- 发帖
- 204
- 世科币
- 381
- 威望
- 172
- 贡献值
- 51
- 银元
- 0
|
空气、食品接触面微生物检验方法、检验标准 sl|s#+Z 目的: * 103 检测生产车间空气、操作人员手部、与食品有直接接触面的机械设备的微生物指标,生产区域环境当中病原微生物的监控,达到规定标准,以控制食品成品的质量。 PB4E_0}h KSVIX!EsX 参照标准: m{!BSl 中华人民共和国国家标准《一次性使用卫生用品卫生标准》GB15979-1995、《HACCP原理与实施》、中华人民共和国国家标准《公共场所空气微生物检验方法细菌总数测定》GB/T 18204.1-2000、中华人民共和国进出口商品检验行业标准SN 0169-92/SN 0172-92/ SN 0170-92、 出入境检验检疫局二000四年《出入食品微生物检验培训教材》中《出入食品生产厂卫生细菌检验方法》、日本东京冷冻食品检验方法。 2 *n2!7jZ* qLKyr@\' 采样与检测方法: COFs?L.` 3.1空气的采样与测试方法 P~_CDh.N 3.1.1样品采集: n)} J< (1)取样频率: J[Y
A1 a)车间转换不同卫生要求的产品时,在加工前进行采样,以便了解车间卫生清扫消毒情况。 W)^:*z b)全厂统一放长假后,车间生产前,进行采样。 ]~8bh*,= c)产品检验结果超内控标准时,应及时对车间进行采样,如有检验不合格点,整改后再进行采样检验。 &o^ wgmS d)实验性新产品,按客户规定频率采样检验。 o}v #Df e)正常生产状态的采样,每周一次。 YC&iH>jO3 (2)采样方法 k(=\&T 在动态下进行,室内面积不超过30 m2,在对角线上设里、中、外三点,里、外点位置距墙1 m;室内面积超过30 m2,设东、西、南、北、中五点,周围4点距墙1 m。采样时,将含平板计数琼脂培养基的平板(直径9 cm)置采样点(约桌面高度),并避开空调、门窗等空气流通处,打开平皿盖,使平板在空气中暴露5 min。采样后必须尽快对样品进行相应指标的检测,送检时间不得超过6h,若样品保存于0~4℃条件时,送检时间不得超过24h。 'nP'MA9b;a 3.1.2菌落培养: rZu_"bcJ (1)在采样前将准备好的平板计数琼脂培养基平板置37℃±1℃ 培养24 h,取出检查有无污染,将污染培养基剔除。 98Srn63O (2)将已采集样品的培养基在6 h内送实验室,细菌总数于37℃±1℃培养48h观察结果,计数平板上细菌菌落数。 Ou2
H~3^PL (3)菌落计算: P.qD,$- a) 记录平均菌落数,用“个/皿”来报告结果。用肉眼直接计数,标记或在菌落计数器上点计,然后用5~10倍放大镜检查,不可遗漏。 ?#}=!$p b) 若培养皿上有2个或2个以上的菌落重叠,可分辨时仍以2 个或2个以上菌落计数。 J}jK_ 3.2工作台(机械器具)表面与工人手表面采样与测试方法: ;zs*Zd7h M 3.2.1样品采集: gK(E0p" (1)取样频率: 6i.'S5.
