[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： %>,B1nt
 
oJ\)-qSf  
!-G'8a|7  
P:~Xaz\F  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） :+ASZE.  
3K{XT),  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 Z)JJ-V!  
,s=jtK  
流  速：1.0 mL/min }"$2F0  
X jJV  
波  长：242 nm ujlIWQU2mo  
p3m!Iota  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm）  9S<87sO  
k`j>lhH  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 .Lwp`{F/  
0Q>yv;M  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） U{ZE|b.?b  
\d"uR@$3mG  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A !!{!T;)l  
?{)sdJe  
柱  温：30℃ i)@IV]]6yL  
`Kt]i5[ "  
>}uDQwX8  
=7e|e6  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） 5qe6/E@  

Y:x,pPyl  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 9=l6NNe)|  
?<*mIf:?  
附件二 dj;Zzt3  
P3W<a4 ==  
^D}]7y|fm  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS =JR6-A1>  
v/s6!3pnl  
色谱条件： "44A#0)B'l  
(b*PDhl`+  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm `"-ln'nw  
VJf|r#2  
进样口：250℃，不分流进样 A><q-`bw  
:|5\XV)>  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） rYP72<   
~Q
3y3,x  
进样量：1μL A#@9|3  
"gQ-{ W  
流速：1 mL/min N+3]C9 2o  
H[M(t^GM  
质谱条件：
;iq58.  
pOKs VS%fT  
接口温度：280℃ oj'a%mx  
#<k L.e[  
电离方式：EI [zw0'-h.  
E8LZ% N#  
电离能量：70eV W)z@>4`Bb  
xJ(}?0h-X  
溶剂延迟：7min pcC/$5FQ  
d
Z6P)R  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ON-zhT?v  
fP>~ @^  

!V O^oD7   序号 d$}!x[g$Z	:v Do{My^1   保留时间/min {W11+L{8	duq(K9S   中文名称 ;^f ;<	Y2d(HD@   英文缩写 w^Atd|~gi	8k_cC$*Ng   SIM离子 FByA 4VxB
B6-1q& E/   1 r0/aw	l> *L Am5   8.265 T8NDS7&?	1"S~#   邻苯二甲酸二甲酯 =:*2t	k *K.ZS688   DMP })umg8s	KD`*[.tT   163、77 1O2jvt7M
a: 2ezxP   2 ,t +sw4	w>wzV=R   9.135 &AnWMFo	F^CR$L& K   邻苯二甲酸二乙酯 CU@}{}Yl	}H:wgy`   DEP Y+{jG(rg.F	M9~6ry-_   149、177 [l}H%S 
!~tf0aY   3 B.:1fT7lI	?JBA`,-   10.888 $'<FPbUtD}	4v`G/w   邻苯二甲酸二异丁酯 H5*#=It	3taGb>15   DIBP HPg%v|	Bo\~PV [   149、223  : 76zRF
a_-@rceU   4 u%lUi2P2E	'$rCV,3q   11.637 }9glr ]=	9tb-;|   邻苯二甲酸二丁酯 :L lZ#V2	UWhJkJsX   DBP Z}t^i ^u	@WJ\W`P   149、223 qozvNJm)
z@w}+fYO   5 Iqn (NOq^[	O1)\!=& .   11.979 )B)f`(SA"<	pT3icy!A=   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 z6rT<~xZtu	jWV}Ua   DMEP D6l.x]K	bk;uKV+<   59、149、193 Hk@Gkx_
@\XeRx;   6 yz=X{p1	>:> W=   12.72 3Jlap=]68S	Bf;_~1+vLG   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 d[J_iD{ &	@sA!o[gH   BMPP c$71~|-[	o0f`/ 6o   149、251 rf:H$\yw
#0[^jJ3J   7 ceJi|`F	_3yG<'f[ Y   13.044 9%iQ~ 	pF8 #H~   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 s) shq3O	.Lna\Bv   DEEP yW=+6@A4	kt978qfk   45、72 ?e<2'\5v
2]]v|Z2M4   8 \toU zTT	}Pg}"fb^   13.41 |j`73@6	f|~{j(.v   邻苯二甲酸二戊酯 Lz'VQO1U=	r[a7">n   DPP ;mG*Rad	,|({[9jA   149、237 `GC oi ?n7
.:r ~?$(   9 Rqh5FzB>	vju FVJwL   15.552 "?I#! t%'	J?QS7 #!%   邻苯二甲酸二己酯 pjWRd_ h.	c{1;x)L   DHXP &|/_"*uM	2%W;#oi?   104、149、76 b2m={q(s
cm< #zu3~S   10 i5VZ,E^E	#De>EQ%   15.694 uoS:-v}/Y~	ar3L|MN   邻苯二甲酸丁基苄基酯 Hn|W3U	FlqGexY5   BBP 1EyN |m|	to={q CqU   149、91 ^P)f]GQx
L)e"qC_-   11 ]G/m,Zv*:	h0{X$&:   17.153 aJu&h2G	8=8hbdy;   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 70'OS:J=\	honh'j   DBEP 'VDWJTia	8z=# 0+0   149、223 kAftW '
|RX#5Q>z   12 N\{"&e	6o't3Peh   17.81 i%2u>Ni^	9+ 'i(q z   邻苯二甲酸二环己酯 }b_Ob	y`I>|5[`   DCHP ?f?5Kye	(r|m&/   149、167 yRXML\Ge
FnvpnU" ,   13 QLqtE;;)JK	(Pc>D';{S   18.056 KC;cu%H	bRAD_   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 PR8nJts W5	f-%M~:   DEHP #Y7jNrxE 	/VYT](   149、167 M7=,J;@
<6UXk[y   14 -1Q24jrO-	v>8.TE~2   20.444 2u j .*	|=0vgwd"S   邻苯二甲酸二正辛酯 QuR}6C	6 byeO&d   DNOP 5]&sXs	\c2x udU   149、279 wUaWF$~y
<tvLKx   15 @&?(XY 'M%	Gaz va/e   22.98 G2|jS@L#	%,WH*")   邻苯二甲酸二壬酯 z)M#9oAM	DKf(igw   DNP vv.E6D^x(	KO"/   57、149、71 L2>e@p\ >

