[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： PY\PUMF>  
/4S;QEv  
mx
Tk+j=  

T(X:Yw  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） pck>;V  
>mu)/kl  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 3*S[eqMJc  
X
33v:9=  
流  速：1.0 mL/min vS;'}N  
$N+6h#  
波  长：242 nm 8:;#,Urr  
v#w_eqg  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） R"xp%:li  
GG-[`!>.pw  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 z_SagU,\  
)q^ Bj$  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） 90:K#nW;  
_vYzF+  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A ym%slg  
PnWD}'0V  
柱  温：30℃ w+UV"\!G)Q  
&sOM>^SA
D  
vZjZb(jlN  
%xg"Q
|  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） D1"7s,Hmu  
jMU9{Si  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 }p'8w\C$  
R2^iSl%pj  
附件二 960qvz!  
'DAltr<  
Yo2Trh  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ROoE%%8I  
-V=arm\#z  
色谱条件： |9s wZ[  
0|C[-ppr  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm zqGYOm$r  
?)cJZ>$!w  
进样口：250℃，不分流进样 60PYCqWc  
)BLmoJ Of  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） .BL:h&h|y  
>eo8  
进样量：1μL ;D&wh  
f[@#7,2~M  
流速：1 mL/min MVAc8dS  
\X opU"  
质谱条件： 7.|S>+Q  
@Z2/9K%1'  
接口温度：280℃ ;U7t  
IMR$x(g= F  
电离方式：EI & =sayP  
Ph\F'xROe  
电离能量：70eV }2xb&6g~o  
2$Y3[$  
溶剂延迟：7min MZ
i8Fo'  
nK:`e9ES  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 8)`5P\  
B#4S/d{/  

^ N_`^m   序号 GD/nR4$	Q,TaJ]   保留时间/min lc-*8eS	6KBHRt   中文名称 vev8l\	W.sD2f   英文缩写 3~8AcX@	/3;=xZq   SIM离子 )S"o{N3B
N}1-2   1 6q !7i%fK?	_4De!q0(   8.265 _2xuzmz0	13]y)(   邻苯二甲酸二甲酯 !DCVoc]pV	ug>]U ~0   DMP &s_}u%iC	zh?xIpY   163、77 l %]<-
mRNHq3   2 yzODF>KJ	_LLW{^V   9.135 P'KY.TjWb	4{uJ||!   邻苯二甲酸二乙酯 PP~CZ2Fze	qsQ]M^@>   DEP < ;.}WQC	&FT5w T   149、177 8Fyc#Xo8
V/+H_=|   3 yKel|vM#	C8O7i[uc   10.888 U!3uaz'	:cIu?7A   邻苯二甲酸二异丁酯 ~M|NzK_9	S+4I[|T]Y   DIBP W` 6"!V	6T5A31 Q   149、223 4'7 v!I9
d7n4zx1Hh   4 7l4InR]	OoA5!HEh   11.637 q|de*~@-P	bF8xQ<i~Y   邻苯二甲酸二丁酯 rZwf%}	ZKiL-^dob   DBP !kjr> :)x	3<Pyr-z h   149、223 rA>A=,
7J</7\   5 3z{5c	0|*UeM   11.979 NC[GtAPD3	Oujlm|   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 b*F :l#	!EyGJa[i   DMEP +p%5/smfs	6vp8LNSW   59、149、193 0ga1Yr]
kxKnmB#m-   6 3Wtv+L7Br	7T(OV<q;#   12.72 W;)FNP|MT	| 9\7x T   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 `__?7"p )\	&j ~|3   BMPP PU/Br;2A	"8iyMP%8   149、251 K {1ZaE H
,mBKy a)   7 ,B/p1^;.	94k)a8-!   13.044 y:6'&`L	1&dsQ,VDl   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 8UY=}R2C 	z t >_)&b   DEEP }.|5S+J?[	`J7L ecgo   45、72 { `|YX_HS
x_iy;\s1   8 xS\QKnG.	`zOAltfd   13.41 +(P43XO08	Jc#)T;#6   邻苯二甲酸二戊酯 F@(}=w^(A	;gu>;_   DPP n; '~"AG)	xS-nO_t 'E   149、237 >@89k^# Vc
+FKP5L }   9 kkBV ;v%a	|3lAye,t)a   15.552 p1gX4t]%}a	@DC2ci >   邻苯二甲酸二己酯 :-@P3F[0	w,#W&>+&   DHXP F*( A; N_y	,) jB<`   104、149、76 ./*, Thc
[)6E)E`_e   10 <21^{ yt1	SK}g(X7IWH   15.694 _p2<7x i 	Wq&c,H   邻苯二甲酸丁基苄基酯 OxGCpbh*7o	ea}KxLC`,   BBP n ZZQxV,	>b](v)   149、91 8/$iCW
mBkQ 8e   11 F9J9pgVP	ouZ9oy(}a   17.153 *!s?hHv	#X_M   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 .[85<"C	!7*/lG   DBEP ?S:_J!vX{	G"sc;nT   149、223 j=QjvWD
bdhgHjz   12 #T`+~tW'|	hd%F7D5   17.81 D|#(zjl@	/! G0 g%k   邻苯二甲酸二环己酯 r26Wysi~%	rrRC5h   DCHP `sC8ro@Fm	9DKB+K.1   149、167 %z(=GcWm
Rx2|VD   13 t4uxon	4` ]1W,t   18.056 V@f#/"u'	0q!{&pt   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 JpiKZG@L	I]1fH   DEHP n_glYSV!	!1 R   149、167 Jq)k?WS
<0}'#9>O   14 aH~ "hB^e	R?I3xb   20.444 %Kp}Wo6	B;Vl+}R   邻苯二甲酸二正辛酯 0}N^l=jQ	qZG >FC37   DNOP $4pW#4/4	In2D32"F   149、279 =|/b[Gd(
&D#v0!e~x   15 %iv'/B8	G <q@K-   22.98 Ql 1# l:Q	zO,sq%vQn'   邻苯二甲酸二壬酯 'I2)-=ZL6	*(rE<   DNP &~8}y+z	"yumc5kt   57、149、71 ]jYM;e

