[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： {-\U)&6#v  
5g7@Dj,.  
'> "{yi-  
'I]XX==_  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） e2O6q05 ?Q  
 ? }M81  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 WoEK #,I;  
Xqf,_I=V  
流  速：1.0 mL/min BO[:=x`  
MR#*/Iw~  
波  长：242 nm ue_ wuZi  
YZol4q|ic  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） n Nt28n@  
jxog8E  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 k#].nQG  
0fsVbC  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） b #VtPn]  
.GrOdDK$ns  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A MEDh  
+9_Y0<C  
柱  温：30℃ }3(!kW  
y* +y&  
2\xw2VQ@P  
GY~$<^AK  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） cAWn*%  
oTw!#Re)  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 pj>R9zpn_  
+-izC%G  
附件二 )jM%bUk,!  
pKSCC"i&j  
"Y&I#&$b\  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS =KE7NXu]-  
'Y?-."eKh  
色谱条件： ]2AOW}=  
T4eJ:u*;  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ,KY;NbL-Jp  
]N>ZOV,>  
进样口：250℃，不分流进样 *!5CL'  
s
o-5%S  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） =G-OIu+H!U  
Iiy5;:CX:q  
进样量：1μL LU3pCM{  
, ZsZzZ#  
流速：1 mL/min h:Pfiw]  
+k`L8@a3&  
质谱条件： 8JLf @C:  
>X~B1D,SV7  
接口温度：280℃ YidcVlOsO  
x^s,<G  
电离方式：EI HUKrp*Hv  
GQ(Y#HSq  
电离能量：70eV ]d
*9@+Iu  
pGie!2T E  
溶剂延迟：7min ^G4YvS(  
TXImmkC  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 BJ UG<k  
_S9)<RVI+  

CCTU-Xz/   序号 fe\lSGmf	fD!c t;UK   保留时间/min !Fl'?Kz	ztVTXI%Kz   中文名称 'lIs`Zc5N	k9k39`t   英文缩写 t}+/GSwT	&nEL}GM)E   SIM离子 eiK_JPFA-
Sa g)}6+   1 *OLqr/ yb	4aO/^Hl   8.265 SAP/jD$5]>	9KVJk</:n   邻苯二甲酸二甲酯 J?O0ixU	TIGtX]`   DMP NY7yk3	{lf{0c$X.   163、77 6?a`'&
R*r4)+gd   2 i.mv`u Dm	wtS*-;W   9.135 [lzd'	"<iH8Mz Z   邻苯二甲酸二乙酯 ^L%_kL_7	kyHli~Nr"   DEP # 55>?	h4]^~stI   149、177 5_(\Cd<#
mG1~rI   3 h%EeU 3	AqgY*"A7   10.888 ):K %	$5XAS   邻苯二甲酸二异丁酯 =E2 a#Vd	.?u<|4jE6   DIBP c4AJ`f.5	{8.Zb NEJ   149、223 sTd@/>S?p
`"=Hk@E   4 s",Ea*	N}5   11.637 k@7#8(3	O\Huj =   邻苯二甲酸二丁酯 I7_8oq\3D	P7w RX F{   DBP bkdXBCBx?	(wL$h5SG   149、223 t0f7dU3e;L
Y%/RGYKh   5 Tbm ~@k(C	';G/,wB?`   11.979 mo<*h&;&	K\ Wzh;   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯  B=*0	[NE!   DMEP Yp(0XP5o	3F"vK   59、149、193 @"s<0T^H
D?y-Y   6 '?$@hq Qn	r]LP=K1   12.72 >A{e ,&	f'ld6jt|%   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 +h-% {	>7@,,~3   BMPP 3_G0eIE"u	h)s T37   149、251 k ReZch}
512p\x@   7 6|Dtx5 "r	A/9<} m   13.044 Lm!]m\LRZD	w)K547!00   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 4T52vM	>&>EjK4?   DEEP V!*1F1	^Rl?)_)1HE   45、72 k5%)
[ZG>FJDl8   8 H {_D#It	,|8aDL?   13.41 sJQ~:p0e	X% 99@qv   邻苯二甲酸二戊酯 r4K_Wp	~T9QpL1OJ   DPP (,mV6U%	SH"<f_   149、237 a_\ 7Ho$^
>X[:(m'   9 3ohHBo	R:'&>.AUw   15.552 l7<VHz0b	Zy)iNNtn   邻苯二甲酸二己酯 [P6A$HC<	*Br }U   DHXP z#n+iC$9	&liFUP?    104、149、76 A;^{%S
b;vVlIG   10 \O~WMN	|1<B(iB'{/   15.694 xvWP^Qkb	jrm^n_6};   邻苯二甲酸丁基苄基酯 od!s5f!	G !D~*B9G   BBP sAK&^ g	r$LU$F   149、91 '1G0YfG}n
6Tq2WZ}<'   11 D{+D.4\	09iD| $~   17.153 n*~#]%4	)_l(WF.   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 x ;]em9b	%VrMlG4hx   DBEP sJ_3tjs)	{Q 0DHNP(G   149、223 tkHUX!Ow;
Wk/Il^YG   12 .R@euIva	Z1DF)   17.81 *jy"g64j	2\[ Q{T=Qe   邻苯二甲酸二环己酯 \@j3/!=,n%	}An;)!>(nF   DCHP ]=%u\~AvL	]Ai!G7s8P   149、167 X^.~f+d~
2{)<D f@   13 Dl=vv9	_dn*H-5hO   18.056 /C[XC7^4'	:N:e3$c   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ]+AgXUrbOD	6NzS<   DEHP _."X# }W	FGRG?d4?h   149、167 ~DK=&hCd!
iMs(Ywak]   14 D$bJs O	%Wb$qpa   20.444 AV["%$:	#+PfrS=   邻苯二甲酸二正辛酯 3 p9LVa	),+u>Os&   DNOP jj"?#`cW	>dqeGM7Np>   149、279 dq$CCOC^F
r$.v"Wh)   15 X~Vr}	; +E@h=?   22.98 * E3 c--	h 66X746   邻苯二甲酸二壬酯 6 bnuC	HR83{B21   DNP n ob^ I5?	Q35/Sp[;x   57、149、71 35[8XD

