[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： @c<*l+Qc  
}=':)?'-.  
|G+6R-_  
;'.[h*u~<  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） l@x/{0  
;E8.,#/a  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 t,*hxzD"  
nMK,g>wp  
流  速：1.0 mL/min m'))prl  
$nB4Ie!WcR  
波  长：242 nm fa7I6 i  
'n7)()"2  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 6dG:3n}  
hrpql_9.  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 yG
)zrRU  
TG\3T%gH/s  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） !2)$lM1@J  
&{):
x  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A L'dR;T[;  
~kdxJP"  
柱  温：30℃ VP|ga}(  
i1q he?5  
1m*fkM#  
# $&!)13  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） UenB4  
<r_L-  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ~_SoP  
VTOZ#*f  
附件二 I:4m]q
b  
j[zo~Y4z  
|!VSed#FSn  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS (Ev/R%Z  
KZFnp=i  
色谱条件： 3jMHe~.E<  
j]uL9\>  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm [<;4$}f\  
(1`z16  
进样口：250℃，不分流进样 =Ri'Prx&  
;9>(yJI+  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） h,-8( S  
r|U'2+vn  
进样量：1μL Q{hXP*5  
dd+[FU  
流速：1 mL/min Jx#r
 
Q~R7]AyR  
质谱条件： vYT%e:8)q  
=|lw~CW  
接口温度：280℃ ~&>|u5C*@  
qd@x#"qT  
电离方式：EI fv1pA+zN[  
+}IOTw"O`  
电离能量：70eV Ku 6bY|  
>EQd;Af  
溶剂延迟：7min cR0+`&  
eGZ{%\PH<  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 5v51:g>c  
iHKWz)0  

JgI+k Nx   序号 ,j{$SuZM	*],]E;   保留时间/min V~rF`1+5N	"xS?#^a   中文名称 L;a>J	F-MN%WD~   英文缩写 fD8A+aA	[[{y?-U   SIM离子 Z4U8~i
({/@=e x*   1 '%&i#Eb	vM5u]u!   8.265 $7q'Be@{	Eeemy*U   邻苯二甲酸二甲酯 cwK6$Ax	pgg4<j_mn   DMP 0)}bJ,5/	:cv_G;?   163、77 `>^2MHF3LT
F?]nPb|   2 $E;`Y|r%WK	m7z6c"?lB   9.135 Rn={:u4	3cK`RM `   邻苯二甲酸二乙酯 y>zPsc,	m S[Vl6   DEP RFyeA. N	zItf>j7|Z   149、177 "T4Z#t
]Y!$HT7\   3 |s WH!:]49	\N1G5W   10.888 [G{{f	i>gbT+*E!   邻苯二甲酸二异丁酯 M|e Qds	OZdiM&Zss   DIBP V[>MKB(	eaQ)r?M   149、223 aML?$_6
Y4,~s64e   4 _uL{@(	$5aRu,   11.637 -E1b5i;f	+5( #~   邻苯二甲酸二丁酯 DYlu`j_ux	D_r&B@4w   DBP #)`N	Q/rOIHiI   149、223 `(A>7;]:
]c,ttS_   5 7a.$tT	zSMNk AM   11.979 cOa.]Kk	qh;ahX~   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 )`?Es8uW	0,*clvH\;   DMEP 9dl\`zlA*	7(B|NYq   59、149、193 We3Z#}X
~[bS+]d!   6 *'=JT#	J+IQvOn_|   12.72 D@"g0SW4	,Oojh;P_   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 6@kKr	6B 4Sd   BMPP %/!n ]g-	`k~.>#   149、251 /HR9(j6
JEq0{_7   7 $c4Q6w	j. O7-t%C   13.044 [9S\3&yoh	+tFm DDx=   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 $r%m<Uc;}O	p] kpDx[9   DEEP 0&$+ CWSM	c|q!C0X[   45、72 p-n_ ">7
nnLE dJ}n   8 41 sClC"	gNr/rp9A$m   13.41 w$Lpuun{	Gs$<r~Tg   邻苯二甲酸二戊酯 SpbOvY=>	rq'Cj<=Zj   DPP =&?}qa(P	?CGbnXZ4Ug   149、237 WHxq -&=
CpHF3o`Z6   9 {`fhcEC	Q`ERI5b6   15.552 ~5$V8yfx h	$(v1q[ig   邻苯二甲酸二己酯 (!kOM% 3{	+ 5E6|   DHXP clK3kBh~&	hEAt4z0P   104、149、76 VD+TJ` r
FEgM4m.(G<   10 INrl^P*	O57n<J'6   15.694 -;=0dfC(	9d{iq"*R   邻苯二甲酸丁基苄基酯 MB|+F	TS+itU62   BBP fk-zT	8_0j^oh   149、91 h nha1 f
],ioY *4G   11 HSHY0	`.Z Mw A   17.153 <i34;`)b	ju#/ {V;D   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 F VBuCi?W	Wr" -~PP   DBEP AcV 2l	e"HA.t[A   149、223 [#S[=%
K#q1/2   12 MHo(j%I1E	rvjPm5[t   17.81 mX))*e4k	[5>f{L!<T<   邻苯二甲酸二环己酯 9xL8 ];-	xu9K\ /{7   DCHP sd|5oz)	_E0XUT!rA   149、167 \xD.rBbt
uCGJe1!Ai>   13 .OI&Zm-	L{_Q%!h3]   18.056 @H%)!f]zWt	Ce 3{KGBw   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 )/VhkSXbG!	# +OEO   DEHP G&qO{" Js	+o+e*B7Eh   149、167 dO/iL7K&
2JY]$$K7   14 :&*Y Io	{')L*   20.444 F91uuSSL	{C+blzh6   邻苯二甲酸二正辛酯 5P=3.Mk	~ <[$.8*   DNOP 1Pya\To,m	6/u]r   149、279 @\{L%y%a0
z$#q' +$   15 &<??,R14	m/ D~D~   22.98 S5o\joc	S 87E$k   邻苯二甲酸二壬酯 Uk@du7P1k	9i9'Rd`g   DNP HpbSf1VvAf	`<Ry_}V   57、149、71 j!1 :+H_L

