一、背景 &p%c tg 国标GB/T 22509-2008中利用22g的氧化铝柱进行油脂中的苯并(a)芘测定的前处理,利用氧化铝吸附油脂,通过80mL的石油醚或正己烷进行洗脱苯并(a)芘。该方法使用溶剂多,操作时间长,而且氧化铝对某些油样的净化效果较差。 [5 V 本实验利用Cleanert BAP-2固相萃取柱(装有经过特殊改性的活性炭)萃取油性样品中的苯并(a)芘,然后再用甲苯洗脱的方法,开发了一套油脂中苯并(a)芘检测的新方法,相对于国标GB/T 22509-2008的方法,具有更佳的油脂去除效果、稳定的苯并(a)芘回收率,溶剂用量更少更环保,方法也更简便。 '
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二、实验方法 i,HAXPi 2.1实验试剂及标准品 1_QO>T' 正己烷(色谱纯,4L/瓶,P/N: AH216),二氯甲烷(色谱纯,4L/瓶,P/N: AH300),甲苯(色谱纯或分析纯重蒸),乙腈(色谱纯,4L/瓶,P/N:AH015-4) L!G3u/ 苯并(a)芘(100mg/瓶,P/N: B1760) "osYw\unI 2.2实验仪器及耗材 9e5UTJ Agilent HPLC,配荧光检测器,移液枪,PTFE滤头0.22μm(P/N:AS041320-T)。 QHh#O +by# pi{ahuI#_o 三、实验步骤 !:8!\gE^P 3.1试样处理 ]5\vYk (1)使用正己烷配制200ppm苯并(a)芘标准品标样备用,并用正己烷稀释成1ppm苯并(a)芘工作液备用。 \2`U$3Q (2)取0.3g油于12mL样品瓶(P/N:1509-1800和P/N:1515-1748)中,加1mL正己烷涡旋震荡溶解,作为待净化液;若要做加标实验,根据需要向油中先加入适量的标准品。
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/0k- 3.2 固相萃取方法 iI1t
P 固相萃取柱名称:Cleanert BAP-2 (P/N:Bap10-2); V_pBM 固相萃取方法如下:Ø 活化:2mL正己烷;
Ø 上样:3.1中的待净化液;
Ø 淋洗:6mL二氯甲烷;
Ø 洗脱:甲苯12mL,收集于20mL玻璃瓶(P/N:AV7100-7和P/N:AV7920-0)中
Ø 浓缩:将样液在80℃下氮气吹干,用0.3mL正己烷定容,过PTFE 0.22um滤头,收集于1.5mL样品瓶(P/N:1109-0519和P/N:AV2100-0)的内插管(P/N:0609-0357)中,待测;
9wC; m : uE$o4X 3.3液相色谱法检测条件 k.ZfjX" (1)色谱条件: 9PAp*`J@kr 色谱柱:Venusil ASB-C18,4.6mm×250mm×5.0µm(P/N:VS952505-0); hA8 zXk/'8 流动相:乙腈:水 88%:12%; [oj"Tn( 流速:1.0mL/min; "->:6Oe2 进样量:20µL; +*V;
f, 荧光检测器:发射波长406nm,激发波长384nm。 GpL#,q Yc .vO.g/o 四、方法学考察 CkU=0mcY 4.1 标准曲线绘制 )VT/kIq-U 将标准工作液稀释到浓度分别为:0.5,1.0,2.0,3.5,5.0,7.5,10.0µg/L,根据峰面积建立标准曲线。根据实际油样中苯并(a)芘的可能含量,可以将标准曲线的线性范围延伸到50µg/L。 +mQSlEo 4.2 样品分析 o1Ln7r. 将3.1的样品进样分析,采用外标法定量。 +$t%L
4.3 计算公式 ~|rkt`8p 苯并(a)芘含量按下式计算: 2#3R]zIO 其中: WIm7p1U#V
w为样品中苯并(a)芘含量,单位为µg/Kg; J~q+G c为从标准曲线得到的待测液中苯并(a)芘的浓度,单位为µg/L; YkX=n{^ V为待测液体积,单位为µL,本方法为300µL; vXbT E$
m为称取的油样品质量,单位为g; 3;NRW+ Q\L5ZJ%y/ 五、测试结果5.1液相色谱法测试结果图1 空白实验色谱图
图2 5µg/L苯并(a)芘的标准样品的色谱图
fP58$pwu 图3 实际样品的加标(5µg/L)回收率实验色谱图 表1 苯并芘的回收率
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六、实验结论 c'";36y Cleanert BAP-2 去除油脂中杂质的效果良好,前处理的操作过程简单快捷。检测方法可采用液相色谱-荧光检测法,在5μg/L的添加水平的回收率可达85%以上。