a)车间转换不同卫生要求的产品时,在加工前进行擦拭检验,以便了解车间卫生清扫消毒情况。 kjNA~{ b)全厂统一放长假后,车间生产前,进行全面擦拭检验。 wrqdQ}@( c)产品检验结果超内控标准时,应及时对车间可疑处进行擦拭,如有检验不合格点,整改后再进行擦拭检验。 >-X&/i d)实验新产品,按客户规定擦拭频率擦拭检验。
@KOa5-u e)对工作表面消毒产生怀疑时,进行擦拭检验。 H7Y}qP5X f)正常生产状态的擦拭,每周一次。 f@LUp^Z/v (2) 采样方法: fEVuH] a) 工作台(机械器具):用浸有灭菌生理盐水的棉签在被检物体表面(取与食品直接接触或有一定影响的表面)取25cm2的面积,在其内涂抹10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。 yqejd_cd b) 工人手:被检人五指并拢,用浸湿生理盐水的棉签在右手指曲面,从指尖到指端来回涂擦10次,然后剪去手接触部分棉棒,将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内送检。 ~%
#?;hJ (3)采样注意事项: T{uktIO/ 擦拭时棉签要随时转动,保证擦拭的准确性。对每个擦拭点应详细记录所在分场的具体位置、擦拭时间及所擦拭环节的消毒时间 <(f4#BP 3.2.2细菌·大肠菌群的检测培养: '')G6-c/ 样液稀释:将放有棉棒的试管充分振摇。此液为1:10稀释液。如污染严重,可十倍递增稀释,吸取1ml 1:10样液加9ml无菌生理盐水中,混匀,此液为1:100稀释液。 .z[+sy_ 3.2.2.1 细菌总数: //J:p,AF (1)以无菌操作,选择1~2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿(平行样),将已融化冷至45℃左右的平板计数琼脂培养基倾入平皿,每皿约15ml,充分混合。 e\yj>tQJg (2)待琼脂凝固后,将平皿翻转,置36℃±1℃ 培养48 h后计数。 d\)v62
P (3)结果报告:报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数 fx;5j; 3.2.2.2大肠菌群: SN]/~>/ (1)平板法: (XW#,=rYk a) 以无菌操作,选择1~2个稀释度各取1ml样液分别注入到无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿(平行样),将已融化冷至45℃左右的去氧胆酸盐琼脂培养基倾入平皿,每皿约15ml,充分混合。待琼脂凝固后,再覆盖一层培养基,约3-5 ml。 E_H1X'|qS4 b) 待琼脂凝固后,将平皿翻转,置36℃±1℃ 培养24h后计数。 &McmA c) 结果计算: 以平板上出现紫红色菌落的个数乘以稀释倍数得出。 &
1Y+q] d) 结果报告:报告每25cm2食品接触面中或每只手的菌落数 w}YHCh (2)试管法: Q1jyetk~I a) 以无菌操作,选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到BGLB肉汤培养基中,每个稀释度接种三管。 >)
N#n` b) 置BGLB肉汤管于36℃±1℃培养48±2h。记录所有BGLB肉汤管的产气管数。 yjSN;3t71 c) 结果报告:按BGLB肉汤管产气管数,查MPN表报告每25cm2食品接触面中或每只手的大肠菌群值。 0)P18n"$ 3.2.3金黄色葡萄球菌检测 QqwXFk (1)定性检测 FdSa Ood8 a) 取1ml稀释液注入灭菌的平皿内,倾注15-20ml的B-P培养基,(或是吸取0.1稀释液,用L棒涂布于表面干燥的B-P琼脂平板),放进36±1℃的恒温箱内培养48±2小时。 'sA&Pm b) 从每个平板上至少挑取1个可疑金黄色葡萄球菌的菌落作血浆凝固酶实验。 JNu - z:J c) 结果报告:B-P琼脂平板的可疑菌落作血浆凝固酶实验为阳性,即报告手(工器具)上有金黄色葡萄球菌存在。 Kz<xu ulr (2)定量检测 9
.@(& a) 以无菌操作,选择3个稀释度各取1ml样液分别接种到含10﹪氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤培养基中,每个稀释度接种三管。