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 w`>xK sKW>  
YfxZ<  
附件三 ;EFs2-{K  
{r'#(\  
#
Y`U8n2F  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 ix7N q7!N  
[|k@Suv |z  
5'l+'ox@J  
J]N-^ld\\  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 
3b#KrN'  
g~10K^  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 mKxQU0`  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% lD !^MqK  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% ZZl)p\r  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% s)ZL`S?</  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% kCN9`9XI{  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% 6\b B#a  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% 4V<s"  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% #XC\=pZX  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% Z$HYXm  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% 7M^!t X  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% u]"oGJj1  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% 0Ba-VY.H  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% (AXSQI~y  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% 1 ljgq]($  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% H.w
p{m{  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% W x;9N  
/g@.1z1w  
,j9}VnW)  
   V0ulIKck  
C!RxMccTh  
e! G I<  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 !=|3^A  
i n F&Pv  
V
X2bC(E'%  
&hyr""NkAm  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 GT<Y]Dk  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% UH.M)br  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% BLuILE:$  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% jYO@ %bQ  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% )Xl/|YD  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% IAhyGD{b  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% =pN?h<dc  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% k "'q   
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% Uk6Y6mU V  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 4US8B=jk  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% )}]<o |'  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% e7>)Z  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% [ C]=p  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% toX4kmC  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% /n/U)!tp  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% Ej F<lw  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 7Cf%v`B4D  
9_IR%bm  
2D-ogSIo  
oQ!}@CaN|  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 QQ@, v@j5  
a AYO(;3
  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 Cq1t[a  
YkPz ~;  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 5`oor86  
%H<w.]>  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 e_]1e7t  
9][Mw[k>  
@{I55EQ]  
fbuop&FN+q  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 E=s`$ A  
bMSF-lQ  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， 3J,/bgL5  
n.1a1Tf  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 .FMF0r>l  
54^hBejQ  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 Hd2_Cg FB  
zO\"$8q*  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 &a(w0<  
#]'V#[;~  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 aOuon0  
KWYG\#S0]  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 sd6Wmmo  
7wnzef?)  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 #(H_w4  

9}c8Xt^&  
 49d@!  
\`, [)`  
pA;-vMpMj  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： ork=`};  
Fb/XC:AD  
S lSM+F  
N)S!7%ne  
1、样品提取方法： ,Rx{yf]k  
\v6M:KR5/  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 QQe;1O  
83cW=?UgA  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 tRw@U4=y  
$T<}y_nHl  
-Q;#sJ?  
 q{die[J  
2、固相萃取方法： 1!p/6  
aTGdmj!  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： e75UMWaeC  
Sd IX-k.  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； A>NsKWf{  
kW6%32  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； g8ES8SM  
@\(vX]  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； {OT:3SS7  
=He.fEy  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。
YEYY}/YX  
o%M<-l"!/  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 K&A;Z>l,v5  
Em13dem  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 ;n#%G^!H  
[JTto!Ih$  
O>DNC-m)i{  
Sm3u/w!  
补充说明： 96|[}:+$&:  
?Z %:  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 S0@T0y#  
iL?iz?+.%@  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 /Ic[N&  
O+.*lo
 
#n})X,ip2  
iQ`]ms+  
-Wjh**  
juno.$ 6  
-}<g-*m"q  
IcoowZZ   
@phN|;?  
xdF guV8  
_X%Dw  
\|q-+4]@,  
BlaJl[Piv  
1P5LH5  
~gt3Om
h  
|
cu`f{E2]  
Tk+DPp^  
QNJ\!+,HV  
UPO^V:.R
4  
C1ZyB"{
 
5mIXyg 0:  
@\$Keg=>:  
>;}] pI0T  
#NMJZ  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS TU-c9"7M~  
-fQX4'3R  
色谱条件： N1s.3`  
oB}K[3uB:t  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm -;<>tq
'3`  
nHVPMi>  
进样口：250℃，不分流进样 ^f6 {0  
*@~`d*d  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） +/(|?7i@  
g@}6N.]#  
进样量：1μL niQ+EAD  
~@?"'!U  
流速：1 mL/min e$H|MdY
IA  
l$=Gvb  
JR!Q,7S2!N  
(y  3~[  
质谱条件： pmoGudaRF  
+<GrRYbC  
接口温度：280℃ mn(/E/  
9)jo7,VM  
电离方式：EI <=$rU232}  
~Ry $>n*/  
电离能量：70eV M\9at\$  
Tavtr9L0XY  
溶剂延迟：7min jG =(w4+  
0@o;|N"i  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 x&QNP  
M|1eqR%x-?  
qPp1:a"   
'~ j
y  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

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