一、背景 MzUNk`T @ 国标GB/T 22509-2008中利用22g的氧化铝柱进行油脂中的苯并(a)芘测定的前处理,利用氧化铝吸附油脂,通过80mL的石油醚或正己烷进行洗脱苯并(a)芘。该方法使用溶剂多,操作时间长,而且氧化铝对某些油样的净化效果较差。 }U <T>0 本实验利用Cleanert BAP-2固相萃取柱(装有经过特殊改性的活性炭)萃取油性样品中的苯并(a)芘,然后再用甲苯洗脱的方法,开发了一套油脂中苯并(a)芘检测的新方法,相对于国标GB/T 22509-2008的方法,具有更佳的油脂去除效果、稳定的苯并(a)芘回收率,溶剂用量更少更环保,方法也更简便。 Dx
p8^VL [I6(;lq2 二、实验方法 "rxhS;
R1> 2.1实验试剂及标准品 4}0DEH.Vx 正己烷(色谱纯,4L/瓶,P/N: AH216),二氯甲烷(色谱纯,4L/瓶,P/N: AH300),甲苯(色谱纯或分析纯重蒸),乙腈(色谱纯,4L/瓶,P/N:AH015-4) JH3$G,:zM 苯并(a)芘(100mg/瓶,P/N: B1760) !~sgFR8W 2.2实验仪器及耗材 BY*{j&^ Agilent HPLC,配荧光检测器,移液枪,PTFE滤头0.22μm(P/N:AS041320-T)。 O5rHN;\_ &8=wkG% 三、实验步骤 8w,+Y]X<P[ 3.1试样处理 ^:krfXT (1)使用正己烷配制200ppm苯并(a)芘标准品标样备用,并用正己烷稀释成1ppm苯并(a)芘工作液备用。 6t zUp/O (2)取0.3g油于12mL样品瓶(P/N:1509-1800和P/N:1515-1748)中,加1mL正己烷涡旋震荡溶解,作为待净化液;若要做加标实验,根据需要向油中先加入适量的标准品。 ~7CQw^"R@ 3.2 固相萃取方法 `.oWmBey\ 固相萃取柱名称:Cleanert BAP-2 (P/N:Bap10-2); g+(Cs 固相萃取方法如下:Ø 活化:2mL正己烷;
Ø 上样:3.1中的待净化液;
Ø 淋洗:6mL二氯甲烷;
Ø 洗脱:甲苯12mL,收集于20mL玻璃瓶(P/N:AV7100-7和P/N:AV7920-0)中
Ø 浓缩:将样液在80℃下氮气吹干,用0.3mL正己烷定容,过PTFE 0.22um滤头,收集于1.5mL样品瓶(P/N:1109-0519和P/N:AV2100-0)的内插管(P/N:0609-0357)中,待测;
vR`#kxSdJ@ j 3/ I= 3.3液相色谱法检测条件 RN,5>.w (1)色谱条件: IKz3IR eu 色谱柱:Venusil ASB-C18,4.6mm×250mm×5.0µm(P/N:VS952505-0); c<k=8P 流动相:乙腈:水 88%:12%; k4n4BL 流速:1.0mL/min; )GT*HJR(vc 进样量:20µL; EO.Se9ux 荧光检测器:发射波长406nm,激发波长384nm。 5{z muv: k<&zVV' 四、方法学考察 Tasmbo^mAF 4.1 标准曲线绘制 FRBW(vKE 将标准工作液稀释到浓度分别为:0.5,1.0,2.0,3.5,5.0,7.5,10.0µg/L,根据峰面积建立标准曲线。根据实际油样中苯并(a)芘的可能含量,可以将标准曲线的线性范围延伸到50µg/L。 Jn|sS(Q} 4.2 样品分析 GgU8f0I 将3.1的样品进样分析,采用外标法定量。 I ~U1vtgp 4.3 计算公式 &b__/o 苯并(a)芘含量按下式计算: Hto R
N^9 其中: *dAQ{E(rO w为样品中苯并(a)芘含量,单位为µg/Kg; S^8C\ E c为从标准曲线得到的待测液中苯并(a)芘的浓度,单位为µg/L; 21T#NYfew V为待测液体积,单位为µL,本方法为300µL;
MQ#nP_i m为称取的油样品质量,单位为g; |#b]e|aP = :/4) 五、测试结果5.1液相色谱法测试结果图1 空白实验色谱图
图2 5µg/L苯并(a)芘的标准样品的色谱图
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R2Y 图3 实际样品的加标(5µg/L)回收率实验色谱图 表1 苯并芘的回收率
/g`!Zn8a ?~:4O}5Ax 六、实验结论 FUO 9jX Cleanert BAP-2 去除油脂中杂质的效果良好,前处理的操作过程简单快捷。检测方法可采用液相色谱-荧光检测法,在5μg/L的添加水平的回收率可达85%以上。