Ym6ec|9; b) 置肉汤管于36±1℃的恒温箱内培养48小时。划线接种于表面干燥的B-P琼脂平板,置36℃±1℃ 培养45~48小时。 gO/(/e>P c) 从B-P琼脂平板上,挑取典型或可疑金黄色葡萄球菌菌落接种肉汤培养基,36℃±1℃培养20~24小时。 2tbqmWw/s d) 取肉汤培养物做血浆凝固酶试验,记录试验结果。 ~FsUK;? e) 报告结果:根据凝固酶试验结果,查MPN表报告每25 cm2食品接触面中或每只手的金黄色葡萄球菌值。 yp4G"\hN9 3.3工厂环境中病原体的检测计划与方法 Q?tV:jogY 检测计划:为了保证食品安全,工厂应该对生产环境中的病原微生物进行检测和评估,检测项目包括李斯特菌,沙门氏菌等病原体微生物,化验室应该按照一定的计划对生产场所环境中的病原体进行检测,其中包括地面、下水道、排水沟、墙壁、天花板、设备框架、运输的支架,冷藏装置、速冻机、传送带、设备的螺丝、维修工具等部位。当某个点检测到病员微生物时,应该对环境中的相似点加大检测频率;在把所有的预定点检测完后,应该对环境中的病原微生物的存在状况进行全面评估,在下一次环境检测循环过程中加强检测容易出现病原体的环境点,达到持续改进的目的。 =;`YtOL 检测频率: 每月两次,每次每个区域至少选取5个检测点,分别进行检测。 SH(kUL5 3.3.1环境李斯特菌的检测方法(3MTM PetrifilmTM 环境李斯特菌的测试片) +sI.GWQ_: 3.3.1.1 用涂抹棒,海绵或者其他采样设备收集环境样本。 G!~BA* 3.3.1.2 将收集的样本添加10毫升灭菌的缓冲蛋白胨水,将样本与缓冲蛋白胨混合1分钟,将样品置于室温(20-30℃)1小时,最久不超过1.5小时,以修复损伤的李斯特菌。 HUghl2L.< 3.3.1.3 将测试片放在平坦处,掀起上层膜。 '
EDi6 3.3.1.4 用移液器垂直滴加3毫升样品到下层膜中央,将上层膜缓慢盖下,以免产生气泡。 "
4`%NA 3.3.1.5 轻轻将塑料压板放在位于接种区上层膜上,不要压,扭转或者滑动压板。提起压板等至少十分钟,以使胶体凝固。 toWmm(7v 3.3.1.6 将测试片透明面朝上,可叠放至十片,在37℃±1℃培养26-30小时,可以用标准菌落记数器或者其他光学放大器判读,不要记数圆形轮廓上的菌落,因为他们不受选择性培养基的影响。 Y;w]u_ 3.3.1.7 对于定性检测,根据紫红色菌落是否存在,结果记为检出或者未检出。 &8pXkD#A 3.3.2环境中沙门氏菌的检测方法 {eXYl[7n 3.3.2.1采样地点: 选取采样点时因尽量选取微生物容易滋生的地方 kA!(}wRL 3.3.2.2 操作步骤 k_<{j0z. 3.3.2.2.1采样应在生产开始后进行,用已浸润过的棉拭在选定的被测表面旋转涂抹约100cm2的面积,然后将棉拭放回涂抹试管并盖紧。 \!Zh= "hN 3.3.2.2.2将样品带回实验室,每5个点混合成一个样品, 登记编号,按照SN0170-92标准及时检测,若有阳性结果出现,应逐步对所混合的每个点分别检测。 1\*B. 物体表面涂抹菌落总数计算方式:物体表面细菌总数(cfu/c㎡)=平皿上菌落的平均数*采样液稀释倍数/采样面积(cm2) rJZs
5g` 根椐GB15979-2002《一次性卫生用品卫生标准》的标准,生产环境卫生指标 !9xANSb 1 装配与包装车间空气中细菌菌落总数应≤2 500 cfu/m3。 w"agn}CK 2 工作台表面细菌菌落总数应≤20 cfu/cm2。 Hu8atlpo 3. 工人手表面细菌菌落总数应≤300 cfu/只手,并不得检出致病菌。 m}[~A
@qD 人员和环境卫生检测方法 t!~YO'<dS 一、 空气采样及检验方法 7.
9s.* 1培养基:普通营养琼脂平板,按GB4789.28中3.7条配制 QYfAf3te 2采样(空气沉降法) }<ONx g6Kb 2.1布点:面积小于30平方米的车间,设一对角线,在线上取3点,即中心一点,两端在距墙1米处各取一点;面积大于30平方米的车间,设东、西、南、北、中5个点,其中东、西、南、北点均距墙1米。 y
F5 2.2采样高度:与地面垂直高度80-150厘米。 iW1ih QX 2.3采样方法;用直径为9厘米的普通营养琼脂平板在采样点上暴露20分钟盖上送检培养。 R``VQ 3培养:于37℃培养24小时。 ]9&q'7*L 4检测频率:每周 'SU9NQS 空气质量标准: @=NVOJy}c 生车间、熟车间、成品车间:低于100个 m>+,^`0 半成品库、成品库:低于10个 s>@#9psm 二、设备的采样与检验方法 >}DjHLTW\ 根据生产过程所要求的重点卫生部位,实验室对其进行涂抹采样,进行细菌总数检验。 40Qzo%eL 1采样方法 W]D`
