[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： o)"}DeV$&  
2ZIf@C{P.  
<adu^5BI  
wqA5GK>m2  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） <C# s0UX  
hLx*$Z>  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 /YUf('b  
;bP7|  
流  速：1.0 mL/min 8ru@ 8|r  
-aKk#fd  
波  长：242 nm I`Rxijz  
5jx{O${u  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 2kCJqyWy
 
RD{jYr;  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 HA GWA2wQ  
_I5p 7X  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） gj6"U{
D  
e<iTU?eJM  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A bgYM  
8ne5 B4  
柱  温：30℃ >6jyd{  
e|+uLbN&;c  
\Cx3^ iX  
kIXLB!L2b^  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） P3lNns3  
jW
P(7}U  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 pjjs'A*y  
qDcl;{L  
附件二 v,g,c`BjK  
H26j]kY  
M{O2O(  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS Hej0l^  
.z+QyNc:  
色谱条件： <`6-J `.  
Oe2Tmv l  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm m#%5H  
z %mM#X  
进样口：250℃，不分流进样 HQf[T@  
&yVii^  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 3z~zcQ^\  
-R6z/P(}  
进样量：1μL xwK<f6H!y  
$9Z8P_^.0(  
流速：1 mL/min !t;$n!7<  
vQBfT% &Q-  
质谱条件： PPE:@!u<  
>@ge[MuS  
接口温度：280℃ tYmWze.
j  
ShGR!r<  
电离方式：EI /6L\` \g  
q;B-np?U  
电离能量：70eV ].:S!QO  
4P2)fLmc  
溶剂延迟：7min ,Sz*]X  
K6|*-Wo.  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 ]^aece t  
>rYP}k  

R<k4LHDy   序号 Pf@8C{I	na8A}\!<   保留时间/min Kw-E%7gh4c	C/ ;f)k<   中文名称 PiAA,	M;3uG/E\   英文缩写 X$%RJ3t e	5:56l>0   SIM离子 W13$-hf9
GH^i,88   1 - n11L	Pi)`[\{   8.265 _=4Dh/Dv	nm\n\j~   邻苯二甲酸二甲酯 <7)Vj*VxC	J/RUKhs/   DMP ~Bj-n6QDE	,:;nq> ;   163、77 {WFYNEQ[
qj/ 66ak   2 iFga==rw	?]$.3azO   9.135 G7zfyw}W	VWbgusxJ   邻苯二甲酸二乙酯 zif()i 	Cn+TcdHX   DEP 8 kO|t!?:U	7xWX:2l*?   149、177 4my8 p Fk
5+,&9;'Y^   3 &=_YL	64>Z r   10.888 .@1\26<	J*$ !^\s   邻苯二甲酸二异丁酯 kk^KaD4dA	&wLI:x5   DIBP &b{L|I'KYT	Pf(z0o&   149、223 }bjTb!
U'Vz    4 Hyc19|	LTFA2X&E=   11.637 h9SS o0]F	<q v:7@   邻苯二甲酸二丁酯 coU`2n/	Sh{odrMj*   DBP <R_3;5J%	tXPS@4F   149、223 =}_c=z?UY
WS2TOAya)   5 sF(U?)48	8fZ\})t   11.979 BKVvu}V(o	NoiU5pP   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 tA'i-D&	A}[Lk#|n   DMEP ;jI\MZ~l\	w;{k\=W3Ff   59、149、193 &X +@,!
kD"dZQx   6 lzl4pnj	i~k?k.t8   12.72 o<T>G{XYB	}2DeqY   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 9Q].cDe[	RwT.B+Onuy   BMPP Zw"6-h4	4zfgtg(   149、251 SLZv`
h7(twct   7 lm-ubzJN	7B+?1E(   13.044 0qJ 3@d	"ZT=[&2   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 nLT]'B]$+	x-Xb4?{   DEEP ux{OgFfi	\^':(Gu4o   45、72 T /[)U
TX;OA"3=\-   8 RTF{<,E.UX	ls#O0   13.41 u'?t'I	etGquW.   邻苯二甲酸二戊酯 f ( UcJx	<&W3\/xx   DPP X,T^(p	`EWeJ(4Z@   149、237 oqE h_[.
r!Mr\   9 7B7I'{d	j:{<     15.552 nC>#@*+jK	= ng\   邻苯二甲酸二己酯 |bd5a RS9	T 0^U ]C   DHXP |fRajuA;	S0p]:r";x   104、149、76 U76:F?MH
sU+~# K$b   10 6p1TI1(	_$Z46wHmB   15.694 iW |]-Ba\	_KD(V2W   邻苯二甲酸丁基苄基酯 C"0gAN	NK,)"WE   BBP QW~o+N~~	a? +) K   149、91 gB kb0
FK mFjqY   11 `o:)PTQNg	Dw.>4bA.   17.153 %iJ6;V4	9)f1CC]   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 U][.ioc	!$_mWz   DBEP $F/&/Aa	!)LR41>?   149、223 ybYSz@7
:ye)%UU"|:   12 ^g~-$t<!	`5!7Il   17.81 .|iUDp6vz	%|-Rh^H[JK   邻苯二甲酸二环己酯 Ex@#!fz{%	V8,$<1Fi;-   DCHP c6?5?_ne	Z?v9ub~%   149、167 i]1[eGF
px-*uh<   13 _IgG8)k;	k+s<;{   18.056 FE_n+^|k<	pwu5Fxn)   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 2b3*zB*@V	_~_Hup   DEHP OZISh?	g5Hs=c5=\   149、167 .t~I[J\<
v4qvqGK   14 G=b`w;oL:	yV`!Fq 1k   20.444 ?m~;*wn%	O^e !<bBd   邻苯二甲酸二正辛酯 WOg_Pn9HI	Ky$< WZs   DNOP !UgJ^v	9MGA#a   149、279 lSbAZ6
^ S%4R'   15 X@\! \	&[kwM395   22.98 Tl25t^Y	-`Z5#8P   邻苯二甲酸二壬酯 al"1T-	%3kqBH!d   DNP O?{pln	r]8B6iV   57、149、71 u}u2{pO!

