w<h8`K`3 十八种天然氨基酸和三种非天然氨基酸:
十八种天然氨基酸:Asp,Glu,Ser,Gly,His,Arg,Thr,Ala,Pro,Tyr,Val,Met,Cys-Cys, Ile,Leu,Nle,Phe,Trp,Lys.
|k]]dP|:' Dmy=_j?ej 三种非天然氨基酸:Pal,Nal,Cpa
;3& wO~lW 氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生(PITC柱前衍生氨基酸
分析方法)
?-3G5yy 氨基酸标准溶液含有17种天然氨基酸。
Z{l`X#': 样品溶液含有十七种天然氨基酸和三种非天然氨基酸。
~fL`aU& 准确量取样品溶液200μl,置1.5ml塑料离心管中,准确加入20μl正亮氨酸内标溶液,混匀,用氮吹仪上吹干后,加220μl 0.1mol/L盐酸溶解,加入三乙胺乙腈溶液100µl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400µl,振摇后放置10分钟,取下层溶液,用0.45µm小滤器过滤。
9mXmghoCO 另准确量取混合氨基酸标准溶液200µl,置一1.5ml塑料离心管中,准确加入20μl正亮氨酸内标溶液,混匀,加入三乙胺乙腈溶液100µl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400µl,振摇后放置10分钟,取下层溶液,用0.45µm小滤器过滤。
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*% 色谱条件: Dt7z<1-)l 色谱柱:Agela Venusil AA柱,100Å,4.6×250mm,5µm(订货号:AA952505-0)
@m%B>X28F 流动相A:称取15.2g无水醋酸钠,加水1850mL,溶解后用冰醋酸调pH至6.5,然后加乙腈140mL,混匀,用0.45µm滤膜过滤。
OKau3T] 流动相B:80%(V/V)乙腈溶液。
+T*??OW@ 洗脱梯度:
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e:l)8+ 图1 氨基酸标准溶液(十七种天然氨基酸+正亮氨酸)
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图2 氨基酸标准溶液(十七种然氨基酸+正亮氨酸+三种非天然氨基酸)