u
S1O-Q> 9
D3{[ 包括:
!@=S,Vc. 1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱(4.6*250mm,5μm,150Å)任选1支
cKt=? 2. 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支/盒,3盒
KC6Cg?y^ 以上2项均为科技部“十一五”国家支撑计划成果
. 5(YL8d 3.
三聚氰胺标准品1瓶(250mg,≥99.5%)
!!y]pMjJa@ 4. 真空固相萃取装置(12位)
!ZYPz}&N_ 5. 0.22μm,13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包
&
o5x 6. 三聚氰胺
分析方法手册1份
*q=T1JY 7. 庚烷磺酸钠(10g/瓶),高纯甲醇、乙睛
$4nAb^/ MuoE~K2 * 试剂规格请以签订合同时为准,博纳艾杰尔科技拥有最终解释权。
]M7FIDg 1 固相萃取(SPE)柱的选择:
hmu>s' 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物),净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上,具有阳离子和反相两种吸附机理,并具有以下优点:
VeYT[Us" 1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂),使样品更干净,提高
检测的灵敏度。
D.K""*ula 2) 批次重复性好。
wjA
wJOw| 3) 回收率高,重现性好,即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
7D6`1& 2 样品前处理步骤:
Q(bOar5 2.1标准样品配制:
P.Z:`P) 取50mg三聚氰胺标准品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液,使用时,以合适溶液稀释至所要的浓度。
e4S@ J/D 2.2提取:
gP2zDI 称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10mL),加入50mL 1%三氯乙酸提取液,充分混匀,加入2mL 2%乙酸铅溶液,超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX),同时处理多个样品,需要用真空固相萃取装置(12位),可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。
S,m
( 2.3净化(PCX小柱,60mg/3mL) :
Xs0)4U
1) 活化及平衡:3mL甲醇,3mL水
5h5izA'0' 2) 上样:加入提取液3mL
n{tc{LII/ 3) 淋洗:3mL水;3mL 甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。
{^N,=m\ 4) 洗脱:5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)。
(` *BZ_ 5) 浓缩:50℃,氮气吹干,20%甲醇/水定容至1mL。
*~#I5s\s! ingG
[o)K1>>7 2.4检测:HPLC-UV检测方法
s L^+$Mq6 W$4$%r8 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离,按照
美国食品药品监督管理局(
FDA)的三聚氰胺
检测方法和
中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法,采用艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱,均能得到良好的结果,分析色谱图如下:1、 三聚氰胺的FDA检测方法
yf&g\ke 色谱柱:Venusil ASB C8 4.6×250mm
1G>Ud6(3< 缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0。
/<rvaR 流动相:缓冲液:乙腈= 85:15
Q:A#4Z 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10μL,
FZ"n6hWA 进样前用0.22μm针式过滤器过滤
L'+bVP{L 流 速:1.0mL / min
b>ai"! 柱 温:40 ℃
fap`;AuwK 波 长:240nm
R(1:I@<?E 2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
6S`_L (1)色谱柱:Venusil ASB-C18 4.6×250mm
-S sgW 缓冲液:10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
wvv+~K9jq 流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15
gIB3DuUo 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10uL
Rl?1|$% 进样前用 0.22μm针式过滤器过滤
Ac:`xk<
流 速:1.0mL/min
M':-f3aT% 柱 温:40℃
+Mo4g2W m?e/MQr 波 长:240nm
b}!
cEJY (2)色谱柱:Venusil XBP-C8 4.6×250mm缓冲液:10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠
+( LH!\{^ 流动相:缓冲液:乙腈=85:15进样量:样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml,进10μL
}-3 VK% 进样前用0.22μm针式过滤器过滤流速:1.0mL/min
KuR]X``2 柱温:20℃波长:240nm
4|x _C-@ Rt<10minLC-MS参考方法
OyO<A3 由于HPLC-UV方法中,流动相添加了离子对试剂,限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法,三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,没有良好的保留与分离。源于此
问题,博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法,采用博纳艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列亲水色谱柱,不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离,参考方法如下:
FLmD?nw 缓冲液:10mM NH4AC流动相:缓冲液:ACN=95:5
72nZ`u 流 速:1.0mL/min进样量:先用70%ACN溶解成约1mg/mL,用ACN稀释成0.1mg/mL,进10μL
wB)y@w4k 进样前用0.22μm针式过滤器过滤柱温:40℃
![z2]L+TB 波长:240nm
Cy-p1s