LAf!y"A# 北京时间1月25日凌晨消息,
新西兰牛奶中发现了
有害物质——
双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。虽然国际
标准未对
食品中的双氰胺限量,但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
)zUV6U7v 本文采用Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil
® HILIC液相色谱柱,建立了
奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理
方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。
uLhamE) T
| 4c\ 1 实验部分 ]vT 7BI0g@$Nn] 1.1 仪器、试剂与材料 }E/L: 高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。
L9r 3jz 双氰胺标准品(CAS: 461-58-5;FW=84.08),Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil
® HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,实验用水为超纯水。
:hJhEQH(9 1.2 实验步骤 e2B~j3-?z 提取、净化:称取1g试样于50mL具塞离心管中,加入2mL水溶解后,加乙腈定容至10mL,超声10min,8000r/min离心5min,取2mL上清液加入Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料,涡旋0.5min,8000r/min离心5min,取上清液过0.22µm滤膜,待测。
{v`wQM[ 1.3 实验条件 %eT/:I 1.3.1高效液相色谱法(HPLC法): j 6v +S 色谱柱:Venusil
® HILIC(5μm,100Å,4.6*250mm);
o9
eK7*D 流动相: 10mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10: 90;
qx!IlO
波长:220nm;进样量:10µl;柱温:30℃;流速:1mL/min。
{UPIdQ'g 1.3.2 LC-MS/MS法: ^WD[>E~ (1)色谱条件:
|Xu7cCh$me 色谱柱:Venusil
® HILIC( 5μm,100Å,2.1*150mm);
< )?&Jf>_ 流动相: 0.5mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10:90;进样量:10µL;柱温:30℃;流速:0.2 mL/min。
L$ ON=$q5 (2)质谱条件:
"thu@~aC 质谱仪:API 4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;
检测方式:多反应监测;CAD:8.00;CUR:10.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;TEM:500.00。
表1双氰胺质谱信息
h|-r t15 tr'95'5W. @'U4-x 注:带“____”的监测离子对为定量离子对。
H R
V/ A woR)E0'qx 2.结果与讨论 P$oa6`%
l "?il07+w% 2.1 高效液相色谱法: +tA rH
C] '1{~y3 2.1.1线性关系和检出限 m7@`POI 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;
1|]-
F;b 分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为0.1µg/mL,0.5µg/mL,1.0µg/mL,2.0µg/mL,5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液,按照上述色谱条件,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表2:
表2 双氰胺线性方程和定量限(HPLC法)
[Q*kom : `2Z=Lp
2.1.2检测方法稳定性考察 %NBD^gF 选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表3:
表3 检测方法定性和定量稳定性考察考察(HPLC法)
z/ i3 =1,g#HS 2.1.3准确度和精密度 Ry(!<w, 选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表4
表4 10µg/g添加回收实验结果(HPLC法)
} 6KL 7}#vANm B845BSmh 2.2 LC-MS/MS法 1idEm*3&( 2.2.1线性关系和检出限 Soa.thP 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液。
>Kr,(8rA 分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和500ng/mL的标准溶液,按照上述液质方法,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见下表5:
表5 双氰胺线性方程和定量限(LC-MS/MS法)
n% *u;iG 2.2.2 检测方法稳定性考察 Jd%#eD*k9 选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表6:
表6 检测方法定性和定量稳定性考察考察(LC-MS/MS法)
k&**f_b 0VbZBLe 2.2.3准确度和精密度 _Y0o\0B 选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液,双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化,故判断该方法无基质效应的影响。
表7 100ng/g添加回收实验结果