[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： Ats"iV  
Oe$cM=Yf  
gRdE6aIZ  
qvYY
Ku  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） kc8GnKM&mc  
; tv
B{s_  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 4C01=,6ye  
$o]zNW;X  
流  速：1.0 mL/min .
[1A  
Q^MB%L;D  
波  长：242 nm ]; ^OY\,  
AF3t#)q  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） j~Gu;%tq  
(sqS(xIY  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 &/JnAfmYqt  
]LSa(7>EU  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） $\^]MxI  
_)_XO92~  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A ~!&[;EM<bm  
4l$8lYi  
柱  温：30℃ #[[p/nAy}A  
/GeS(xzQ  
Z^~6pH\  
unX^MPpw  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） nb|MHtPX  
~%}g"|o  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 C {,d4KG  
<n:?WP~U  
附件二 /<2_K4(-{4  
<5#e.w  
jCl[!L5/1  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS POG5x  
#RD%GLY  
色谱条件： <>:kAT,sP  
p~b$+8#+  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm o&O!Ur  
"<(~  
进样口：250℃，不分流进样 9e5UTJ  
AK!G#ug  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） L}mhMxOTi  
6p@ts`#  
进样量：1μL <gy'@w?  
Uww^Sq  
流速：1 mL/min 5-*]PAC  
8f.La  
质谱条件： Xwi&uyvU&  
OOCeZ3yF(
 
接口温度：280℃ f+
V':qz  
v`&Z.9!Tz^  
电离方式：EI "x)DE,  
DtZm|~)a  
电离能量：70eV sfa'\6=O  
>$DqG$D   
溶剂延迟：7min [/G;XHL;?  
N6;Z\\&0^q  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 kdCOcJB  
#A;Z4jK  

.TC `\mV   序号 =]e^8;e9	gQWX<   保留时间/min l{9h8]^	Tm\[q   中文名称 P-[K*/bPw	yipD5,TC   英文缩写 p^P y,	w9$ 8t9$|   SIM离子 ~+C?][T
dM{~Ubb   1 @T1+b"TC	:xS&Y\ry   8.265 +<9 eN	d`uO7jlm   邻苯二甲酸二甲酯 ,,%:vK+V	(%yc5+f!   DMP QM_X2Ho	]/Yy-T#@   163、77 exO# >th1
F] ?@X   2 a T:AxYn8	br;H8-    9.135 {XD/8m(hN|	'nWs0iH.   邻苯二甲酸二乙酯 $.Q>M]xH	MziZN ^(   DEP VP%i1|XZJ	qwF*(pTHq   149、177 juMxl
)nNCB=YF!   3 inPE/Ux	Xqg.kX   10.888 cK[R1 ReH	4e+BqCriC*   邻苯二甲酸二异丁酯 t {Hh&HX	?" "\   DIBP [A"H/Qztk	M|UxE/   149、223 2cCWQ"_,
S5~`T7Ra   4 TBZ-17+	bQwdgc),s{   11.637 L1hD}J'$4	:1aL9 fT   邻苯二甲酸二丁酯 8jy-z"jc	iV?` i   DBP uR#'lb`3	>P<z |8   149、223  =/6p#d*0
u4:\UC'   5 \n#]%X5c	'pan9PW   11.979 ZB828T3	UqN{JG:#.   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 7))\'\	75ZH   DMEP D!oZ?dGCo6	*zq.C   59、149、193 j'+ELKQ
~LbS~_\C=   6 AH^e]<2-	id^|\hDR   12.72 1?(cmXj	&wD;SMr<   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 \b%kf99	]gYz 4OT   BMPP .pvi!NnL-	H ,Z;=N_   149、251 _%5Ro6
*h}XWBC1q   7 ;\f gF@	b0lq\9   13.044 *:Z Dd	87D*-Gw   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 c-B cA	6 J{k(H$3   DEEP |&RU/a	 -i0~]*   45、72 mV3cp rRqv
xai*CY@cQ   8  Vh_P/C+	rJGf.qJJ   13.41 r>o63Q:	x[a<mk   邻苯二甲酸二戊酯 8fl`r~bqZ	G3Z)Z)N   DPP <g"{Wv: h	l hy*h_>   149、237 4 o Fel.o
;lE%M   9 'uBu6G	16=sij%A   15.552 a<^v(r	2LF/H$]o5   邻苯二甲酸二己酯 oKuI0-*mR	5IE#\FITO|   DHXP 6^]+[q}3	l9{hq/V   104、149、76 v[1aWv:
Lt64JH^lz   10 <^#,_o,!	Z^3 rLCa   15.694 q'T4w!V(V	0"<H;7K#W   邻苯二甲酸丁基苄基酯 P3x8UR=fS	6m}Ev95   BBP DX#Nf""Pw	@0Ic3C[rH6   149、91 9+Np4i@
V5+=e^pa2   11 .s?L^Z^	=W(Q34   17.153 b/+u4'"	n@<YI   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 9}rS(/@ }	0yk]o5a++   DBEP I ce~oz)	`KZm0d{H   149、223 bV^rsJm
`'DmDg   12 "Wct({n	D}-/c"':}   17.81 j*|VctM	s:n6rG   邻苯二甲酸二环己酯 /:cd\ A}	Tf>bX_L?   DCHP k R?qb6	g_;\iqxL   149、167 0Um2DjTCG
\;,_S+Fz8   13 KYB`D.O	akmkyrz'&   18.056 Kew@&j~	Sh/08+@+L:   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 p'Y^X	5tl< 3g`   DEHP atj(eg	ko!)s   149、167 YX!iL6?~
,<.V7(|t)   14 ___~D dq	W<'m:dq   20.444 )7hqJa-V	]>!K 3kB   邻苯二甲酸二正辛酯 pd?Mf=>#	s9 mx   DNOP W"scV@HKu	X;$+,&M"   149、279  8$=n j
IW5, 7 .   15 +L$Xv	Zpt\p7WQ   22.98 w?L6!)oiz	XPc^Tq   邻苯二甲酸二壬酯 @FAA2d	JtE M,tK   DNP /|}EL%a	RHW]Z Pr<   57、149、71 g&L!1<, p

