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MAS-HPLC法测定鱼肉、牛奶和鸡蛋中的三聚氰胺 [复制链接]

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关键词：鱼肉牛奶鸡蛋三聚氰胺测定

1 实验部分

1.1仪器与试剂

仪器：L6-1 系列高效液相色谱仪（北京普析通用公司），三聚氰胺检测样品前处理方法包：（包括盐酸0.1 mol/L，6% 磺基水杨酸，混合型阴离子交换填料Cleanert PAX，（科技部“十一五”国家支撑计划成果, 天津博纳艾杰尔科技有限公司）；Venusil SCX-M，5μm,4.6×250mm 强阳离子交换色谱柱（科技部“十一五”国家支撑计划成果, 天津博纳艾杰尔科技有限公司）及保护柱；针式过滤器（Agela Clarinert，0.22/0.45µm，尼龙）；三聚氰胺标准品（>99%），均质器（T25 Basic，IKA）。

试剂：所用乙腈为色谱纯；磷酸二氢钾为分析纯；水为超纯水。
1.2 色谱条件
色谱柱：Venusil SCX-M色谱柱，4.6×250mm,5μm,300 ；（科技部“十一五”国家支撑计划成果）；流动相：磷酸二氢钾（0.050mol/L）：乙腈=70：30；流速：1.5mL/min；柱温：室温；波长：240 nm；实验中若非特别注明，进样量均为20μL。 Å

1.3 三聚氰胺标准曲线工作液的配制

1.3.1三聚氰胺标准贮备溶液：1.00×10³ mg/L。

称取100 mg 三聚氰胺标准物质（准确至0.1 mg），用水完全溶解后，用水定容至100 mL，混匀。

1.3.2标准工作溶液

1.3.2.1 标准溶液A：2.00 ×102 mg/L。

准确移取20.0 mL 三聚氰胺标准贮备溶液（1.3.1），置于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。

1.3.2.2 标准溶液B：0.50 mg/L。

准确移取0.25 mL 标准溶液A（1.3.2.1），置于100 mL 容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，待用。

1.3.2.3 标准工作液的配制

按表1 分别移取不同体积的标准溶液A（1.3.2.1）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，待测。按表2分别移取不同体积的标准溶液B（1.3.2.2）于容量瓶中，用水稀释至刻度，混匀，0.45μm滤膜过滤，待测。

表1 标准工作液配制（高浓度）

标准溶液A体积(mL)	0.1	0.25	1.00	1.25	5.00	12.5
定容体积(mL)	100	100	100	50	50	50
标准工作液浓度(mg/L)	0.20	0.50	2.00	5.00	20.0	50.0

表2 标准工作液配制（低浓度）

标准溶液B体积(mL)	1.00	2.00	4.00	20.0	40.0
定容体积(mL)	100	100	100	100	100
标准工作液浓度(mg/L)	0.005	0.01	0.02	0.10	0.20

1.4 试样的制备
1.4.1牛奶样品

取15.0g牛奶置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L 盐酸10mL，加入6% 磺基水杨酸3.0 mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。
1.4.2鸡蛋样品

取10.0g混合均匀的鸡蛋置于25mL容量瓶中，加入0.1mol/L 盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6% 磺基水杨酸3.0mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。
1.4.3鱼肉样品
取5.0g剁碎的鱼脊背肉，加入0.1mol/L 盐酸10mL，均质后全部转入25mL容量瓶，加入6% 磺基水杨酸3.0 mL，混合型阴离子交换树脂1.0g（Cleanert PAX），用0.1mol/L 盐酸定容至25mL，涡旋振荡2min，8000 r/min离心5min，取上清液过0.45μm的滤膜后进液相分析。

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2结果与讨论
2.1 线性范围
低浓度曲线取0.005mg/L, 0.01mg/L, 0.02mg/L, 0.1mg/L, 0.2mg/L 5个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图：

