JLYi]nZ 十八种天然氨基酸和三种非天然氨基酸:
十八种天然氨基酸:Asp,Glu,Ser,Gly,His,Arg,Thr,Ala,Pro,Tyr,Val,Met,Cys-Cys, Ile,Leu,Nle,Phe,Trp,Lys.
phK/ TV:9bn?r) 三种非天然氨基酸:Pal,Nal,Cpa
.N3mb6#[R 氨基酸标准溶液和样品溶液的衍生(PITC柱前衍生氨基酸
分析方法)
cR{#V1Z 氨基酸标准溶液含有17种天然氨基酸。
lk!@? 样品溶液含有十七种天然氨基酸和三种非天然氨基酸。
j+!v}*I![ 准确量取样品溶液200μl,置1.5ml塑料离心管中,准确加入20μl正亮氨酸内标溶液,混匀,用氮吹仪上吹干后,加220μl 0.1mol/L盐酸溶解,加入三乙胺乙腈溶液100µl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400µl,振摇后放置10分钟,取下层溶液,用0.45µm小滤器过滤。
*_e3 @g 另准确量取混合氨基酸标准溶液200µl,置一1.5ml塑料离心管中,准确加入20μl正亮氨酸内标溶液,混匀,加入三乙胺乙腈溶液100µl,异硫氰酸苯酯乙腈溶液100µl,混匀,室温放置1小时,然后加入正己烷400µl,振摇后放置10分钟,取下层溶液,用0.45µm小滤器过滤。
=v\.h=~~ 色谱条件: S@Y39 色谱柱:Agela Venusil AA柱,100Å,4.6×250mm,5µm(订货号:AA952505-0)
No$3"4wk 流动相A:称取15.2g无水醋酸钠,加水1850mL,溶解后用冰醋酸调pH至6.5,然后加乙腈140mL,混匀,用0.45µm滤膜过滤。
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{V>S,O3] 流动相B:80%(V/V)乙腈溶液。
i@q&5;%% 洗脱梯度:
xoL\us`A ^pS~Z~[d/ 图1 氨基酸标准溶液(十七种天然氨基酸+正亮氨酸)
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图2 氨基酸标准溶液(十七种然氨基酸+正亮氨酸+三种非天然氨基酸)