1 仪器及材料 z-:>[Sn 仪器:Agilent GC-MS 7890-5975c;涡旋混合器;旋转蒸发仪; SLUQFoz} 玻璃器皿:30mL样品瓶;200mL鸡心瓶;容量瓶;进样样品瓶; p )]x,F 材料及试剂:氨基甲酸乙酯专用净化柱;氨基甲酸乙酯标准品;PTFE滤膜;二氯甲烷、甲醇均为色谱纯;无水硫酸钠(经600度煅烧); rvK%m_r wA)nryXV 2 标准溶液配制 ^dsj1#3z 准确称取约0.1g(精确至0.0001g)氨基甲酸乙酯标准品于100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得到标准储备液。用甲醇逐级稀释储备液,得到20、10、5、1、0.1、0.05(单位为μg/mL)标准溶液,用于绘制标准曲线。同时稀释得到标准工作液4μg/mL、40μg/mL、400μg/mL,用于进行加标回收率实验。 Pl-9FLJ )[r=(6?n 3 GC-MS操作条件 DsD? &: 3.1 GC条件 x8~*+ j 毛细柱DA-INOWAX(30m*0.25mm*0.25um);进样口温度230℃;载气:高纯氦气;流速1ml/min;程序升温:60℃(5min)3.5℃/min 150;不分流进样,进样量1μL。 5hDy62PRr 3.2 MS条件 TIR Is1 接口温度:240℃,电离方式:EI,电子能量:70eV,离子源温度:230℃,四级杆温度:150℃;扫描模式:SIM模式,监测离子:62,74,89,其中定量离子为62. b`,Sd.2=(' 065 =I+Vo 4 样品处理 zMBGpqdP 4.1 黄酒加标样品 *[BtW56- 称取20g黄酒于30mL样品瓶中,加入标准工作液0.1mL,涡旋混合均匀,将样品载入到净化柱上,静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。用3*40mL二氯甲烷洗脱,每次间隔1-3min,用鸡心瓶收集洗脱液,将洗脱液在40℃下旋转蒸发至约1mL,转移溶液至带刻度试管中,用2*1mL甲醇洗涤鸡心瓶,将洗涤液也转移至试管中进行合并,并用甲醇定容至4mL,加入少量无水硫酸钠,静置5min,用PTFE滤膜进行过滤,收集,取少量入进样样品瓶,待测。 G007[| 4.2 黄酒样品 bd% M., 量取20g黄酒,将样品载入到净化柱上,往下操作步骤同4.1(将样品载入到净化柱上,静置……)。 )0"T?Ivp] 4.3 空白样品 @LDs$"f9= 量取20g去离子水,将样品载入到净化柱上,往下操作步骤同4.1(将样品载入到净化柱上,静置……)。 Q&_#R(3j; J#t8xL 5 实验结果 u47`&\ 色谱图 z"QXPIXPk 将处理得到的样品在仪器条件(3)下进行检测,得到的色谱图如图1~图3. {fX~%%c"
qPWf=s7! 图1 标准溶液色谱图(浓度为1μg/mL) ]=I2:Rb
>!{8)ti 图2 黄酒样品加标色谱图(定容浓度为1μg/mL) q;IuV&B
0uPcEpIA 图3 黄酒样品色谱图 >K1e=SY 标准曲线 ]KXyi;n2 \u(Gj]B#" 将步骤(2)配制的标准溶液,在仪器条件(3)下进行检测,绘制标准曲线,得到线性方程为y=2.19e+005*x+4.40e+003(相关系数为0.999),其中y为峰面积,x为目标物浓度(μg/mL),方法检出限为3ng/mL,定量限为10ng/mL加标回收率及精密度 `T ^0&# 称取17份20g酒样,其中5份分别加入浓度为4μg/mL标准工作液0.1mL,5份分别加入浓度为40μg/mL标准工作液0.1mL,另外5份分别加入浓度为400μg/mL标准工作液0.1mL,余下2份酒样作为空白,在条件(4)下进行样品处理,将得到的样品在仪器条件(3)下进行检测,结果如表1所示。表1 加标回收率及精密度
w}t}Sh 计算公式 -vk/z+-^! 样品中氨基甲酸乙酯的含量(X)以mg/kg表示,按式(1)计算:X=(C1-C2)*V/m…………………………..(1)
gTB|IcOs 式中: riaL[4c C1为试样中氨基甲酸乙酯的含量,单位为μg/mL; %W| Sl C2为空白试样氨基甲酸乙酯的含量,单位为μg/mL; E?|NYu#I6 V为试样最终定容体积,单位为mL;
U2vb&Qu/ l[m*csDk" m为称取试样的质量,单位为g。 Gv
} W_Y56@7e 6 结论实验结果表明,该净化柱对氨基甲酸乙酯能有较好的回收率,同时,使用该净化柱能较好的去除酒中的氨基酸、蛋白质、糖、有机酸等干扰成分。该方法黄酒用量为20g,洗脱剂用量为120mL,对氨基甲酸乙酯含量较低的酒样能有较高的富集倍数,该方法实验操作快速、简便,可应用于大批量样品的前处理。 T2)CiR-b /d Ua {.o4U0+ 附录 0]]OE+9<c 针对氨基甲酸乙酯含量较高的样品,可以减少取样量,具体方法如下:称取2g黄酒于10mL样品瓶中,加入标准工作液50μL,涡旋混合均匀,将样品载入到净化柱上,静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。然后用12mL二氯甲烷洗脱,用流速调节阀控制流速为2 mL/min左右,用带刻度试管收集洗脱液,将洗脱液在30℃下氮吹至1mL(若体积小于1mL可以用二氯甲烷定容至1mL),加入少量无水硫酸钠,静置5min,用PTFE滤膜进行过滤,收集,取少量入进样样品瓶,待测。 ]gv3|W 其他测试方法同20g取样量的方法。