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 & }7+.^  
B7wzF"  
附件三  Q@!XVQx4  
vm7ag 7@O  
`GSl}A  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 q"5\bh1"  
'jXJ!GFw  
^u2x26].  
azzG  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 S5:&_&R8[  
(f2r4Io|}  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 C[';B)a  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% k8!:`jG  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% 3mHP=)  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% Q-B/SX)!/  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% ,|GjrT{vf  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% J7sH]  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% Kf6D)B 26  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% ">M&/}4  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% d+vAm3.Dg  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% ArjRoXDE  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% %O!TS_~9  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% mHAfKB  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% *Z\AO'h=Z  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% =7#"}%4Q  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% LqO=wK~  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% >K&chg@Hv  
L&rtN@5;  
>JA>np  
   &E
YoviFp  
+6}CNC9Mp  
7< =p*  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 ji\&?%(B  
%"=GQ3u[  
k7{|\w%  
e2BC2K0  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 hrO9_B|#  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% @
h_ bXo  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% 2s>BNWTU  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% ._t1eb`m{  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% 9ZG:2ncdJ  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% -/0aGqY  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% OSLZ7B^  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% #
0Uz1 [  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% ,%BDBZ  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 49<t2^1q  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% eX lJ=S
}  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% l!KPgR w  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% KF5r?|8M  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% wr=KAsH<  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% ~R~.D  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% `m8WLj  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 5W|wDy  
V
SCKWYy  
e&8Meiv+d  
[N%InsA9k  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 sm G?y
~  
^qBm%R(  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 .=G3wox3  
HfP<hQmN'  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 jpR]V86G  
XH*(zTd(?  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 .`J*l=u$  
']c;$wP
 
vlDA/( &  
Er$&}9G+-  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 "W4|}plnu  
=x(k)RTDu  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， [4B(rra  
-H[@]Q4w  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 jY/(kA]}  
pK_zq  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 7T!t*sSO'  
\7xc*v [  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 nDckT+eJ  
6fBA#Kb  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 <.BY=z=H  
ErsJWp  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 ,?%Y*?v  
}y+a)2  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 ev/)#i#s{  

.8XkB<[wb  
u+ 8wBb5!  
Nk?L<'  
@"afEMd  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： NYPjN9L  
pZ 7KWk4  
]E1|^[y  
=j8g6#'u  
1、样品提取方法： G$jw#a[L  
D;Y2yc[v  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 /Tp>aW%}"  
-IL' (vx  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 q ;e/gP2  
_ Uv3glK  
hlHle\[ds  
cB2~W%H  
2、固相萃取方法： $~T|v7Y%  
?d)FYB  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： 1fV\84m^  
M"8?XD%  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； OJs s  
r?W Oum  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； R'aA\k-  
y9K'(/  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； m!:sDQn{3  
m[A$Sp_"-h  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 c B7'>L  
eit%U  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 yj mNeZ  
i",oPz7  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 =Ka :i>  
/ KxZ+Ww>v  
BtKbX)R$J  
b+THn'2  
补充说明： }z_7?dn/  
Ryi%}!  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 =T|m#*{.L  
k E-+#p  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 ^vo]bq7  
oY7 eVuz  
>2K:O\&  
pv
,I_"  
VY "i>Ae  
GD }i=TK  
9C\@10D  
{iVmae  
mjbV^^>  
oCuKmK8  
w&LL-~KI+  
j'|`:^ Sy  
??=7pFm  
t}-rN5GO  
3Uni{Z]Q)  
;.b^A  
=idZvD  
u YJL^I8M'  
lcEin* Oc  
 F K|q*  
VtJyE}  
&Ch~$Wb^  
Ems0"e  
[5QbE$  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS -WK  
]eIV'lP,j/  
色谱条件： (Y$48@x  
{]dH+J7  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm IRl(H_.  
#g
Y|T|  
进样口：250℃，不分流进样 gVI2{\a  
'K|tgsvgme  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） r&c31k]E  
{>R'IjFc  
进样量：1μL 9V( esveq  
S K7 b]J>  
流速：1 mL/min UV8K$n<  
DX%D8atrr  
[*AWCV  
3&z.m/  
质谱条件： uw`fC%-xh  
AV*eGzz`  
接口温度：280℃ J}J7A5P  
WYNO6Xb# :  
电离方式：EI }MV=I$S2U  
{f<\ `  
电离能量：70eV njN]0l{p  
K?:wX(JYT  
溶剂延迟：7min &33.m
dBH  
0x/3Xz  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ^HasT4M+x  
q=40l  
Z2x%  
I{0bsTp;  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

9?_ybO~Oq  
w(xRL#%  
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