+pRNrg?k 北京时间1月25日凌晨消息,
新西兰牛奶中发现了
有害物质——
双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。虽然国际
标准未对
食品中的双氰胺限量,但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。
]I_*+^?tI 本文采用Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管和Venusil
® HILIC液相色谱柱,建立了
奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理
方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。
F3hG8YX ,Qs%bq{t 1 实验部分 t)1`^W} 2VzYP~Jg 1.1 仪器、试剂与材料 @VPmr}p:{ 高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。
V';l H2 双氰胺标准品(CAS: 461-58-5;FW=84.08),Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil
® HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,实验用水为超纯水。
h+ud[atk. 1.2 实验步骤 &r\8VEZq" 提取、净化:称取1g试样于50mL具塞离心管中,加入2mL水溶解后,加乙腈定容至10mL,超声10min,8000r/min离心5min,取2mL上清液加入Cleanert
® MAS-QuChERS-双氰胺净化管填料,涡旋0.5min,8000r/min离心5min,取上清液过0.22µm滤膜,待测。
AmC?qoEWQ7 1.3 实验条件 Q8MIpa!: 1.3.1高效液相色谱法(HPLC法): W.NZ%~|+e/ 色谱柱:Venusil
® HILIC(5μm,100Å,4.6*250mm);
<v'&Pk< 流动相: 10mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10: 90;
T7%!JBg@ 波长:220nm;进样量:10µl;柱温:30℃;流速:1mL/min。
K_@?Q@#YhR 1.3.2 LC-MS/MS法: em'ADRxG+ (1)色谱条件:
z$WLx 色谱柱:Venusil
® HILIC( 5μm,100Å,2.1*150mm);
d$jwh(Ivs 流动相: 0.5mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=10:90;进样量:10µL;柱温:30℃;流速:0.2 mL/min。
S'5Zy}
+x (2)质谱条件:
Fj(GyPFG 质谱仪:API 4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;
检测方式:多反应监测;CAD:8.00;CUR:10.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;TEM:500.00。
表1双氰胺质谱信息
f:-l}Zj U8AH,?]# NB4O,w 注:带“____”的监测离子对为定量离子对。
bi^?SH\ 2 U]d1 2.结果与讨论 ]jFl?LA%7 3TH?7wi 2.1 高效液相色谱法: [IQ|c?DxpL XS">`9o! 2.1.1线性关系和检出限 O|~C qb 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;
u;gO+)wqv 分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为0.1µg/mL,0.5µg/mL,1.0µg/mL,2.0µg/mL,5.0µg/mL和10.0µg/mL的标准溶液,按照上述色谱条件,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表2:
表2 双氰胺线性方程和定量限(HPLC法)
+)iMJ]> m^G(qoZ] 2.1.2检测方法稳定性考察 c&!mKMrk 选用10.0µg/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表3:
表3 检测方法定性和定量稳定性考察考察(HPLC法)
Pps-,*m C=/B\G/.9 2.1.3准确度和精密度 Ch_rV+ 选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表4
表4 10µg/g添加回收实验结果(HPLC法)
[/UchU]DT 12KC4,C&1i (Z
SaAn), 2.2 LC-MS/MS法 A913*
O:\ 2.2.1线性关系和检出限 NEIkG>\7q 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液。
i(^U<DW$ 分别量取一定量的标准贮备液,用乙腈稀释,配置成浓度为5ng/mL,10ng/mL,20ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和500ng/mL的标准溶液,按照上述液质方法,依次进样检测。以标准溶液浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见下表5:
表5 双氰胺线性方程和定量限(LC-MS/MS法)
~lys 2.2.2 检测方法稳定性考察 &)%+DUV| 选用50.0ng/mL的标准溶液连续进样6针,计算其保留时间和峰面积的RSD值,结果见表6:
表6 检测方法定性和定量稳定性考察考察(LC-MS/MS法)
VN0We<\Z 2gPqB*H 2.2.3准确度和精密度 8AuBs;i 选取市售某品牌奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表7。采用空白样品稀释法判断检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液,双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化,故判断该方法无基质效应的影响。
表7 100ng/g添加回收实验结果