[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： m`#Od^vk  
mvW%  
|Z\R*b"  
}<@j'Ok}.  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） q/3ziV d7p  
Xdi:1wW@p  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 -m'j]1  
2 &/v]  
流  速：1.0 mL/min =4uSFK_L  
v}@xlB=  
波  长：242 nm eD$M<Eu  
NW~z&8L  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） 1}hIW":3Sr  
`k(yZtb  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 A[G0 .>Wk  
4?N8R$  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） G;> _<22  
&aM7T_h8  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A umz;F  
#T`t79*N  
柱  温：30℃ Iff9'TE  
IUR<.Y`  
_%'},Xd.z  
Z*G(5SqUh"  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） }QZQ3@  
.4.b*5  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 V"cKJ;s  
zMIT}$L  
附件二 .q+0pj  
>-&R47G  
/0\ mx4u  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS * <1r3!  
;?C#IU  
色谱条件： U%0Ty|$Y  
;Eu3[[V  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm !8`3GX:B_  
:qC'$dO!
 
进样口：250℃，不分流进样  !3T&4t  
/VG2.:  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） @{Gncy |  
+iOKbc'  
进样量：1μL Z|}G6]h  
GfC5z n>  
流速：1 mL/min 2w F8 P)  
iiK]l   
质谱条件： \W1/p`  
+}jJ&Z9)  
接口温度：280℃ H#ClIh?'b  
F-6c_!  
电离方式：EI I}R0q  
Jaz?Ys|S  
电离能量：70eV 4j)tfhwd8  
^j7azn  
溶剂延迟：7min w6j/ Dq!  
=hl}.p  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 y!xE<S&Y  
m8.U &0  

F:aILx   序号 av~5l4YL	0Lb4'25.   保留时间/min "yW:\	OrK&RC   中文名称 }\C-} Q	$ q 2D+_   英文缩写 J[&b`A@.o	{AQ=<RDRF   SIM离子 C`q@X(_
#Skv(IL   1 T iH)5	?R$&Xe!5   8.265 aFLO{tr`	KZeQ47|   邻苯二甲酸二甲酯 Qa.uMq	[ Fz`D/   DMP \nP>:5E1	zLJ/5&   163、77 BGfzslK
y\x+   2 h5K$mA5	Hik3wPnp   9.135 `ta7Gc/:UY	b3VS\[p   邻苯二甲酸二乙酯 w[ ~#av9	nakYn   DEP nb>7UN.9	&%/7E_j7   149、177 +j4"!:N}B
.AU)*7Gh   3 NrJKbk^4u/	(V HL{rj   10.888 Tq4-wE+	6!(@@^7{*   邻苯二甲酸二异丁酯 X<*U.=r)	E^S H\5B   DIBP lO_UPC\@fw	v 7x:dcV   149、223 qZA).12qS
RnDt)3   4 ,1"KHv	=7o" u3hG   11.637 W!&vul5	t0T"@t#c   邻苯二甲酸二丁酯 4%3Mb-#Y]	ok4@N @   DBP q+vx_4	|1>*;\o-   149、223 se>MQM5 )
i?F >+   5 n= u&uqA*	a)'5Nw9*   11.979 81i655!Z	1cD! :[   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 wL:flH@	@>U-t{W   DMEP ~'CE[G5	8!Ww J Oe   59、149、193 ^cz(}N 6&
y;o^- O   6 0ok-IHE<	EG=Sl~ ~o   12.72 A'&K/)Z	ssN6M./6   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 lH6OcD:kj	`.Qi?* ^   BMPP 7G>d TO	`I,,C,{C   149、251  V N\W]jT
`,(,t n_   7 @6]sNm	T"DlT/\   13.044 ^>hWy D	8Y7Q+p|O   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 #T=LR@y	ZWKg9%y7   DEEP zIu E9l	.Lsavpo   45、72 ~3WF,mW
'g m0 )r   8 ' DL`Ee\	E(8* pI   13.41 ?-dX`n	9{5&^RbCp   邻苯二甲酸二戊酯 ~^r29'3	6MT1$7|P&x   DPP 1 ]@}|	4;0lvDD   149、237 &)AVzN+ *h
opy("qH   9 {pnS Q	5#+^E{   15.552 06c >$1-?	[d1mLJAR   邻苯二甲酸二己酯 ! O:y@	w1OI4C)~   DHXP o:3dfO%nuM	e%@~MQ-   104、149、76 :7!0OVQla\
iw8yb;|z;A   10 3L_\`Ia9	hRrn$BdLX   15.694 O&4SCVZp	Rv$[)`&T   邻苯二甲酸丁基苄基酯 QgU8s'e	<UV1!2nv*   BBP {=!b/l;@	Vzdh8)Mu \   149、91 p?);eJtV/
M<.d8?p )   11 pb ~uE	%,6#2X nX%   17.153 Li/O	v/68*,z[   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 J'SZ	>L;eO'D   DBEP 6K-_pg]	G-xDN59K   149、223 aqRhh=iS
w+#C-&z   12 }XV+gyG=@	3DiLk=\~   17.81 DcoX+8 7	,2j&ko1   邻苯二甲酸二环己酯 \Xm,OE_v"	cZB7fmq%   DCHP lef2X1w}!	NdtB1b   149、167 iOR_[y,
U3T#6Rptl   13 # {w9s0:	*c~T@m~DR   18.056 \m7-rV6r	87<-kV   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 YQ+tDZY8`	y.e^hRKb   DEHP BSYzC9h`	CdasP9"1   149、167 "uuVy$6C
o.w\l\   14 Bt>}rYz1	Q<h-FW8z   20.444 tZ}  v%3	vy0X_DPCr   邻苯二甲酸二正辛酯 WFO4gB*	xIxn"^'   DNOP >TOu|r	:"=ez<t   149、279  )2V:
g#F?!i-[F   15 k5D%y3|9	RA KFU   22.98 2_n7=&	)Y2{_ bx4"   邻苯二甲酸二壬酯 :uWw8`	"}pNe"ok   DNP b~'"^ Bts*	Svondc 4   57、149、71 3gv|9T

