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X;5U@l 包括:
/~_Cb=7 1. Venusil ASB-C18或ASB-C8色谱柱或XBP-C8色谱柱(4.6*250mm,5μm,150Å)任选1支
,E
gIH%*g 2. 混合型的阳离子交换柱(Cleanert PCX 60mg/3mL)50支/盒,3盒
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rj 以上2项均为科技部“十一五”国家支撑计划成果
}P$48o VY 3.
三聚氰胺标准品1瓶(250mg,≥99.5%)
XR^VRn6O 4. 真空固相萃取装置(12位)
`d=$9Pi 5. 0.22μm,13mm Nylon针式过滤器过滤 200个/包
F<?e79},` 6. 三聚氰胺
分析方法手册1份
%iI0JF*Ez 7. 庚烷磺酸钠(10g/瓶),高纯甲醇、乙睛
AWLKve_ sBIqee'T * 试剂规格请以签订合同时为准,博纳艾杰尔科技拥有最终解释权。
#K7i<Bf 1 固相萃取(SPE)柱的选择:
]lF'o&v] 三聚氰胺呈弱碱性(弱阳离子化合物),净化过程一般选择阳离子交换柱。混合型的阳离子交换柱(PCX)通过将磺酸基团(-SO3H)键合在极性高聚物聚苯乙烯/二乙烯苯(PEP)吸附剂上,具有阳离子和反相两种吸附机理,并具有以下优点:
8w|
j Z@ 1) 可通过两种不同溶液的洗涤(水/一定pH值的缓冲溶液和有机溶剂),使样品更干净,提高
检测的灵敏度。
yZ,k8TJ", 2) 批次重复性好。
V/+r"l
e 3) 回收率高,重现性好,即使小柱跑干也可以得到较高回收率。
+1p>:cih 2 样品前处理步骤:
1){1 HK 2.1标准样品配制:
xIF
z@9+k 取50mg三聚氰胺标准品,以20%甲醇溶解定容至50mL得到1000ppm的标准溶液,使用时,以合适溶液稀释至所要的浓度。
5;V#Z@S 2.2提取:
.i/]1X*;r^ 称取饲料/奶粉样品5g (或牛奶10mL),加入50mL 1%三氯乙酸提取液,充分混匀,加入2mL 2%乙酸铅溶液,超声20min。然后取部分溶液转移至10mL离心管中,8000rpm/min离心10min,取上清液3mL过混合型阳离子交换小柱(PCX),同时处理多个样品,需要用真空固相萃取装置(12位),可达到方便、快速、高通量分析样品的目的。
^ h^2='p 2.3净化(PCX小柱,60mg/3mL) :
o lNL|WJ`w 1) 活化及平衡:3mL甲醇,3mL水
>qx~m>2|8] 2) 上样:加入提取液3mL
t1B0M4x9 3) 淋洗:3mL水;3mL 甲醇;弃去淋洗液并将小柱抽干。
UL
[4sv6\9 4) 洗脱:5mL 5%氨化甲醇(v/v)洗脱。(5%氨化甲醇的配制:5mL氨水+95mL甲醇)。
Y[T;j p(k 5) 浓缩:50℃,氮气吹干,20%甲醇/水定容至1mL。
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n] nl5K1!1 ;ijJ%/ 2.4检测:HPLC-UV检测方法
D +)6#i
Y Ht
EjM|zj 三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,需要用离子对试剂色谱方法才能有良好的保留与分离,按照
美国食品药品监督管理局(
FDA)的三聚氰胺
检测方法和
中国农业部颁部的三聚氰胺检测方法,采用艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列和Venusil XBP色谱柱,均能得到良好的结果,分析色谱图如下:1、 三聚氰胺的FDA检测方法
#X"\:yN 色谱柱:Venusil ASB C8 4.6×250mm
p`1d'n[ 缓冲液:10mM柠檬酸,10mM辛烷磺酸钠,调pH为3.0。
~<v.WP<: 流动相:缓冲液:乙腈= 85:15
M)EKS 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10μL,
U3kf$nbV/J 进样前用0.22μm针式过滤器过滤
l$,l3 流 速:1.0mL / min
R76'1o 柱 温:40 ℃
]vQo^nOo 波 长:240nm
"XC6 l4Z 2、三聚氰胺的中国农业部颁标准检测方法
Yc?t aL) (1)色谱柱:Venusil ASB-C18 4.6×250mm
83i%3[L 缓冲液:10mM柠檬酸, 10mM庚烷磺酸钠
1V+1i)+ 流动相:缓冲溶液:乙腈=85:15
K!I]/0L 进样量:样品用缓冲液溶解成约0.1mg/mL,进10uL
gyCb\y+\a 进样前用 0.22μm针式过滤器过滤
f[.hN 流 速:1.0mL/min
.[1A 柱 温:40℃
&p;};n `t!iknOQ$ 波 长:240nm
crgYr$@s? (2)色谱柱:Venusil XBP-C8 4.6×250mm缓冲液:10mM柠檬酸,10mM庚烷磺酸钠
&@+K%qW[e 流动相:缓冲液:乙腈=85:15进样量:样品用缓冲溶液溶解成约0.1mg/ml,进10μL
M8cLh!! 进样前用0.22μm针式过滤器过滤流速:1.0mL/min
xo@N~ 柱温:20℃波长:240nm
p+8]H
% Rt<10minLC-MS参考方法
ljt1:@SN( 由于HPLC-UV方法中,流动相添加了离子对试剂,限制了液质联用方法的使用;但不用离子对试剂色谱方法,三聚氰胺在传统的C18柱上保留很差,没有良好的保留与分离。源于此
问题,博纳艾杰尔科技公司自主开发了新的方法,采用博纳艾杰尔(Agela) Venusil ASB系列亲水色谱柱,不用离子对试剂也能得到有效的保留与分离,参考方法如下:
lh#GD"^(w& 缓冲液:10mM NH4AC流动相:缓冲液:ACN=95:5
3lL:vD5( 流 速:1.0mL/min进样量:先用70%ACN溶解成约1mg/mL,用ACN稀释成0.1mg/mL,进10μL
-|)[s[T~m 进样前用0.22μm针式过滤器过滤柱温:40℃
er#we
=h 波长:240nm
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