[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： 8_>\A= E  
tzi+A;>c(v  
~D@V@sX  
'nP'MA9b;a  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） "x9xJ  
x@DXW(  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 kSU5  }  
T~"
tex]  
流  速：1.0 mL/min [7 <X&Q  
[2i+f<  
波  长：242 nm + A0@#:B  
15yIPv+5  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） `yQHPN0/  
l06 q1M 3  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 n:*+pL;
  
gKYn*  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） <U~P-c tN  
+vU.#C_2  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A (XW#,=rYk  
"Q/3]hc.  
柱  温：30℃ 61mQJHl.  
?BLOc;I&a  
yjSN;3t71  
B}MJ?uvA  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） ScTqnY$v  
G` 8j ^H,  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 MO D4O4z&  
pP r<8tm[  
附件二 c !;wp,c  
~"wD4Ue  
H|!s.  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS |HA7 C  
esHiWHAC  
色谱条件： Y]lqtre*Y  
ZX0c_Mk=  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm r#Mx~Zg~  
:qbG%_PJ  
进样口：250℃，不分流进样 2tv40(M:<  
6ZR0_v;TD  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 5\S7Va;W  
gp HwiFc  
进样量：1μL `k&K"jA7$  
&w0=/G/T=~  
流速：1 mL/min yxN!*~BvL  
|esjhf}H>v  
质谱条件： <gLtX[v!CL  
P@YL.'KU)  
接口温度：280℃ Zk UuniO  
h)8+4?-4I  
电离方式：EI /\cu!yiX  
2?iOB
6  
电离能量：70eV ""3m!qn#  
F9P0cGD s  
溶剂延迟：7min |8 2tw|<o  
C2rj
]t  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 c4>sE[]  
>xV<nL
f/  

Di<J6xu   序号 "Dl9<EZ	5m.KtnT)   保留时间/min 2Cd --W+=	sb|3|J6=   中文名称 r($_>TS&"	N=Uc=I7C   英文缩写 p_5>?[TW:	yxCMl.   SIM离子 +f\pk \Ith
7"n)/;la   1 MJ>Qq[0	3{Ek-{9   8.265 Bbl)3$`,	l:zU_J6   邻苯二甲酸二甲酯 b`h%W"|2L	/<(*/P,>   DMP 3x"@**(Q	U^M@um M   163、77 ' "ZRD_"
2Vz'n@g=   2 Z:#.;wA	]j& FbP)3   9.135 PHQ{-b?4t	wrH7 pd   邻苯二甲酸二乙酯 2Ryp@c&r^	HzP.aw4   DEP NNwc!x)*	Y{,2X~ 7   149、177 hZ!oRWIU%G
Af`z/:0<   3 T'hml 	1XG$ z@NN   10.888 ]x2Jpk99a	USprsaj   邻苯二甲酸二异丁酯 `"B^{o	8zAg;b[   DIBP ;J'OakeVO	0F^]A"kF   149、223 IdF$Ml#[h
?s%v 3T   4  [@<G+j	[%jxf\9jJ_   11.637 a!D*)z Y	) \ 4 |   邻苯二甲酸二丁酯 SF^x=[ir	gfm;xT/y   DBP 0I @$ 0Gg	)\0q_a   149、223 MRs,l'
f;wc{qy   5 -`Q}tg>cT	'gDe3@ci!   11.979 P"F{=\V1`<	kaQ2 A   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 ZPyM>XK$4	:}9j^}"c3   DMEP J?%}=_fsa	\A<v=VM|   59、149、193 TvQ^DZbe
=& -[TPW   6 XoItV	Np2ci~"< .   12.72 zOGR+Gq_Z	#$'FSy#   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 #?&0D>E?k	H}nJbnU   BMPP \ VN=Ef\E	<1@ (ioPH   149、251 m22wF>9
u^4h&fL   7 Q~Ea8UT.#	y=H@6$2EQ   13.044 CAgaEJhX3	]J@/p:S >   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 |4C^$	L`3n2DEBf   DEEP R$6qoqv{yG	`}8&E(<   45、72 C}"@RHEu
U^_D|$6   8 BD*G1k_q	\:/Lc{*}MD   13.41 x';uCKWV	Iti0qnBN5   邻苯二甲酸二戊酯 \}dyS8	wCb(> pL0   DPP P&=lV}f	8Y{s;U0n   149、237 $G!R,eQ
0A[esWmP   9 Vfs$VY2.	SF<Vds}A2   15.552 Fx#jV\''s	d7Ro}>lp   邻苯二甲酸二己酯 elO<a]hX	}iiHr|l3   DHXP 4^Rd{'m t	Gt-UJ-RR y   104、149、76 :E_a0!'
B#l?IB~   10 2xxB\J	[c&B|h=>   15.694 smy}3k	IApT'QNM   邻苯二甲酸丁基苄基酯 1TN}GsAj	<z)m%*lvU   BBP \=2m7v#E	G=/k>@Di   149、91 hf<J \ 
[AzO:A   11 Pcd *">v	U>qHn'M   17.153 3z =^(Y	@4+#Xd7"   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 z }4L=KR\v	QV|>4^1D   DBEP K >tf,	$hrIO+   149、223 eTay>G
48D?'lW %   12 K!z `	f{ #j6wZM   17.81 I s57F4[}	R*pC.QiB~   邻苯二甲酸二环己酯 3.G j4/f	px''.8   DCHP kJ:F *34e=	25y6a|`   149、167 7Cqcb>\X
266oTER]v:   13 p>=[-(mt	BP[|nL   18.056 QnouBrhO	0JuD^   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 >ydRSr^	e?0q9W   DEHP lfsqC};#\	v60^4K>   149、167 :K82sCy%5
|WryBzZ>on   14 ~rr 4ok	\'CN   20.444 'uDjFQX	FSuAjBl0-   邻苯二甲酸二正辛酯 # {fTgq	`cQo0{xK   DNOP 7`IpBm<	W>(/ bX   149、279 U'UQ|%5f
depYqYK7G   15 !|q<E0@w\	v1k)hFjPK   22.98 m]_FQWfet	22<0DhJ   邻苯二甲酸二壬酯 Giq=*D+	r!P}u   DNP p_ Fy>j	:0K8h   57、149、71 J`IDlGFYp