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 Ufo-AeQo  
"@ ox=  
附件三 h[B Ft{x  
fA+M/}=  
r&TxRsg{  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 B8IfE`  
heh!cDK  
*w%;$\^  
NgH

%  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 f[ER`!  
Mz"kaO  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 DPe`C%Oc1  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% =,?@p{g}  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% %/>_o{"hw  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% [PQG]"  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% Fx.uPY.a  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% RF6|zCWuI  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% n09|Jzv9  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% X5<L  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% w
{UU(  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% $MsM$]~  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% (/N`Wu  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% t8^*s<O  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% 89 lPeF
Q`  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% RGxO
b  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% ^\wosB3E  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% uZ'5&k96T  
Dk7"#q@kx  
Uz62!)  
   T&0tW"
r?  
2<J82(4j  
%_3{Db`R>  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 Dljq  
1`)R#$h  
=Of#Ps
)  
RnTPU`  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 [Q%3=pm_  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% ).vdKNzw  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% , *
bxNs'/  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% EM([N*8o  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% V8N<%/A=  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% *.K}`89T  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% r
icDP 9#a  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% VWNmqeP  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% Db3tI#  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% T&{EqsI=B  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% 4e5Ka{# <  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% eH6#'M4+\  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% ",K6zALJ  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% 0_j!t  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% vUCU%>F  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% 7zNyH(.  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 88uoA6Y8h  
d%,@,>>)  
Nhf@Y}Cu  
&s^t~>Gpr  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 Dbl3ef  
V |c PAT%  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 DMdVE P"m  
TGDrTyI?y  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 mswAao<y&x  
n:"0mWnL$y  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 j82x$I*  
B%n|%g6K|h  
6c6w w"  
Xk] uXx:TN  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 7u`:e,'  
O$ARk+  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， z!G?T(SpA  
laR n![[  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。  5fq4[a  
K-b`KcX  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 }ijFvIHV  
NT=)</v  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 7H g;SK6t0  
tISb
' ^T  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 #AH gY.  
2)Q%lEm`SP  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 GdM|?u&s"  
,(B/R8ZF~  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 /%F5u}eW  

/go[}X5QR[  
7
<!x:G?C  
GHd1?$  
7$Z_'GJ]1C  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： Ovk=s,a)K  
UtTlJb{-j  
UWC4PWL,>C  
C 8wGbU6`  
1、样品提取方法： PHqg~q;*  
tm.60udbo  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 M' z.d  
CO@G
%1#  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 O[t?*m1/  
>9A18xC  
r YKGX?y  
AF"
7 _  
2、固相萃取方法： 4jebx jZ  
cWx`y><  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： /Q(boY{  
SgewAng?@o  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； P B$beQ  
nL=+`aq_  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； u'#/vT#l  
56<UxIa~  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； =hvPq@C%  
&"K_R(kN  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 }p*|8$#x"  
e`g+Jf`AT  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 qA!p7"m|  
< A Hzs  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 zw15r" R  
i;9X_?QF  
3S+9LOrhY  
v
2
rO>NY4  
补充说明： k5aB|xo  
!hq*WtIk  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 E&kv4,  
:5CyR3P  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 Up?RN%gq  
X$6NJ(2G  
\O "`o4  
#'1dCh vZ  
=U*D.p*%f  
@6~lZgXOV[  
]P wS3:x  
8Y`g$2SZ^8  
C`_/aR6  
^wBlQmW7J  
kQbZ!yl>[  
 cX C[O  
LXX('d  
Z qn$>mG-  
l,h`YIy  
~w uCa!!A  
o+{,>t  
+7w5m  
2LUsqL\m}.  
;=0mL,  
"|Q.{(|kO1  
<}[ !k<  
btEyvqs~X  
_f@,)n
  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS  Rw0|q  
~_JfI7={Jn  
色谱条件： 2o<*rH  
.q MxShUU  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm | CFG<]  
H(.9tu A  
进样口：250℃，不分流进样  of*T,MUI  
QEqYqAGzu|  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） @>46.V{P}B  
rT4Q^t"  
进样量：1μL Uzvd*>mv  
@uyQH c,V  
流速：1 mL/min kum@cA  
P<R^eLZ<&  
0o$RvxJ  
}Y!V3s1bm  
质谱条件： W gyRK2#!  
;/ +< N  
接口温度：280℃ =t_+ajY%  
7#"NKxb  
电离方式：EI NqF*h at  
_$T !><)y  
电离能量：70eV -<x%  
*%jXjTA0D  
溶剂延迟：7min .a2R2~35  
r+%3Y:dZE  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 }*!L~B!  
/[Fk>Vhp  
qdk!.A{  
0c"9C_7^g  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

.6[8$8c  
uYs45 G  
BIMX2.S1o  
a++gwl