图1 低浓度标样线性

高浓度曲线取0.2mg/L, 0.5mg/L, 2mg/L, 5mg/L, 20mg/L, 50mg/L 6个浓度的标准样品测试，所得标准曲线如下图：

图2 高浓度标样线性

结果表明：本方法在0.005mg/L~ 50.0mg/L和范围内，三聚氰胺峰面积和浓度有良好的线性关系
2.2 重复性
取浓度为5mg/L的标准品溶液，分别进样20μL，进样6次，计算保留时间及峰面积的RSD（相对标准偏差）。结果列于表3中

表3 保留时间和峰面积的重现性（精密度）

	1#	2#	3#	4#	5#	6#	平均值	RSD%
保留时间min	6.817	6.833	6.817	6.817	6.858	6.808	6.825	0.26
峰面积 μAu·s	571360	574492	569813	572187	574525	575593	572995	0.39

图3 重复性谱图

从表3和图3看出，该方法结果重复性良好。

2.3 检出限
以曲线最低点0.005mg/L的谱图（见图4）为准，以噪声对应峰高估算检出限为0.0032mg/L (S/N=3)。

图4 检出限谱图

2.4 实际样品测试
2.4.1牛奶样品

2.4.1.1空白牛奶样品测试谱图如图5：

图5 空白牛奶样品谱图
2.4.1.2 牛奶加标回收率
分别在空白牛奶样品中加入相当于1.0mg/Kg，5.0mg/ Kg和10.0mg/ Kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图6所示。

图6牛奶中添加不同浓度的三聚氰胺谱图

根据此谱图测得三聚氰胺的加标回收率如表4所示

表4 牛奶中三聚氰胺加标回收率试验结果

样品名称	加标量（mg/Kg）	测得量（mg/ Kg）	回收率（%）
牛奶空白	0.00	-	-
1#	1.00	1.05	105.0%
2#	5.00	5.18	103.6%
3#	10.00	9.04	90.4%

结果表明，MAS前处理方法对牛奶中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。

2.4.2 鱼肉样品

2.4.2.1 空白鱼肉样品测试谱图如图7：

图7 空白鱼肉样品谱图

2.4.2.2 鱼肉样品加标回收率分别在空白鱼肉样品中加入相当于1.0mg/kg、5.0mg/kg和10.0mg/kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图8和图9所示。

图8 鱼肉中添加三聚氰胺1.0 mg/kg谱图

图9 鱼肉中添加三聚氰胺10.0 mg/kg谱图

根据此谱图测得鱼肉中三聚氰胺加标回收率如表4所示

表5 鱼肉中三聚氰胺样品加标回收率试验结果

样品名称	加标量（mg/kg）	测得量（mg/kg）	回收率（%）
鱼肉空白	0.00	-	-
1#	1	0.98	98.0%
3#	5	5.81	116.2%
5#	10	9.67	96.7%

结果表明，MAS前处理方法对鱼肉中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。2.4.3鸡蛋

2.4.3.1空白鸡蛋样品测试谱图如图10所示：

图10 空白鸡蛋样品谱图

2.4.3.2 鸡蛋加标回收率分别在样品中加入相当于1.0mg/Kg，5.0mg/ Kg和10.0mg/ Kg的三聚氰胺标准品，测试谱图如图11所示。

图11 鸡蛋中添加三聚氰胺5.0 mg/kg

鸡蛋中三聚氰胺的加标回收率如表6所示

表6 鸡蛋中三聚氰胺加标回收率试验结果

样品名称	加标量（mg/kg）	测得量（mg/kg）	回收率（%）
鸡蛋空白	0.00	-	-
1#	1	0.89	89.0%
3#	5	5.55	111.0%
5#	10	10.48	104.8%

结果表明，MAS前处理方法对鸡蛋中三聚氰胺提取具有良好的回收率，杂质去除效果好；HPLC分析中三聚氰胺和杂质分离良好。3 结论上述实验结果表明，采用MAS样品前处理方法，以混合型阴离子交换填料Cleanert PAX作为萃取介质，可以快速准确的处理牛奶、鱼肉和鸡蛋样本，同时使用阳离子交换色谱柱进行HPLC分析，整个分析方法应用于不同样品中三聚氰胺的检测，具有检测限低，精密度高，线性范围宽和回收率高等优点，完全可以满足三聚氰胺的快速检测要求。

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