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% m9G,%]4| 包括:
t C 6 c4j 1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱(4.6*250mm,5μm,150Å)任选1支
@1]<LQ\\ 2. 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支/盒,3盒
m6;Xo}^w 以上2项均为科技部“十一五”国家支撑计划成果
s=%HT fw 3.
三聚氰胺标准品1瓶(250mg,≥99.5%)
}2NH>qvY 4. 真空固相萃取装置(12位)
,O[vxN1X* 5. 0.22μm,13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包
B8_l+dXO 6. 三聚氰胺
分析方法手册1份
"^XN"SUw 7. 庚烷磺酸钠(10g/瓶),高纯甲醇、乙睛
PzV(e)~7 cw5YjQ8 9 * 试剂规格请以签订合同时为准,博纳艾杰尔科技拥有最终解释权。
6VE >$`m 1 固相萃取(SPE)柱的选择:
|E~X]_Y 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物),净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上,具有阳离子和反相两种吸附机理,并具有以下优点:
OeAPBhTmFj 1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂),使样品更干净,提高
检测的灵敏度。
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2) 批次重复性好。
=#^dG''*" 3) 回收率高,重现性好,即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
xaS 2 样品前处理步骤:
P\AH9#XL 2.1标准样品配制:
z8!u6odu % 取50mg三聚氰胺标准品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液,使用时,以合适溶液稀释至所要的浓度。
MMAC,4 2.2提取:
\k,bz0 称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10mL),加入50mL 1%三氯乙酸提取液,充分混匀,加入2mL 2%乙酸铅溶液,超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX),同时处理多个样品,需要用真空固相萃取装置(12位),可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。
MYPcH\K$h 2.3净化(PCX小柱,60mg/3mL) :
CIDL{i8 1) 活化及平衡:3mL甲醇,3mL水
\nHlI=!P 2) 上样:加入提取液3mL
sZH7EK 3) 淋洗:3mL水;3mL 甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。
gQEV;hCO 4) 洗脱:5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)。
J:u|8>; 5) 浓缩:50℃,氮气吹干,20%甲醇/水定容至1mL。
PWMaB Tpukz_F
y]l"u=$Tr{ 2.4检测:HPLC-UV检测方法
(M+<^3c 5u46Vl{ 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离,按照
美国食品药品监督管理局(
FDA)的三聚氰胺
检测方法和
中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法,采用艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱,均能得到良好的结果,分析色谱图如下:1、 三聚氰胺的FDA检测方法
`0i3"06l
r 色谱柱:Venusil ASB C8 4.6×250mm
m GhJn 缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0。
JP4Moq~r 流动相:缓冲液:乙腈= 85:15
pxxFm~"d 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10μL,
X~he36-+< 进样前用0.22μm针式过滤器过滤
^\&g^T% 流 速:1.0mL / min
R2aK5~ 柱 温:40 ℃
`4H9f&8( 波 长:240nm
aT!9W'uY 2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
Tud1xq (1)色谱柱:Venusil ASB-C18 4.6×250mm
IZ0$=aB7 缓冲液:10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
+M##mRD 流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15
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?M!acB 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10uL
iW@Vw{|i I 进样前用 0.22μm针式过滤器过滤
[Z#.]gb 流 速:1.0mL/min
L-C/Luws 柱 温:40℃
zt)PZff/YQ {vT55i<mk 波 长:240nm
"h^#<b
PN (2)色谱柱:Venusil XBP-C8 4.6×250mm缓冲液:10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠
+%#MrNM' 流动相:缓冲液:乙腈=85:15进样量:样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml,进10μL
j t`p<gI 进样前用0.22μm针式过滤器过滤流速:1.0mL/min
J7?)$,ij% 柱温:20℃波长:240nm
32 1={\X Rt<10minLC-MS参考方法
)YnI!v2T 由于HPLC-UV方法中,流动相添加了离子对试剂,限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法,三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,没有良好的保留与分离。源于此
问题,博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法,采用博纳艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列亲水色谱柱,不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离,参考方法如下:
Y!a+#N! 缓冲液:10mM NH4AC流动相:缓冲液:ACN=95:5
StyB"1y 流 速:1.0mL/min进样量:先用70%ACN溶解成约1mg/mL,用ACN稀释成0.1mg/mL,进10μL
bL'# 进样前用0.22μm针式过滤器过滤柱温:40℃
6t_ 3%{ 波长:240nm
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5F4+