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[实验室管理]生化实验室15大常识 [复制链接]

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离线alex
 

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只看楼主 倒序阅读 使用道具 楼主  发表于: 2023-07-08
关键词: 实验室
  1.在重蒸酚中为什么加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇? 'GQ1;9A57  
 S]ZO*+  
保存在冰箱中的酚,容易被空气氧化而变成粉红色,这样的酚容易降解DNA,一般不可以使用。为了防止酚的氧化,可加入0.1%的8-羟基喹啉及少量巯基乙醇。8-羟基喹啉是带有淡黄色的固体粉沫,不仅能抗氧化,并在一定程度上能抑制DNase的活性。 @;_r `AT7  
7>xxur&  
2.如何将不同构型的质粒DNA区别开? =%Gecj  
5R4h9D5  
由于不同构型的DNA在琼脂糖凝胶电泳中的迁移率不同,cccDNA的泳动速度最快,通过凝胶电泳方法可将不同构型的DNA区别开。 W-=~Afy  
xXH%7%W'f  
3.用酚-氯仿抽提细胞基因组DNA时,通常要在酚-氯仿中加少许异戊醇,为什么? < Sm -Z,|  
D9e"E1f+"  
异戊醇可以降低表面张力,从而减少气泡产生。另外,异戊醇有助于分相,使离心后的上层含DNA的水相、中间的变性蛋白相及下层有机溶剂相维持稳定。 )vO Zp&  
gj\r>~S  
4.用乙醇沉淀DNA时,为什么加入单价的阳离子? <;#d*&]  
kxoJL6IC  
用乙醇沉淀DNA时,通常要在溶液中加入单价的阳离子,如NaCl或NaAc,Na+中和DNA分子上的负电荷,减少DNA分子之间的同性电荷相斥力,而易于聚集沉淀。 KQ?E]}rZ  
TWl':}  
5.在提取RNA时经常使用异硫氰酸胍,有什么作用? v"O{5LM"  
ywmx6q4MFL  
RNA是一种极易降解的核酸分子。高浓度强变性剂异硫氰酸胍使细胞结构迅速被破坏,使RNA从细胞中释放出来。同时高浓度异硫氰酸胍还使细胞内的RNA酶失活,使释放出的RNA不被降解。 s!Y>\3rMW  
cg7NtY  
6.蛋白印迹中封闭液的作用? Z4} Yw{=f  
g63:WX-\  
封闭液的作用是封闭未吸附蛋白的部位,以减少非特异性结合背景的影响。常用的封闭液有脱脂奶粉、小牛血清等。 )8ctNpQt  
F0bmGDp@-  
7.DNA通常保存在什么缓冲液中? CY)Wuv ^  
Ee9u 7TFT  
采用TE缓冲液,Tris-HCl的缓冲系统,加入EDTA可以螯合二价金属离子进而抑制依赖于二价金属离子的DNA酶的活性,对DNA起到保护作用。 V;=SncUb  
: i3-7k  
8.在酶切反应缓冲液中为什么加入BSA? P~;NwHZ?k  
.zlUN0oe  
通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。 j!&g:{ e  
ub}t3#  
9.简单的克隆载体必需包括什么? KLsTgo|J  
W3{k{~  
复制起点;选择标记:主要是抗性基因;多克隆位点:便于外源DNA的插入。 :b^tu 8E  
7 -gt V#  
10.用酚抽提细胞DNA时,有什么作用? n0@e%=H)I  
nXb;&n%  
使蛋白质变性。 GpN tvo~  
r@"Vbq%  
11.在分离DNA时,要使用EDTA,为什么? Z?G-~3]e  
AmRppbj/wO  
EDTA是金属离子螯合剂,螯合二价离子,抑制核酸酶的活性。 E$4\Yc)(AL  
Jmf&&)p  
12.在分离DNA过程中,造成DNA分子断裂的因素有哪些? vov"60K  
;-n+=@]7  
核酸酶降解;化学降解;物理剪切。 +x-n,!(  
I Vq9z  
13.使用离心机应注意什么? fi:Z*-  
NL0X =i  
首先应该根据自己的实验需求选择合适的离心机和转子以及离心管,使用离心机时的工作转速不应该超过离心机、转子以及离心管的最大允许转速。离心前注意严格平衡样品。安装转子和转子盖要规范、准确。离心时要留人看守,发现离心机异常应立即关闭离心机。离心结束后要安放好转子。 OY51~#BF  
(lwkg8WC  
14.分子生物实验室常用的灭菌方法有哪些? . ?[2,4F;  
D/9&pRsO  
高压蒸汽灭菌、干热灭菌、化学药剂消毒、过滤除菌。 ?X]7jH<iw;  
+[V?3Gdb  
15.使用移液器有哪些注意事项? Pp@P]  
v /G,  
垂直吸液、慢吸慢放;选择合适的量程范围,不能超过量程使用;选择与移液器匹配的枪头,安装枪头时不要用力太猛;移液器每日用完后,应旋到最大刻度。 ds4ERe /  
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