MAS法、直接蛋白沉淀与SPE柱净化法去除血清蛋白效果比较 [复制链接]

1．实验方法 \Z<' u;
 
1.1 MAS方法： ]*Zg(YA
 
①净化：在10mL离心管中加入0.5mL新生牛血清，2mL 2%甲酸乙腈，PAX 200mg与C18 100mg；漩涡振荡2 min，8000 r/min 离心取全部上清。
{B uh5U,  
② 浓缩：氮吹至干，1 mL流动相定容待检测。 HLa|ycB%  
1.2 SPE柱净化方法 ;E(%s=i  
SPE柱：HLB,60mg/3ml @~xNax&^  
1）活化：2ml甲醇，2ml水活化SPE柱 M+9G^o)u  
2）上样：0.5mL新生牛血清 C]p3,G,oN  
3）淋洗：5%甲醇水溶液 {
w1sv=$+  
4）洗脱：2mL 95%甲酸水溶液洗脱，接受全部流出液。 &%$r3ePwc  
5）浓缩：把接收液氮吹至干，1 mL流动相定容待检测。 *O+
G}_}  
1.3 直接蛋白沉淀方法 7kp$C?7K  
在10mL离心管中加入0.5mL新生牛血清，2mL 2%甲酸乙腈，漩涡振荡2 min，8000 r/min 离心取全部上清。氮吹至干，1 mL流动相定容待检测。 0j F~cV  
1.4 液相条件： m(L]R( t  
2. 实验结果及推断 qCi6kEr  
（1）直接蛋白沉淀一般更多的偏重于血浆样品中大分子蛋白的去除，与其相较，SPE可以更好的去除小分子蛋白，由色谱图可以看出，HLB处理过的血清样品色谱图2.5分钟前的杂质峰更少，而在2.5分钟后却又有两个明显的色谱干扰峰。正是证明了HLB对于大分子物质去除的更好，而对于某些小分子蛋白却无法彻底的清除。 lU`]yL  
（2）MAS方法的开发正是为了解决这一问题，可以看到，MAS方法处理过的样品色谱图在2.5分钟后几乎没有任何干扰，而在2.5分钟前的干扰峰也比直接蛋白沉淀方法有了明显的减少。这是因为MAS方法同时结合了蛋白沉淀与SPE吸附，酸化乙腈既作为蛋白沉淀剂又等同于提取液，且方法简单，快速，便于操作，实验证明对于血浆中的雷尼替丁有很好的添加回收率。 .^6"nnfA#
 
 m_LW<'