$d4n"+7 十八种天然氨基酸和三种非天然氨基酸:
十八种天然氨基酸:Asp,Glu,Ser,Gly,His,Arg,Thr,Ala,Pro,Tyr,Val,Met,Cys-Cys, Ile,Leu,Nle,Phe,Trp,Lys.
pot~<d`:K" N g,j# 三种非天然氨基酸:Pal,Nal,Cpa
;kK/_%gN-G 氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生(PITC柱前衍生氨基酸
分析方法)
4+ig'
|o 氨基酸标准溶液含有17种天然氨基酸。
\v/[6&|X0s 样品溶液含有十七种天然氨基酸和三种非天然氨基酸。
<GsuZ 准确量取样品溶液200μl,置1.5ml塑料离心管中,准确加入20μl正亮氨酸内标溶液,混匀,用氮吹仪上吹干后,加220μl 0.1mol/L盐酸溶解,加入三乙胺乙腈溶液100µl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400µl,振摇后放置10分钟,取下层溶液,用0.45µm小滤器过滤。
0$njMnB2l 另准确量取混合氨基酸标准溶液200µl,置一1.5ml塑料离心管中,准确加入20μl正亮氨酸内标溶液,混匀,加入三乙胺乙腈溶液100µl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400µl,振摇后放置10分钟,取下层溶液,用0.45µm小滤器过滤。
OJxl<Q=z 色谱条件: H.0K?N&\?> 色谱柱:Agela Venusil AA柱,100Å,4.6×250mm,5µm(订货号:AA952505-0)
f!"w5qC^ 流动相A:称取15.2g无水醋酸钠,加水1850mL,溶解后用冰醋酸调pH至6.5,然后加乙腈140mL,混匀,用0.45µm滤膜过滤。
'<M{)? 流动相B:80%(V/V)乙腈溶液。
Wjc'*QCPl 洗脱梯度:
d'2A,B~_* %3rP
`A 图1 氨基酸标准溶液(十七种天然氨基酸+正亮氨酸)
7d vnupLh 图2 氨基酸标准溶液(十七种然氨基酸+正亮氨酸+三种非天然氨基酸)