【注意】
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a 放线菌素D是致畸剂和致癌剂,配制该溶液时必须戴手套并在通风橱内操作,而不能在开放在实验桌面上进行,谨防吸入药粉或让其接触到眼睛或皮肤。
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HG,c 药厂提供的作治疗用途的放线菌素D制品常含有糖或盐等添加剂。只要通过测量贮存液在440nm波长处的光吸收确定放线菌素D的浓度,这类制品便可用于抑制自身引导作用。
X"R;/tZ S4 4.0.1mol/L腺苷三磷酸(ATP)溶液
_A(J^;? 【配制方法】
4aGHks8Z,\ 在0.8ml水中溶解60mg ATP,用0.1mol/L NaOH调至pH值至7.0,用蒸馏水定容1ml,分装成小份保存于-70℃
,5nrovv 5.10mol/L乙酸酰溶液
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hC/= 【配制方法】
5}1c Np6@ 把770g乙酸酰溶解于800ml水中,加水定容至1L后过滤除菌。
TkK- r(= 6.10%过硫酸铵溶液
zd+8fP/UB 【配制方法】
]NN9FM.2b/ 把1g过硫酸铵溶解于终量为10ml的水溶液中,该溶液可在4℃保存数周。
,!c. 7.BCIP溶液
4"0`J 【配制方法】
JVU:`BH 把0.5g的5-溴-4-氯-3-吲哚磷酸二钠盐(BCIP)溶解于10ml 100%的二甲基甲酰胺中,保存于4℃
UnGG% 8.2×BES缓冲盐溶液
3:!+B=woR 【配制方法】
+oeO0 用总体积90ml的蒸馏水溶解1.07g盐溶液BES[N,N-双(2-羟乙基)-2-氨基乙磺酸]、1.6g NaCl和0.027g Na
2HPO
4,室温下用HCl调节 该溶液的pH值至6.96、然后加入蒸馏水定容至100ml,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成小份,保存于-20℃。
nKch_Jb 9.1mol/L CaCl
2溶液
)
=sm{R%T 【配制方法】
?-Fp r
C 在200ml蒸馏水中溶解54g CaCl
2·6H
2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成10ml小份贮存于-20℃。
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? 【注意】
rk{DrbRx 制备感受态细胞时,取出一小份解冻并用蒸馏水稀释至100ml,用Nalgene滤器(0.45μm孔径)过滤除菌,然后骤冷至0℃。
m8fxDepFA 10.2.5mol/L CaCl
2溶液
8I3"68c_a 【配制方法】
#"=_GA^.{ 在20ml蒸馏水中溶解13.5g CaCl
2·6H
2O,用0.22μm滤器过滤除菌,分装成1ml小份贮存于-20℃。
+U%
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w8b 11.1mol/L二硫苏糖醇(DTT)溶液
pX+ `qxF\ 【配制方法】
'*|Wi}0R 用20ml 0.01mol/L乙酸钠溶液(pH5.2)溶解3.09g DTT,过滤除菌后分装成1ml小份贮存于-20℃。
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5w( 【注意】
x<4-Q6'{S DTT或含有DTT的溶液不能进行高压处理。
LS*^TA(I[ 12.脱氧核苷三磷酸(dNTP)溶液
W/OZ}ky}^ 【配制方法】
wz<YflF 把每一种dNTP溶解于水至浓度各为100mmol/L左右,用微量移液器吸取0.05mol/l Tris碱分别调节 每一dNTP溶液的pH值7.0(用pH试纸检测),把中和后的每种dNTP溶液各取一份作适当稀释,在下表中给出的波长下读取光密度计算出每种dNTP的实际浓度,然后用水稀释成终浓度为50mmol/L的dNTP,分装成小份贮存于-70℃。
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8Rj 比色杯光径为1cm时,吸光度=εM