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 Zoow*`b|$U  
*Mi6  
附件三 raQYn?[  
"k
>bUe|RG  
F*<Ws;j  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 `Kp}s<  
)/TVJAJ  
!:J<pWN"  
+ -k`x0v  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 gD40y\9r  
;S=e%:zb  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 b l9E&B/  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% &@Yoj%%  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% T/3;NXe6E  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% *Ag,kW"
 
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% 1 pYsjo~  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% s={X-H< 2  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% fjG/dhr  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08%
T)*l' g'  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% %0go%_  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% >4F dxa  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% rUhWZta  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% UeC 81*XZ  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% A89Y;_4y  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32%
 U5T^S  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% 1/F<T  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% B>c
[Zg1  
n C\(+K1%  
KI^q 5D ?  
   #h}
IUR  
x`b~ZSNJ%  
il 8A&`%  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 VhJyWH%(  
!IQ
feoT  
k1@ A'n  
K%.YNVHHC  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 071E%
u,  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% &d &oP  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% (Mire%$h  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% UHsrZgIRYT  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% }G:uzud10  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% qyG636i  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% ,VcDvZ7  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% E[htB><  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% >Qbc(}w  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% Cx3m\ \c  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% q9]^+8UP  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% !O-_
Dp\#  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% _2Xu1q.6~5  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% RDZh>K PG  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% Oi&w_ Z0  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% j%y+W{ Q[  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 }g`A*y;t  
ArF+9upGY  
$#0%gs/x  
V+E2nJ  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 (0Y6tcV]R  
Ha;^U/0|  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 W~gFY#w  
'?q|
7[SU  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 'os-+m@  
&x\u.wIa  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 84|Hn|4t  
F!N;4J5u  
s
kr^m%W  
trg+")a  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 |VTm5.23  
irpO(>LK  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， .#Z}}W#  
j[9xF<I  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 8gr&{-5  
-7hU1j~I  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 H+\rCefba  
WSKG8JT^|  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 i8+kc_8#d  
tbl!{Qwx  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 `N;u#z  
3@\vU~=P:  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 aG?'F`UQ  
&l-g3l[  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 >/ECLP  

mMK 93Ng"&  
Z?eedVV@  
r{Z4ifSl(  
0(^N  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： -9q3]nmT(  
U~8, N[  
*XG.?%x*|  
Rw`64L_
  
1、样品提取方法： N9PEn[t@  
<s (o?U  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 O _^Y*!  
LcmZ"M6  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 BBRZlx  
l\{r-F N  
a}kPc}n\  
g"X!&$
&  
2、固相萃取方法： fv
Z[eJ  
W-4R;!42  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： Ca#T?HL  
+Al*MusS  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； l+<AM%U\ V  
iq3TP5%i  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 9PJnKzQ4  
256V xn  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 4'H)h'#C  
8,]wOxwqi  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 *I`Eb7 ^  
[.nkNda5)v  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 M#xol/)h  
>*]B4Q  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 /1?{,Das=  
kDc/]Zb%  
^*WO*f>y  
3OJGBiDAr  
补充说明： [`bA,)y"  
W7.QK/@  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 __ G=xf  
sDyt3x N  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 b&.3uls6  
]!cLFXa  

me@EKspX  
Ikgia:/-Z  
w/Wd^+IIn  
sKDL=c;?j  
CMHg]la  
P@Av/r  
TJkWL2r0c  
]0;,M  
<"!'>ZUt  
.KF(_ 92  
BHZSc(-o  
&%@>S.  
T$s)aM  
2Q[q)u  
[jgC`  
M
pLn)  
-/J2;AkGH  
tq5o  
v{TISgZ  
iuWw(dJk  
M@O<b-  
;X[23A{
 
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS [LHfH3[gU  
-xc' P,`  
色谱条件：  Q-Rt  
^
tFgkzXm  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm XP_V  
OPwO`pN  
进样口：250℃，不分流进样 ZVmgQ7m  
+{S^A)  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） dsJHhsu6  
XDi[Iyj  
进样量：1μL SH5G  
SRx `m,535  
流速：1 mL/min L E>A|M$X  
/N&)r wc  
pZ4]oK\*  
U:.  
质谱条件： *.DTcV  
0-W{(xy@4  
接口温度：280℃ ~D)!zQkD  
hd2 X/"  
电离方式：EI TKsze]/q  
0}UJP   
电离能量：70eV u,e(5LU  
Gw$sL&1m\  
溶剂延迟：7min iTt"Ik'  
7)IBIlV  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 a<%WFix  
,*2%6t`N?  
%:n1S]Vr  
k[l+~5ix  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

CJ_X:Frj)  
R0;c'W)  
D>,]EE-  
!arcQ:T@G