4 测试方法 J{ [n?/A{
4.1 方法提要 Ze<K=Q%(i
本方法采用计数浓度法,即通过收集悬游在空气中的生物性粒子于专门的培养基,经若干时间,在适宜的生长条件下让其繁殖到可见的菌落进行计数,从而判定洁净环境内单位体积空气中的活微生物数,以此来评定洁净室(区)的洁净度。 A,su;Qh
4.2 所用的仪器、设备和培养基 wIkN9
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a)浮游菌采样器; z"D.Bm~ ]
b)真空抽气泵; >56>*BHD
c)培养皿; =_j vk.
d)培养基; tg^sCxz9]
e)恒温培养箱。 86@c't@
4.3 浮游菌采样器 \
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浮游菌采样器宜采用撞击法机理的采样器,一般采用狭缝式采样器或离心式采样器。
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4.3.1 采用的浮游菌采样器必须要有流量计和定时器。 OY[e.N
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4.3.2 狭缝式采样器的原理 '|;X0fD
狭缝式采样器由附加的真空抽气泵抽气,通过采样器的缝隙式平板,将采集的空气喷射并撞击到缓慢旋转的平板培养基表面上,附着的活微生物粒子经培养后形成菌落,予以计数。 f%5zBYCgC
4.3.3 离心式采样器的原理 zf3v5Hk
离心式采样器由于内部风机的高速旋转,气流从采样器前部吸入从后部流出,在离心力的作用下,空气中的活微生物粒子有足够的时间撞击到专用的固形培养条上,经培养后形成菌落,予以计数。 }@if6(0
4.3.4 狭缝式采样器的使用要点 Q{e
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应严格按仪器说明书的要求进行操作。 0G!]=
4.3.4.1 校验 No2b"G@
采样器必须按仪器的检定周期,定期对仪器作检定,以保证测试数据的可靠性。校验的项目有:定时器、转盘转速、流量计。 .^J2.>.
4.3.2 每次测试前应按说明书上的规定,先接通电源,启动真空抽气泵,然后调节流量计及定时器。 F~ Lx|)0M
4.3.4.3 空气采样量根据需要选定。已知采样器的流量(L/min),设定采样时间(min),两者相乘即采样量(L)。 P`r55@af4
4.3.4.4 注意事项
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4.3.4.4.1 采样口必须用便于消毒及化学性能稳定的材料制造。 E2)h?cs
4.3.4.4.2 采样管严禁渗漏,内壁应光滑。 oyo(1>
4.3.4.4.3 采样管的长度应根据测点的高度定,尽量减少弯曲。 5zON}"EC
4.4 真空抽气泵 X.`~>`8
4.4.1 真空抽气泵的排气量应与采样器匹配。 8enEA^
4.4.2 宜采用无油真空抽气泵,必要时可在非气口安装气体过滤器。 ~
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4.4.3 真空抽气泵安装的位置必须适当,一般装在采样器下面。 tHLrhH<w
4.5 培养皿 9@+5LZR
4.5.1 狭缝式采样器一般采用Æ 150mm×15mm、Æ 90mm×15mm、Æ65mm×15mm三种规格的硼硅酸玻璃培养皿。可根据所选用采样器选择合适的培养皿。 $XoQ]}"O
4.5.2 离心式采样器采用专用的固形培养条。 6'xsG?{JY
4.6 培养基 KZPEG!-5
普通肉汤琼脂培养基或其他药典认可的培养基。其配制方法见附录A(标准的附录)。 e{Z &d
4.7 恒温培养箱 `({T]@]V
必须定期对培养箱的温度计进行检定。 :6$>_m=i
4.8 测试步骤 ;;&}5jcV
4.8.1 测试前仪器、培养皿表面必须严格消毒。 s(W|f|R
4.8.1.1 采样器进入被测房间前先用消毒房间的消毒剂灭菌,用于100级洁净室的采样器宜一直放在被测房间内。 I}R0q
4.8.1.2 用消毒剂擦净培养皿的外表面。 >LDhU%bH
4.8.1.3 采样前,先用消毒剂消毒采样器的顶盖、转盘以及罩子的内外面,采样结束,再用消毒剂轻轻喷射罩子的内壁和转盘。 $ImrOf^qt
4.8.1.4 采样口及采样管,使用前必须高温灭菌。如用消毒剂对采样管的外壁及内壁进行消毒时,应将管中的残留液倒掉并晾干。 `-LGU7~+
4.8.1.5 采样者应穿戴与被测洁净区域相应的工作服,在转盘上放入或调换培养皿前,双手用消毒剂消毒。 ,0LU~AGe
4.8.2 狭缝式采样器的采样程序 @IXsy
4.8.2.1 仪器经消毒后先不放入培养皿,开动真空泵抽气,使仪器中的残余消毒剂蒸发,时间不少于5min,并调好流量、转盘转速。 gCyW Vp
4.8.2.2 关闭真空泵,放入培养皿,盖上盖子后调节采样器缝隙高度。 !>:?rSg*
4.8.2.3 置采样口于采样点后,依次开启采样器、真空泵,转动定时器,根据采样量设定采样时间。 H/}]FmjN
4.8.3 培养 "Wx]RN:
4.8.3.1 全部采样结束后,将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 6uR^%W8]
4.8.3.2 在30℃~35℃培养箱中培养,时间不少于48h。 Kv~U6_=1
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4.8.3.3 每批培养基应有对照试验,检验培养基本身是否污染。可每批选定3只培养皿作对照培养。 1@$Ko5
4.8.4 菌落计数 !F?XLekTi
4.8.4.1 用肉眼直接计数、标记或在菌落计数器上点计,然后用5~10倍放大镜检查,有否遗漏。 {5
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4.8.4.2 若平板上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。 #KO,~]k5|e
4.8.5 注意事项 t45Z@hmcW
4.8.5.1 使用前仔细检查每个培养皿的质量,培养基及培养皿有变质、破损或污染的不能使用。 33}oO,}t,
4.8.5.2 采取一切措施防止采样管的污染和其他人为对样本的污染。 ?Q&yEGm(
4.8.5.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 H*r>Y
4.8.5.4 由于细菌种类繁多,差别甚大,计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察,不要漏计培养皿边缘生长的菌落,并须注意细菌菌落或培养基沉淀物的区别,必要时用显微镜鉴别。 +]Y,q
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