[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： bHE7yv [  
pLnB)z?  
Z.'syGuV  
'Dath>Y=  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） ]!Ou e_-;  
s5&=Bsv  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 =xL)$DTg)  
gzf-)J  
流  速：1.0 mL/min _okWQvdH  
BtsdeLj|  
波  长：242 nm :U'Cor H  
/:Lu_)5   
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 8]bz( P#  
<??um
kV  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 wvN
`R  
I4=Xb^Ux  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） p=Y>i 'CG  
uwmQ?LS]V  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A QR0(,e$Dl  
'wQv3;  
柱  温：30℃ 5MF#&v  
3@<zg1.9-  
4w93}t.z  
KpHw-6"  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） w0lT%CPx  
MYdO jcN  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 Vzg=@A#  
[}z,J"Un  
附件二 C!  9}  
"ju'UOcS/  
b:W-l?  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Fc6iQ  
m Y,|J\w@  
色谱条件： }G VX>p  
N2C7[z+l`  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm UL$}{2N,_  
q5DEw&UZJ  
进样口：250℃，不分流进样 I\O\,yPhhP  
Kn`M4O  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） };L ^w:  
ULJmSe  
进样量：1μL X{xBYZv4  
QS[L~97m2M  
流速：1 mL/min W-Hoyn>?2  
o\b-_E5"?  
质谱条件： (t+;O;  
Zdc63fllM  
接口温度：280℃ n{*D_kM(H  
Yy
AJ m^o  
电离方式：EI +ZMls [  
x!LQxoNF  
电离能量：70eV ~}EMk3  
U1_@F$mq<  
溶剂延迟：7min sV"UI  
4fk8*{Y  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 vX0f,y  
(.wIe/  

o1W:ox?kO   序号 LEMfG~Czq	3$.deYa$R   保留时间/min )'17r82a	j`^$#   中文名称 0"2=n.##	@1.QEyXG   英文缩写 wW>zgTG	+zXEYc   SIM离子 \drq G&wl
7K)6^r^   1 ~|<WHHN (	yFDv6yJ.   8.265 _ZY)M	y_\p=0t8   邻苯二甲酸二甲酯 .>Ljnk	'F>'(XWWQ   DMP 'cY` w	n1!?"m!   163、77 -S3MH1TZ
(`y*V;o4   2 W6On93sa	!\&;h   9.135 N[kwO1	^]{R.(#z   邻苯二甲酸二乙酯 035rPT7-2-	(SKVuR%Jj   DEP 5 ~TdD6}	fk_o@ G!0   149、177 kF/9-[]$g,
Iu$K i   3 NH+(?TN	jQ:OKh<Y   10.888 AhZ8 0!	;[fw]P n   邻苯二甲酸二异丁酯 DZi!aJ	*4V=z#   DIBP TY1I=8	.k,kTr$S   149、223 fMOU $0]$<
l5"OIq   4 TA{\PKA)	^k]XEW{PG   11.637 J>\B`E	Y' ow   邻苯二甲酸二丁酯 ONe# r KJ_	}K&7%N4LZ   DBP a[ex[TRKe	M8tRjNWS?   149、223 @7B$Yy#
/ oriW;OF   5 dxmE3*b`	B&@?*^.   11.979 (vTtDKp@	{DR`;ea])1   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 Z-l=\ekJ	f`[R7Q5   DMEP $fzaPD4.	kOed ]>H   59、149、193 |6$p;Aar
2K3{hxB   6 o}$EG	FAj)OTI2S   12.72 L>3x9	'JRvP!]   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 vMm1Z5S/	k@'#@ t   BMPP /@,j232	<UQe.K"   149、251 -&-Ma,M?
+w+}b^4   7 fP(d8xTx2y	LL3#5AA"k|   13.044 `a2n:F	;oy-#p>N%   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 \Z+z?K O	i*@<y/&'   DEEP p{j.KI s7	6x%h6<#xh*   45、72 Yj6*NZ*
D?NbW @]   8 <y?r!l=Am	z}MP)|aH:   13.41 M)2VcDy	 OHhsP}/   邻苯二甲酸二戊酯 Y\$ySvZ0	z}*9uZ   DPP U G~ba	Wwr;-Qa}g   149、237 IX>d`O61*g
CnG+Mc^   9 '.81zpff	YLiSbLz1   15.552 Cd>WUw	JYW)uJ   邻苯二甲酸二己酯 <w)r`D6	NbU[l   DHXP [YUv7|\	.ZJRO >S   104、149、76 \xnWciQ#{
5a hVeY   10 ~;#Y9>7\\'	< cqbUL   15.694 l%1!a	-\ EP.Vtz   邻苯二甲酸丁基苄基酯 --|Wh^i>?	#]ypHVE   BBP 8>WC5%f*	=A!@6Nw   149、91 %\H|B0
Ns7(j-   11 S'_-G;g.	RHO(?8"_   17.153 JAQb{KefdO	nysUZB   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 &' Ne!o8	YYu6W@m]   DBEP RWgNo#<	g'V>_u#(   149、223 .[3Z 1v,
LS88.w\=S@   12 .QN>z-YA6:	sSi6wO$   17.81 w &(|e <	DIzH`|Y   邻苯二甲酸二环己酯 fH>NJK;	D~$r\]av   DCHP ( 8c9 /7h	elFtBnL'   149、167 j"'(sW-
,Qnd3[2[   13 T 3pmVl	li 6%)   18.056 86mp=6@	LG1r]2   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 OSf}Q=BL	M#=] k   DEHP 52,m:EhL	AbYqf%~7`l   149、167 Lg*B >=
_Gjk;|Sx<I   14 Y5FbU	PX n;C/   20.444 3T}izG]	|Clut~G   邻苯二甲酸二正辛酯 nCj2N,mT	g47-db"5   DNOP e*;c(3>(	n>^Y$yy}!   149、279 TT4./R:
]jaQ[g$F   15 X'`~s}vGO	g)_e]&   22.98 !>e5z|1 	SOi*SwQ8   邻苯二甲酸二壬酯 r]l!WRn	K,boVFs   DNP \CXQo4P	hDcEGU_   57、149、71 bLQ ^fH4ww