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 |)th1 UH  
+zN-!5x  
附件三 np^N8$i:n  
 :A_@,Q  
'W^Y M@  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 oG?Xk%7&\  
Yx%Hs5}8  
^98~U\ar  
%3-y[f  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 -zgI_u9=EB  
g3/W=~r  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 I;|B.j  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% 8qT ys8  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% mR:uj2*  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% sIGMA$EK  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% l<LI7Z]A  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% '9J/T57]e  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% ;))+>%SGCt  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% XJ| <?  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% 051E6-  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% rcG"o\ g@+  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% j-}O0~Jz  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% KBc1{adDx@  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% O- hAFKx  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% L^?qOylu  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% z,p~z*4  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% uZK r  
 >Abdd  
^Y \"}D  
   x g  
d{3QP5  
<`r>h  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 lX4 x*  
JL{VD /f  
&d^m 1  
KB(8f*  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率
JU&c.p /  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% ; )@~  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% .Vvx
,>>D  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% sWnLEw  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% M&9+6e'-F  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84%  z[qDkL  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% B>P{A7Q  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% t&e{_|i#+  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% LG#t<5y~  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% }`m/bgtFX  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% NyNXP_8  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% Z=vU}S>r|v  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% t'k$&l}+  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% gV_}
-VvP  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% f9{Rb/l!BQ  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% Qd3 j%(  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 ^"E^zHM(  
[\]50=&  
$+Z[K.2J  
1> ?M>vK  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 eNh39er  
#-rH1h3*q  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 ZT*ydln  
Y+pHd\$-4  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 5{TsiZh4  
D'>_I.  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 q$L%36u~/  
t mntp
 
E#RDqL*J  
h#I>M`|  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 _{ue8kGt  
W_293["lS  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， =}^9 wP  
@)F)S7  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 g@Z))M+  
Q>qUk@  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 d7^}tM  
AOZP*\k  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 MR7}s4o  
ZmqKQO  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 &A/]pi-\  
&,vcJ{.  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 2ACCh4(/P  
)6MfRw  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 )iX~}7  

&l[$*<P5V  
/[>sf[X\I9  
zZC9\V}R  
E=w1=,/y  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： :<#nTh_@\'  
4
I?^t"  
u4|$bbig  
SG4%}wn%  
1、样品提取方法： ~**.|%Kc  
x~j`@k,;  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 LRMx<X8  
V}NbuvDB@  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 H?y,ie#u  
Oh\<VvZuN  
p`#R<K  
Vr1<^I b  
2、固相萃取方法： HuKc9U'7A  
3fJc 9|  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： 3nnJ8zQ  
1,!(0 5H  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； ; XN{x  
df#$9-  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； ;Nj7qt  
Jy
Oo1E.  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 3+fp2  
2WV
ka  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 w+E,INdi  
\3aoM{ztD  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 W+X6@/BO  
t#pS{.I  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 qXe8Kto  
Ab"@714@  
s;vHPUB\n  
vv+z'(l  
补充说明： |3[Wa^U5  
|! E)GahM  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 #"\gLr_:m  
4'A!; ]:  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 }$Tl ?BRpU  
mFaZio0GK  
]4]6Qki  
QY?~ZwYB  
4f'V8|QM{  
m?fy^>1  
Ww%=1M]e-  
,\n&I(  
uIZ-#q  
i?g5_HI  
^ ALly2
  

S(8$S])0  
A '5,LfTu  
_EMwm&!  
^_u kLzP9  
A?%H=>v$  
xt%7@/hiE  
U4-g^S[  
*HO}~A%Lx  
3?7\T#=  
6%Pdy$ P  
5b[jRj6  
t&CJ%XP  
80/F7q'tn  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ^1aAjYFn  
/8g^T" )  
色谱条件： $lIz{ySJv  
7MHKeLq  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm PGBQn#c<  
U,q\emR  
进样口：250℃，不分流进样 hn=[1<#^(  
&8_gRP  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 3G~@H>j  
I*kK 82  
进样量：1μL kO{s^_qR^c  
dJ""XaHqf  
流速：1 mL/min 9Z'8!$LYg  
*nsAgGKKM^  
UE ,t8j  
F>[,zN  
质谱条件： "D=P8X&vs  
?Poq2
 
接口温度：280℃ 1u(.T0j7f  
x,S P'fcP  
电离方式：EI (t
GY%oT"  
hcbv;[bG  
电离能量：70eV Y> Wu  
mJ`A_0  
溶剂延迟：7min ~Oq +IA~9  
JEgx@};O  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 mL`5uf  
nn9wdt@.]  
-7&Gi +]  
A7`1-#  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

JS>Gd/Jd  
(q7 Ry4-  
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