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6G&2d> 北京时间1月25日凌晨消息,新西兰牛奶中发现了有害物质——双氰胺。双氰胺又名二氰二胺,缩写DICY或DCD。虽然国际标准未对食品中的双氰胺限量,但高剂量的双氰胺对人体是有毒的。 IAEAhqp
针对婴幼儿奶粉中基质复杂的特点,本方法加大了净化材料的用量,以获得了更好的净化效果。采用新一代的Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管(500mg/15mL,货号:MS-SQA02)和Venusil® HILIC液相色谱柱,建立了奶粉中双氰胺的MAS-QuEChERS快速前处理方法和LC-UV以及LC-MS/MS检测方法。 ]d`VT)~vje `kr?j:g 1 实验部分 kl,3IKHa TKjFp% 1.1 仪器、试剂与材料 m3ff;, 高效液相色谱仪,涡旋振荡器,超声波清洗机,氮吹仪。 RL<c>PY
双氰胺标准品(CAS: 461-58-5;FW=84.08),新一代Cleanert® MAS-QuChERS-双氰胺净化管,Venusil® HILIC液相色谱柱,微孔滤膜,乙酸铵、乙酸、乙腈为色谱纯,实验用水为超纯水。 +O5hH8<&b lLD12d 1.2 实验步骤 |%v^W 3 称取1g试样于50mL具塞离心管中,加2mL水,涡旋30s,加2ml乙腈涡旋30s。再往现有的提取液中加2mL乙腈,重复上述提取步骤。再将该提取步骤重复2次,得到共计约10mL的提取液。以4000r/min离心5min,将全部上清液加入新一代Cleanert® MAS-QuChERS管中(500mg/15mL),将MAS管上下晃动30s,然后涡旋30s后,8000r/min离心5min,取全部上清液(约10ml)于玻璃试管中,50℃下氮气吹干,加入1ml乙腈复溶,过0.22μm微孔滤膜,待测。 p8Q1-T3v
注:1.做基质加标实验时的标准溶液建议选择以水为溶剂,防止加标瞬间发生蛋白沉淀; _~pbqa,
2.乙腈提取分4次,为防止乙腈体积过多时沉淀蛋白速度过快,影响提取效果。 6^Sa; {e5= &A 1.3 实验条件 d %#b:(, 1.3.1高效液相色谱法(HPLC法): B?qjkP 色谱柱:Venusil® HILIC(5μm,100Å,4.6*250mm); !Uc T RI
流动相: 10mmol/L乙酸铵(pH=4.0):乙腈=15: 85; E E'!|N3
波长:220nm;进样量:10µl;柱温:30℃;流速:0.8mL/min。 -^57oU 1.3.2 LC-MS/MS法: g ci (1)色谱条件:
H.2QKws^F 色谱柱:Venusil® HILIC( 5μm,100Å,2.1*150mm); D0q":WvE
流动相:A:0.5mmol/L乙酸铵(pH=4.0) d/Q%IeEL.
B:乙腈; Q&V;(L62!
进样量:10µL;柱温:30℃;流速:0.3 mL/min。表2 流动相梯度程序
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FYkH Q|L~=9 *备注:本文曾尝试过多种C18色谱柱,对双氰胺没有保留,需要使用离子对试剂,但是无法用于LC-MS/MS;也曾尝试过MERCK ZIC-HILIC柱,但是得到双氰胺的峰面积偏差较大,分析原因是其具有阳离子交换基团,对双氰胺有不稳定的死吸附。最后确定使用键合丙基酰胺的Venusil HILIC柱,以亲水作用色谱机理对双氰胺进行保留。 x;')9/3 <|\Lm20G] (2)质谱条件:
,: ->ErP 质谱仪:API 4000+;离子源:电喷雾离子源;扫描方式:正离子扫描;
检测方式:多反应监测;CAD:8.00;CUR:20.00;GS1:60.00;GS2:50.00;IS:5500.00;TEM:600.00。
表3双氰胺质谱信息
)Beiu* 注:带“____”的监测离子对为定量离子对。 WT}H>T 2.结果与讨论 4{l, 2.1 高效液相色谱法: F:l%O#V 2.1.1双氰胺的液相色谱图
ym6K!i]q4 2.1.2实际样品基质加标的线性关系和检出限
\j)E5b+ 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶解并稀释至刻度,作为标准贮备液;
EyLu O-5 分别称取1g奶粉试样,添加一定量标准溶液,配制成含双氰胺为0.5µg/g,1µg/g,2µg/g,5.0µg/mL和10µg/g的添加样品,按照上述提取、净化方法操作,所得净化液按照上述色谱条件,依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表4:
表4 双氰胺线性方程和定量限(HPLC法)
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O 2.1.3准确度和精密度
xp9pl[l 选取市售某品牌婴幼儿奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表5表5 0.5µg/g添加回收实验结果(HPLC法)
65m"J' _{Hj^}+$ .jpg)
(@}!0[[^ 2.2 LC-MS/MS法 uXq.
]ub }-3mPy(*% 2.2.1双氰胺的LC-MS/MS图 $DUZ!zaH! .y,0[i V
N 2.2.2实际样品基质加标的线性关系和检出限 C{XmVc. 准确称取双氰胺标准品50mg于50mL容量瓶中,加水溶液并稀释至刻度,作为标准贮备液; I,'k>@w{s
分别称取1g奶粉试样,添加一定量标准溶液,配制成含双氰胺为5ng/mL,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL和200ng/mL的添加样品,按照上述提取、净化方法操作,所得净化液按照上述液质条件,依次进样检测。以双氰胺含量为横坐标,峰面积为纵坐标,拟合线性方程,结果见表6:表6 双氰胺线性方程和定量限(LC-MS/MS法)
2.2.3准确度和精密度 0,8okAH 选取市售某婴幼儿奶粉试样,进行添加回收实验,结果见表7。采用空白样品稀释法判断
检测方法的基质效应影响。空白净化液稀释和乙腈稀释的标准溶液,双氰胺峰面积和相对丰度比无明显变化,故判断该方法无基质效应的影响。
表7 10ng/g添加回收实验结果