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 BPdfYu,il  
pBETA'fY  
附件三 7tcPwCc{  
yjhf   
mw='dFt  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 l&?}hq^'Dn  
sIK;x]Q)  
KN7n@$8YM  
0 0M@  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表
pb$~b\s]=  
H Ge0hl[n  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 \U[{z&]~  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% \'CDRr "uw  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% jSwf*u  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% I+dbZBX  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% F$hYKT2|  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% l"2OP6d  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% -$WYj"  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% 1f8GW  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% cdG|
m[  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% hYM@?/(q  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% XLH+C ]pfr  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% sH?/E6  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% e`v`XSA[p  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% X_g 3rv1J  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% TM|)Ljm  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% gF5a5T,  
i![ dPM  
ea00
\  
   [_.5RPJP8  
KhW;RD  
*r$+&8V\n  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 y:vxE8$Q  
1[t=XDz/e  
+ke1Cn'[  
_+^ 2^TW  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 zWb4([P;  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% ?&^?-S% p  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% ~35U]s@v  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% yH<$k^0r*  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% ^+1#[E
  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% C >[fB|^  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% Eb=#9f%y>&  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% bug Ot7  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% d)"?mD:m/M  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% 6O22P?v  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% a!mf;m  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% Y&^P"Dw  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% G5,~Z&}YS  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% .<K iMh  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% "9bN+1[<  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% &BvZF  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 !@yQK<0  
~mcZUiP9  
sVD([`Nmc  
Fs9W>*(  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 /T#
o<D  
ypT9 8  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 n@o  
}u7D9_KU  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 M[vCpa  
|Qq+8IeYG  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 x[a'(5PwY  
L.Vq1RU\"  
a~F u  
:`j"Sj!t3  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 6<Be#Y]b  
DMRs}Yz6  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， !?Tzk&'  
B4 <_"0  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 n_ OUWvs  
@]yQJuXA&Z  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 _qk9o  
7~ILRj5Nq  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。
00R%  
Z^C!RSQ  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 'fXer!L}  
Wa @6VY  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。
~ 6TfW~V  
1.xw'i  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 `~sf}S :  

rmXxid  
R&}"En`$s  
Y/cnj n  
?u.&B P  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： :L gFd  
s &:LY"[`  
B1dVHz#  
xL8r'gV@  
1、样品提取方法： _K"|}bM  
=kvfe" N0e  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 -4ityS @  
rMRM*`Q2  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 / blVm1F  
R gY-fc0  
EC(,-sz\Z  
Y_m/? [:  
2、固相萃取方法： A[lbBR  
*J[3f]PBmR  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： Zzy!D  
Q72}V9I9  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； E"d\N-I  
GJ YXCi  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； N-XOPwx'  
q@K8,=/.#  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； TZ #(G  
QTZfe<m0  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 R@*mMWW,  
\@G 7Kk*l  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 p4l^b[p  
S$9>9!1>*  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 :[icd2JCw]  
+; / ]'  
Ns?qLSN  
c6 O1Z\M@\  
补充说明： < ezv  
,3 !D(&  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 s?qRy 2  
BS-nny
  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 &8kc0Z@y  
ZR |)+W;  
]IX6>p,  
rByC6HV"  
9 Vn  
 m}t.E  
Z0o+&3a6  
$bf&ct*$h  
+y%"[6c|  
%BdQ.\4DS  
PKDzIA~T  
}b$?t7Q)  
I``S%`h  
kzMul<>sl  
u\L=nCtLby  
J<p.J3I  
/O,>s  
^,P# <,D,  
j`fQN  
4CUoXs'  
C*+gQeK  
U8f!yXF'  
Se0!-NUK0  
@D?KS;#  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS % oPt],>  
xiWP^dIF  
色谱条件： tHh
au.!  
gD13(G98  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm 3q$[r_   
xz$-_NWW  
进样口：250℃，不分流进样 UR3qzPm!0e  

OouIV3  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） cO8':P5Q  
>yZe1CP  
进样量：1μL :4Gc'bR  
;\N)RZ  
流速：1 mL/min uwL^Tq}Yh  
b7^Db6qu  
6`c5\G+  
H%nA"-  
质谱条件： ?Iin/<y  
; ,vGw<|o  
接口温度：280℃ v)f;dq^z-  
`{Jo>L.  
电离方式：EI Daw;6f:  
~E8
L,h~  
电离能量：70eV +HXR ))X  
(u{?aG~  
溶剂延迟：7min

&Hi;>  
X([8TR  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 @^2?97i c  
+W%3VV$  
ppP0W`p  
nOCCOTf  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

xXRlQ|84  
iLbf:DXK(  
W\pO`FL  
%K[ u