[化妆品]化妆品微生物金黄色葡萄球菌检测 [复制链接]

  金黄色葡萄球菌在外界分布较广，抵抗力也较强，能引起人体局部化脓性病灶，严重时可导致败血症，因此化妆品中检验金黄色葡萄菌有熏要意义。

1．检验原理

美国CTFA和FDA检验化妆品中的金黄色葡萄球菌时，不经增菌直接接种到Vogel-Johnoson琼脂培养基上；日本方法则先用SCDLP绒SCD液体培养基增菌后，再接种Vogel-Johnoson琼脂培养基。经试验证明增菌后检出效果好。故我国采用先增再分离方法。分离金黄色葡萄球菌的培养基很多，如Vogel-Johnoson琼脂、Baird-Parker琼脂、血琼脂、卵黄高盐琼脂、TMP琼脂等。考虑到国内的习惯应用，可采用Baird-Parker琼脂或血琼脂。下一步的榆验各国都相同。

根据本菌特有的形态及培养特性，用Baird-Parker平板进行分离，该平板中的氯化锂可抑制革兰氏阴性细菌生长，丙酮酸钠可刺激金黄色葡萄球菌生长，以提高榆出率，并利用分解甘露醇和血浆凝固酶等特征来鉴别。

2．培养基和试剂

(1)SCDLP液体培养基制备方法与前述SCDLP液体培养基制备一致。

(2)7.5%氯化钠肉汤培养基：配方见表8-33所示。

制备方法：将上述成分加热溶解，调pH为7.4，分装，121℃，1.5min高压灭菌

(3)Baird-Parker平板：配方见表8-34所示。

增菌剂的配制：30%卵黄盐水50mL与除菌过滤的1%亚碲酸钾溶液10mL混合，保存于冰箱内。

Baird-Parker平板制备方法：将各成分中到蒸馏水中，加热煮佛完全溶解，冷至25℃校正pH。分装每瓶95mL高压灭菌15min。临用时热溶化琼脂，每95mL加入预热至50℃

的卵黄亚碲酸钾增菌剂5mL，摇匀后倾注于平板。培养基应的致密不透明的。使用前在冰箱贮存不得超过48h。

(4)血琼脂培养基：配方见表8-35所示。

制备方法。将营养琼脂加热溶化，待冷至50℃左右以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀，制成平板，置冰箱内备用。

(5)甘露醇发酵培养基：配方见表8-36所示。

制备方法：将蛋白胨、氯化钠、牛肉膏加到蒸馏水中，加热溶解，调pH至7.4，加入甘露醇和指示剂，混匀后分装试管中，115℃灭菌20min，备用。

(6)兔（人）血浆制备

取3.8柠檬钠溶液（121℃灭菌30min）l份加兔（人）全血4分，混匀静置，(2000～3000)r／min离心(3～5)min。血球下沉，取上面血浆。

3．仪器

(l)显微镜、培养箱、离心机、灭菌试管、载玻片。

(2)灭菌吸管：1mL，5mL，10mL

4．测定步骤

(1)增菌

取1：10稀释的的样品10mL接种到90mLSCDLP液体培养基中（如无此培养基也可用7.5%氯化钠肉汤培养基），置37℃培养箱，培养24h。

注：如无此培养基地也可用7.5%氯化钠肉汤培养基，检验含防腐剂的化妆品时，可在1000mL此培养基中加19卵磷脂，79吐80。

(2)分离

白上述增菌培养液中，取(1～2)接种环，划线接种在Baird-Parker氏培养基，如无此培养基地也可划线接种到血琼脂平板，置37℃培养(24～48)h。在血琼脂平板上菌落呈

金黄色，大而突起，圆形，不透明，表而光滑，周围有溶血圈。在Baird-Parker氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为(2～3)mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37℃培养24h。

(3)染色镜检

挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为(0.5～1)rim。

(4)甘露醇发酵试验

取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置37℃培养24h。，金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇卢酸。

(5)血浆凝固酶试验

玻片法：到清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性，主玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。

试管法：吸取1：4的新鲜血浆0.5mL。混匀，放37℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24h之内如于现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5mL，分别加入灭菌小试管内0.5mL1：4的血浆混匀，做为对照。

5．检验结果

凡在上述选择平板上有可疑菌落生长，经染色镜检，证明为革兰氏阳性葡萄球菌，并能发酵甘露醇产酸。血浆凝固酶试验阳性者，可报告被榆样品检出金黄色葡萄球菌。

文章出自: 世科网