1 仪器及材料 `YIf_a{ 仪器:Agilent GC-MS 7890-5975c;涡旋混合器;旋转蒸发仪; Sx8OhUyux 玻璃器皿:30mL样品瓶;200mL鸡心瓶;容量瓶;进样样品瓶; 6#Q K%[1!> 材料及试剂:氨基甲酸乙酯专用净化柱;氨基甲酸乙酯标准品;PTFE滤膜;二氯甲烷、甲醇均为色谱纯;无水硫酸钠(经600度煅烧); U~ck!\0&T F
3'9u# 2 标准溶液配制 m2v'WY5u 准确称取约0.1g(精确至0.0001g)氨基甲酸乙酯标准品于100mL容量瓶中,用甲醇定容至刻度,得到标准储备液。用甲醇逐级稀释储备液,得到20、10、5、1、0.1、0.05(单位为μg/mL)标准溶液,用于绘制标准曲线。同时稀释得到标准工作液4μg/mL、40μg/mL、400μg/mL,用于进行加标回收率实验。 PgRDKygE g'|MA~4yB 3 GC-MS操作条件 =F;.l@: 3.1 GC条件 npNB{J[ 毛细柱DA-INOWAX(30m*0.25mm*0.25um);进样口温度230℃;载气:高纯氦气;流速1ml/min;程序升温:60℃(5min)3.5℃/min 150;不分流进样,进样量1μL。 4M^G`WA}t9 3.2 MS条件 PK4iuU`vh 接口温度:240℃,电离方式:EI,电子能量:70eV,离子源温度:230℃,四级杆温度:150℃;扫描模式:SIM模式,监测离子:62,74,89,其中定量离子为62. Rh>}rGvCUN P'O#I}Dmw< 4 样品处理 }ga@/>Sl& 4.1 黄酒加标样品 izx#3u$P 称取20g黄酒于30mL样品瓶中,加入标准工作液0.1mL,涡旋混合均匀,将样品载入到净化柱上,静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。用3*40mL二氯甲烷洗脱,每次间隔1-3min,用鸡心瓶收集洗脱液,将洗脱液在40℃下旋转蒸发至约1mL,转移溶液至带刻度试管中,用2*1mL甲醇洗涤鸡心瓶,将洗涤液也转移至试管中进行合并,并用甲醇定容至4mL,加入少量无水硫酸钠,静置5min,用PTFE滤膜进行过滤,收集,取少量入进样样品瓶,待测。 0s>/mh; 4.2 黄酒样品 X B_B4X1R 量取20g黄酒,将样品载入到净化柱上,往下操作步骤同4.1(将样品载入到净化柱上,静置……)。 g{P%s'%* 4.3 空白样品 56Vb+0
J' 量取20g去离子水,将样品载入到净化柱上,往下操作步骤同4.1(将样品载入到净化柱上,静置……)。 @S7sr- +
Q6l*:<|c 5 实验结果 zr
U{@z$l 色谱图 b? j< BvQ 将处理得到的样品在仪器条件(3)下进行检测,得到的色谱图如图1~图3. ?Sb8@S&J p}<w#p
| 图1 标准溶液色谱图(浓度为1μg/mL) \2vg{ YX_gb/A 图2 黄酒样品加标色谱图(定容浓度为1μg/mL) Uk,gJR 8zBWIi 图3 黄酒样品色谱图 c?%(Dp E 标准曲线 W
mm4hkf V._(q^ 将步骤(2)配制的标准溶液,在仪器条件(3)下进行检测,绘制标准曲线,得到线性方程为y=2.19e+005*x+4.40e+003(相关系数为0.999),其中y为峰面积,x为目标物浓度(μg/mL),方法检出限为3ng/mL,定量限为10ng/mL加标回收率及精密度 DSj(]U~r 称取17份20g酒样,其中5份分别加入浓度为4μg/mL标准工作液0.1mL,5份分别加入浓度为40μg/mL标准工作液0.1mL,另外5份分别加入浓度为400μg/mL标准工作液0.1mL,余下2份酒样作为空白,在条件(4)下进行样品处理,将得到的样品在仪器条件(3)下进行检测,结果如表1所示。表1 加标回收率及精密度
E(i[o? 计算公式 ;q1A*f\:# 样品中氨基甲酸乙酯的含量(X)以mg/kg表示,按式(1)计算:X=(C1-C2)*V/m…………………………..(1)
^7.h%lSg 式中:
XJIv1s\g C1为试样中氨基甲酸乙酯的含量,单位为μg/mL; )nd\7|5# C2为空白试样氨基甲酸乙酯的含量,单位为μg/mL; #"49fMi/ V为试样最终定容体积,单位为mL; mB0l "# F \t|M-%&)4 m为称取试样的质量,单位为g。 Z,.G%"i3C 2z@\R@F 6 结论实验结果表明,该净化柱对氨基甲酸乙酯能有较好的回收率,同时,使用该净化柱能较好的去除酒中的氨基酸、蛋白质、糖、有机酸等干扰成分。该方法黄酒用量为20g,洗脱剂用量为120mL,对氨基甲酸乙酯含量较低的酒样能有较高的富集倍数,该方法实验操作快速、简便,可应用于大批量样品的前处理。 w\19[U3 $:of=WTY( v<9&B94z 附录 Gx
72 针对氨基甲酸乙酯含量较高的样品,可以减少取样量,具体方法如下:称取2g黄酒于10mL样品瓶中,加入标准工作液50μL,涡旋混合均匀,将样品载入到净化柱上,静置10min以保证黄酒样品和填料充分湿润。然后用12mL二氯甲烷洗脱,用流速调节阀控制流速为2 mL/min左右,用带刻度试管收集洗脱液,将洗脱液在30℃下氮吹至1mL(若体积小于1mL可以用二氯甲烷定容至1mL),加入少量无水硫酸钠,静置5min,用PTFE滤膜进行过滤,收集,取少量入进样样品瓶,待测。 w%zRH
f8C 其他测试方法同20g取样量的方法。