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 -AbA6_j  
9/'j<v6M  
附件三 fN&O `T>  
/E*P0y~KTW  
!is8`8F8  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 s_]rje8`  
m{1By/
U  
^awl-CG  
#3qkG)  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 uW[<?sFG  
\=QG6&_  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 2.|
Y  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% f>RPh bq|  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% D3jP hPy.  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% f",B;C  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% t!PFosFp  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% +x WT)h/  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% 7`P(LQAr!  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% fc M~4yP?  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% SQEXC*08  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% jx-W$@  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% f'}23\>  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% NE/3aU  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% 44n^21k  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% /+3|tb  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% R^K<u#>K  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% %T88K}?=  
V+E2nJ  
a1s=t_w
T  
   ql],Wplg  
hmks\eb~  
m+1MoeR  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 YRB,jwne  
T8ZsuKio]  
}mX;0qO  
{y :/9  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 G`w7dn;&  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% QHA<7Wg  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% ;@Ls"+
g  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% B<+}_3.  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% /SZsXaC '  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% }`>u+iH#a  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% ]W]Vkkg]  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% taI])  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% )(y&U  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% o D^],  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% +xB!T1pD  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% eBG7]u,
Q  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% ]yA| m3^2  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% ~^:/t<N  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% C$Ldz=d  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% 4RJ8 2yq-  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 b?B"u^b!  
HTQ.kV  
U87VaUr  
 O|4~$7  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 feQ_dA q  
#y-OkGS ^  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 ##}a0\x|  
E36<Wog  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 bxrByu~|1  
,y:q]PR  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 S8.nM }x  
~AjbF(Ad  
;9,Ll%Lk<  
?#,\,  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 o~mY,7@a  
hL67g  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， %do|>7MO@  
|+suGqo  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 /bt@HFL|`  
b[e+ (X  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 <ywxz1i  
r[EN`AxDb  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 P1TLH2)  
2=["jP!B  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 #<yR:3  
BCsW03sQ  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 +qzs C/y  
FIC 2)  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 k3S**&i!CR  

<$z6:4uN_  
NVnId p  
#ME!G/  
) _C+\K*  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： +}VaQ8ti4  
(1IYOlG4  
Sy@)Q[A  
I|n?32F  
1、样品提取方法： =e)t,YVm  
M}fk[Yr>  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 _sqj~|K  
|lCS^bA3  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 |`|#-xu  
CP'b,}Dd?I  
TUBpRABH  
"hmLe(jo}  
2、固相萃取方法： &t ~NR$@  
/S{U|GBB%r  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： W KAG)4  
[I?[N.v  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； 2U|"]tpM&  
Wsb>3J  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； .C\2f+(U  
7{Lp/z%r  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； =Vm3f^  
0QP=$X  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 }a!ny  
aUF{57,<  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 ,\?s=D{  
p/yz`m T'w  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 w`DcnQK'  
9Af nMD  
Hu9nJ  
/mA\)TL|]  
补充说明： IgjPy5k  
8.G<+
.  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 (*M0'5  
7H*,HZc@=  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 ^&\pY  
cTz@ga;!mI  
Oq$-*N  
T Xiu/g(  
H<}|n1w<  
s2(7z9jR  
3dz{"hV  
^rs{ 1S  
M3elog:M  
2}7_Y6RS*  
ck%.D%=  
Y4w
]jIv  
E=8GSl/Jx  
j\wZjc-j  
H0 Zo.Np  
:ssj7wl :  
*P5\T4!+d  
KgbBa2@+  
(&
87 zk  
?(U;T!n  
Z"'*A\r2  
 j'Jb+@W?  
4D DBf j  
AbhR *  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS U}4I29M  
pEz^z9  
色谱条件： .I EHjy\+  
!Yr 9N4  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm Cg?Mk6i  
6]Q#4  
进样口：250℃，不分流进样 Nd "IW${Kg  
<,0/BMz  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） * U
6+b  
X`EVjK  
进样量：1μL _&\ 'Va$  
_68vSYr  
流速：1 mL/min /;w(sU  
t2vm&jk  
v0!|TI3s  
h~]e~u V  
质谱条件： aNY-F)XWa  
YmFg#eS  
接口温度：280℃ 4h_YVG]ur  
jIr\.i  
电离方式：EI ?<^8,H  
l'_]0%o]  
电离能量：70eV +ctU7 rVy  
LxGD=b  
溶剂延迟：7min mD.6cV  
P(Rl/eyRM  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 P*?|E@;s`  
Kr'?h'F  
<QFayZ$  
c1i:m'b_5  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

fap]`P~#L  
#B
cUE?K*N  
G1e_pszD{o  
2cQ~$