I@:"Qee 北京时间1月25日凌晨消息,
新西兰牛奶中发现了
有害物质——
双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。虽然国际
标准未对
食品中的双氰胺限量,但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
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@?)\~ 本文采用Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil
® HILIC液相色谱柱,建立了
奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理
方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。
^BhS* &ZI-#(P 1 实验部分 !p{CsR8c #.@- ng6C 1.1 仪器、试剂与材料 CX#d9
8\b 高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。
"43F.!P 双氰胺标准品(CAS: 461-58-5;FW=84.08),Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil
® HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,实验用水为超纯水。
YU/?AQg 1.2 实验步骤 kxt/I<cs 提取、净化:称取1g试样于50mL具塞离心管中,加入2mL水溶解后,加乙腈定容至10mL,超声10min,8000r/min离心5min,取2mL上清液加入Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料,涡旋0.5min,8000r/min离心5min,取上清液过0.22µm滤膜,待测。
3U%kf<m= 1.3 实验条件 y'm5Z-@o6 1.3.1高效液相色谱法(HPLC法): arN=OB 色谱柱:Venusil
® HILIC(5μm,100Å,4.6*250mm);
S9dXkd 流动相: 10mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10: 90;
2&XNT-Qm 波长:220nm;进样量:10µl;柱温:30℃;流速:1mL/min。
H7(D8.y ) 1.3.2 LC-MS/MS法: K>G.HN@ (1)色谱条件:
8T88
色谱柱:Venusil
® HILIC( 5μm,100Å,2.1*150mm);
Lwn 流动相: 0.5mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10:90;进样量:10µL;柱温:30℃;流速:0.2 mL/min。
AejM\#> (2)质谱条件:
u9N/9 质谱仪:API 4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;
检测方式:多反应监测;CAD:8.00;CUR:10.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;TEM:500.00。
表1双氰胺质谱信息
yf/i) ZP'0= 06]"{2 注:带“____”的监测离子对为定量离子对。
1@n'6!]6O ;.=]Ar} 2.结果与讨论 p4D.nB8 YP>J'{?b*" 2.1 高效液相色谱法: Hb0_QT~ ]A%~bQ7 2.1.1线性关系和检出限 *Sps^Wl 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;
oxL)Jx\c9A 分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为0.1µg/mL,0.5µg/mL,1.0µg/mL,2.0µg/mL,5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液,按照上述色谱条件,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表2:
表2 双氰胺线性方程和定量限(HPLC法)
6sG5n7E-A #4
<=Ira5 2.1.2检测方法稳定性考察 WtO@Kf:3GH 选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表3:
表3 检测方法定性和定量稳定性考察考察(HPLC法)
NxnaH!wS b[<L
l%K 2.1.3准确度和精密度 Gn<0Fy2 选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表4
表4 10µg/g添加回收实验结果(HPLC法)
E1SWZ&'; NY|hE@{2. bM.$D-?dF* 2.2 LC-MS/MS法 ?d+ri 2.2.1线性关系和检出限 ;YSe:m* 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液。
U({N'y= 分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和500ng/mL的标准溶液,按照上述液质方法,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见下表5:
表5 双氰胺线性方程和定量限(LC-MS/MS法)
5h |aX 2.2.2 检测方法稳定性考察 2qojU%fiH 选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表6:
表6 检测方法定性和定量稳定性考察考察(LC-MS/MS法)
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q*94vo- 2.2.3准确度和精密度 (:F]@vT 选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液,双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化,故判断该方法无基质效应的影响。
表7 100ng/g添加回收实验结果