f8r9 1.1涂抹法(适用于表面平坦的设备和工器具产品接触面) RUk<=!U 取经过灭菌的铝片框(框内面积为50平方厘米)放在需检查的部位上,用无菌棉球蘸上无菌生理盐水擦拭铝片中间方框部分,擦完后立即将棉球投入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中,此液每毫升代表5平方厘米。 kyx SIQ^ 1.2贴纸法(适用于表面不平坦的设备和工器具接处面)
AZy~Q9Kc 将无菌规格纸(5×5厘米,纸质要薄而软)用无菌生理盐水泡湿后,于需测部分分别贴上两张,两张纸面积共50平方厘米,然后取下放入盛有10毫升无菌生理盐水的试管中,此液每毫升代表5平方厘米。 E]H 2检验方法 Lk`k>Nn) 2.1细菌总数的检验 _7=pw5[ 将上述样液充分振摇,根据卫生情况,相应地做10倍递增稀释,选择其中2-3个合适的稀释度作平皿倾注培养,培养基用普通营养琼脂,每个稀释度作2个平皿,每个平皿注入1毫升样液,于37℃培养24小时后计菌落数。 uZ/7t(fy 结果计算 _)
#=>$k\ 表面细菌总数(cfu/cm2)=平皿上菌落的平均数×样液稀释倍数/30×2 sm2p$3v 2.2致病菌的检验 yL;o{
G 沙门氏菌,参照GB4789.4进行 )&Kn(l) 金黄色葡球菌,参照GB7918.5进行 x0u?*5-t 4.检验合格标准:细菌总数10-100个∕cm2, Ej+]^t$\ 5.关键点:细菌总数≤10个∕cm2 6VH90KAT 一般区域:细菌总数≤100个∕cm2 hi {2h04 三、人员手表面细菌污染情况的检验 hy$MV3LP 1. 采样方法:用一支蘸有无菌生理盐水的棉拭子涂擦被检对象手的全部,反复两次,涂擦的时候棉拭子要相应地转动,擦完后,将手接触部分剪去,将棉拭子放入装有10毫升无菌生理盐水的试管内送检培养。 lPRdwg- 2. 检验方法:同工器具表面细菌总数检验方法。 (>rS
_#^ 3. 结果计算:每只手表面的细菌总数(cfu/只手)=平皿上菌落的平均数× 样液稀释倍数 X(r)Z\ 四、消毒液药效的微生物学鉴定法 h/ LR+XX! 1采样对象:正常使用的消毒液,和已知配制好备用的消毒液 P"R97#C 2采样及检验方法 O)R7t3t 在无菌条件下,用无菌吸管吸取1毫升样液,加入9毫升稀释液中混匀,对于醇类与酚类消毒剂,稀释液用普通营养肉汤即可;对于含氯消毒剂、含碘消毒剂,需在肉汤中加入0.1%硫代硫酸钠,对洗必泰、季铵盐类消毒剂,需在肉汤中加入3%(W/V)土温80和0.3%卵磷脂;对醛类消毒剂,需在肉汤中加入0.3%甘氨酸;对于含有表面活性剂的各种复方消毒剂,需在肉汤中加入(W/V)土温80,以中和被检样液中的残效作用, `ICcaRIN8I 将注入了样液的稀释液充分摇匀,取1毫升注入平皿,随之倒入普通营养琼脂,待琼脂凝固后,翻转平皿,将平皿于37℃条件下培养24小时后计平板上生长的菌落数。 943I:, B 3结果分析 a%7"_{s1 平板上有菌生长,表明被检样液中有残存活菌,若每个平板菌落数在10个以下,仍可用于消毒,若每个平板菌落数超过10个,说明每毫升被检样液含菌量已超过100个,即不宜在用于消毒。 {yvb$ND|j{ 该公式是一个经验公式.它的理论模式依据是:100CM2的面积上10MIN降落的菌落数, #&^ZQs< 等于1升空气中所含的细菌总数.系数50000基于上述假说和单位换算而来. 2Vz'n@g= 细菌总数(CFU/M3)=5/10T*100/A*1000*N=50000*N/AT \6`v.B&v 5/10T:实际放置了5MIN; awj+#^ 100/A:A单一培养皿面积; >DDQ'W ! 1000:1M3=1000L啊,换算成m3 w1wXTt 1、空气细菌落菌数单位既然是cfu/m3,那采样时应该还要记录放置平皿的高度。
cT/3yf 2、食品安全管理体系中罐头行业有个标准如下: R&6n?g6@/V 落下菌数 空气污染程度 评价 R#Y50hzT 30以下 清洁 安全 =ud`6
{R 30~50 中等清洁 w) =eMdj\o 50~70 低等清洁 应加注意 HA$Y1} 70~100 高度污染 对空气要进行消毒 -1Djo:
y 100以上 严重污染 禁止加工 ^F>4~68d 3、是否可根据企业相应的加工产品微生物指标进行自行制定? j.k@6[R>?
|