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 dBM{]@bZ  
>,Zn~8&Z  
附件三 {QN 5QGvK  
=pj3G?F#  
ww+,G nV  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 _K!)0p  
0=9$k   
UsCaO<A  
e?o/H  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 +sq_fd ;'D  
M`* BS  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 & \C1QkI  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% wT,=C'  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31%
\IqCC h  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% uA t{WDHm  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% ZhC,nbM  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% h$6~3^g:P  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% b9v<Jk  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% V:+z3)q
F  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% a#9pN?~  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% G9GLRdP  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% |TR
+Wn  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% iHvWJ<" jR  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% D`KaIqLz  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% "I9r>=  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% |y+_BZ5  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% i` ay9J8N  
,*?[Rg0]+  
N0JdU4'  
   J(wFJg\/  
{];-b0MS~  
*v?kp>O  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 !]RSG^%s{  
=)gdxywoC  
0z4M/WrNt  
%H2ios[UO  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 Hrph>v  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% !6@'H4cb=  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% T#*H  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% F"O\uo:3  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% o)^
W z  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% Gn_D IFa  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% `[ U.BVP'  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% V[KN,o{6  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% "QiR  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 6=;(~k&x9:  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% VJ&<6  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% j-W$)c3X  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% }X^MB  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% H@?} !@  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% jYRSV7d  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% NimgU Fa  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 ettBque  
:.BjJ2[S  
;*nzb!u\\  
Rm,>6bQx  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 wr:-n   
(B@\Dw8^  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 ^*y1Fn0  
KG(l=? N  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 bq5we*"V  
a7b1c!  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 YiL^KK  
z-]ND  
Gt,VSpb~s  
]-+l.gVFW  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 Oq}7q!H  
cxPOO#  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， e+m(g  
9m"EY@-  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 B'PS-Jr  
G 40  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 Io/;+R.  
w H`GzB"  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 *~UK5Brf1  
Q:ql~qew  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 !<h-2YF<M  
' 1dhdm8  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 )~w bu2;  
|g<l|lqz|  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 E7<l^/<2S+  

gz;&
u)  
FQROK4x%"  
U]1(&MgV  
mibp
G9+d  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： WDkuB  
s]H^wrg&  
B[F-gq-  
,a0pAj  
1、样品提取方法： JYm7@gx  
l?8)6z#Zl  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 [ohBPQO  
y&oNv xG-  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 s-*._;  
bMKL1+y(  
SDYv(^ f ,  
L]d-33.c!H  
2、固相萃取方法： @= Fi7M  
LF*&(NC  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： ~9\zWRh  
'CR)`G_'[  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； d3;qsUh$yv  
 k1 -~  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 6Jz^  
zDTv\3rZ4X  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； _<c$)1  
p[AO' xx  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 J%lgR  
vmTs9"ujF,  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 vQ}6y  
X1{[}!  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 ew _-Eb  
8mTM$#\  
8K(Z0  
(+uj1z^  
补充说明： {@! Kx`(:  
<f CKUc  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 .itw04Uru  
3rLTF\  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 (=D&A <YX  
Y0?5w0{  
`al<(FwGE  
L(&&26Y  
y;/VB,4V  
>EY3/Go>  
.^B*e6DAD  

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O%bEB g  
;+"+3  
@;"|@!l|  
dkz=CY3p%X  
vam;4vyu  
~sh`r{
0  
V-BiF>+  
1eF3 `  
a^I\ /&aw'  
.:F%_dS D  
eceP0x  
VZKvaxIk
6  
&O
H={Au  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ,s"^kFl  
u0
`S5?  
色谱条件： Jdj2~pTq  
4O^xY 6m  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Swig;`  
vN;N/mL  
进样口：250℃，不分流进样  mn"G_I  

kTOzSiq  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） .ypL=~Rp  
f@wquG'  
进样量：1μL ct Z uA+  
H)kwQRfu  
流速：1 mL/min 5H<m$K4z  
&R'c.  
%}SrL*  
24 'J  
质谱条件： we//|fA<  
yW=::=  
接口温度：280℃ ,wb:dj-  
hR?{3d# x2  
电离方式：EI T4Uev*A  
IVY]EkEG~  
电离能量：70eV rH Lm\3  
W:2( .?  
溶剂延迟：7min GR_-9}jQP  
[q[Y~1o/&H  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 C ;W"wBz9  
%J?xRv!  
<iC(`J$D  
I+!
0O  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

^hM4j{
|&M  
}S-O&Z  
pl?`8@dI  
on`3&0,.