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 6SC,;p=  
Y 9=(zOqv  
附件三 Pe_!?:vF  
|w*R8ro_  
]u-0 2g  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 S/`%Q2za4  
m$ LVCB  
]=EM@  
Dl&GJ`&:p  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 {u\%hpD_  
r{sebE\ ;  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 id?#TqD  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% \#rO!z d  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% DOQc"+  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% &W6^6=E{g  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% C*X G_b ]  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% -z:&*=  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% U{ ;l0 2S  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% oA tsUF+a  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% Zw] ?.  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% Vh<A2u3&  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% +jqj6O@Tjr  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% a45ss7  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% '+*-s7o{  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% "Jy
~PcJZ1  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% RiO="tX'  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% DP7C?}(  
\;]kYO}  
!RlC~^ -  
   'FzN[% K"  
-qebQv  
p8,0lo  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 # 4|9Fj??  
BN@,/m9OQ%  
sg'NBAo"  
m&R"2t_Z  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 _1jw=5^P\i  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% 3AlqBXE"Z<  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% WwW^[k (X  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% i~&c|  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% 135vZ:S  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% y67uH4&Vm  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% ?An,-N-ezf  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% gKL1c{BV  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% wk02[  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% ,
w&:_n  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% Sue 6+p  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% '@:[axu  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% fQQ|gwVki  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% |5xzl  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% C(,=[Fi-  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% 8Z:Ezg3^  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 A)hq0FPp  
IUluJ.sXIf  
DkDw>Nx<rs  
q,<n,0)K  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 jHs<s`#h  
5u'TmLuKT  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 Ul'~opf  
Zk~nB}Xw  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 cxtLy&C  
E9yFREvQc  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 JK@izI  
4?9soc  
XX]5T`D  
JIyBhFI  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 LVPt*S=/  
PY^^^01P  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， vDu0  
L eG7x7n  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。
Z:\;R{D  
tx:rj6-z  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 A2g"=x[1@K  
F<P WBs%  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 OYqYI!N/  
eh({K;>  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 K#9(|2J%  
W (=Wg|cr  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 jMz1s%C  
68&6J's;  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 ]MqH13`)A  

-eKi}e  
WBS~e  
esCm`?qCP  
= ;sEi:HC  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： S1Q2<<[  
hQ!slO  
qTK\'trgx]  
r&AX  
1、样品提取方法： Vl;GQe  
G5y>v^&H  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 R[ "2kEF  
y74Ph:^k  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 7_r$zEP6  
b&.j>=  
j-2`yR  
m=&j2~<i  
2、固相萃取方法： _RG!lmJV  
TK.a6HJG  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： +RexQE  
V$u~}]z  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； Ui6f>0?  
%1ofu,%  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； S -j<O&h~C  
D8P<mIu}Y  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； 0-~Y[X"9.  
D*+uH;ws  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 G1MuH%4  
8[LwG&  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 ,)mqd2)+"  
*_d+cG  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 m7X&"0X  
y'?|#%D  
hNB;29r~  
grEmp9Q ?  
补充说明： $Gb] K{e  
QjETu  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 FUzIuz 6  
xN wKT
IK$  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 lTe}[@(  
nd 'K4q  
Kx9Cx5B  
PT4Xr=z =  
Ggy_ Ct
u  
r{qM!(T  
#.p^S0\pw  
h.c<A{[I6c  
,c"_X8Fkx$  
[0CoQ5:d?&  
KquHc-fzqr  
lZCvH1&"  
%?+A.0]E  
$wU.GM$t~  
P8!Vcy938  
k:PO"<-U  
%Rv&VF g  
F.c`0u;=  
I_.(&hMn  
~PaD _W#xP  
 fI[tU(x  
bs U$mtW  
'-3A WBWI1  
w[\*\'Vm0  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS L?&+*|VxI  
T+NEw8C?/  
色谱条件： :gDIGBK,  
Gm^@lWzG  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ,@%1q)S?A  
R'qB-v.  
进样口：250℃，不分流进样 !y$Hr[v  
KL#F5\ E  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ('Wo#3b$  
k(<5tvd  
进样量：1μL [&t3xC,  
m9Gyjr'L  
流速：1 mL/min dsX{5  
1qbd6D|t  
][S<M24]Q  
 /XS6X  
质谱条件： !I]fNTv
<  
QD]Vfj4+  
接口温度：280℃ u /JEQz1  
?;>s<  
电离方式：EI Bka\0+  
y;Q_8|,F  
电离能量：70eV yxQxc5/X)  
~cy/\/oO  
溶剂延迟：7min }cgEC-  
OJ8W'"`L&  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 #6fp"  
iHr{ VQ  
s#;|8_L M  
. l RW  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

K+dkImkh  
r1EccY  
mj[PKEdkB  
cbs
y&U