1 Xdl7'~k	tRu j}n+x   8.265 2m{d>	b9RJ>K   邻苯二甲酸二甲酯 Hzc5BC	1<;RI?R[9   DMP J|=0 :G	"[ #.   163、77 )j\9IdkU;y
A~M.v0   2 V :<Z	1uco{JX<S   9.135  Dt:NBN	Dn[uzY6   邻苯二甲酸二乙酯 m(KBg'kQ	6`WI S4   DEP tUT: vK`	u9u'!hAGH   149、177 C Ef*:kr
k@P?,r   3 %;,4qB	C8 KV<k   10.888 w njAiIE5	K1CgM1v   邻苯二甲酸二异丁酯 oq9gFJG(	N{#9gr3zi   DIBP UetI4`	#H;1)G(/   149、223 2sYz$ZGC"#
2(km]H^   4 n{(,r'	%^l&:\ hy   11.637 # xh M&X	nCDGPz J   邻苯二甲酸二丁酯 >02p,W6S>	PkcvUJV   DBP NAX`y2z	y#FFxSH>   149、223 ^t?vv;@}
pP%9MSCi   5 w\a6ga!xt"	hE7rnn{   11.979 )JhB!P(	[e o=   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 jS) YYk5	_6 @GT   DMEP ~Rw][Ys	F{Oaxn   59、149、193 ,z#S=I
9\uBX.]x   6 _<'?s>(U'	3`;1; T2$B   12.72 thz[h5C?C	>J#/IjCW   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 K^P&3H*(/n	n. vrq-   BMPP '7g]@ Q7	gAgF$H .   149、251 i(kx'ua?
'(-H#D.oy'   7 q2s=>J';	Eqi;m,)   13.044 sRZ?Ilua6	m'M5O@?   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 ^Jw=5ImG	DXQ]b)y+N   DEEP ^^< C9	lbPn<   45、72 I@IE0+ [n
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6RguUDRQ   10 Dr[;\/|#	fK *l?Hr   15.694 (h@!_qi9:	!^s -~`'\~   邻苯二甲酸丁基苄基酯 sjb.Ezoq3	uA;#*eiA/   BBP TU58	v*FbvrY   149、91 :I7 mMy*
nC!]@lA   11 {2mF\A#.	VH<d[Mj   17.153 f6Lc"b3s1	*3!r &iY   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 (6NDY5h~=n	Q672iR\#)   DBEP c q[nqjC=	VzIZT{   149、223 l6 }+,v@#
'+ZJf&Ox   12 B$YoglEW:	!Ur .b @ke   17.81 C22h*QM*	}{j@q~w>$   邻苯二甲酸二环己酯 I)vR	FG+pR 8aA$   DCHP (n~fe-?}8	&JKQH   149、167 VpAwvMw
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, .~k   14 !G[%; d	60$;Q,]o   20.444 + jeOZ	}N(gP_?n   邻苯二甲酸二正辛酯 u^|cG{i5"	3RGmmX"?G   DNOP B0)|sH	hgW 1g#    149、279 ^xNzppz`]C
9_jiUZFje   15 7=u Gf$/	JrLh=0i9   22.98 .N.RpRz{f	~&RrlFh   邻苯二甲酸二壬酯 D84&=EpVZ	^M q@} 0   DNP eIF6f& F	5fiWo^s}   57、149、71 uQx/o^