[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： (GRW(Zd4  
$2Wk#F2c=  
2- L-=0  
$MasYi
 
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） !}c D e12  
M}jl\{  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 /,7#%D  
 qjfv9sU  
流  速：1.0 mL/min RW>F %P  
E3Z>R=s  
波  长：242 nm \@2sI  
;c~DBJg'|  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） WY~
}sE  
Z42v@?R.!W  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 7e#|=e *I!  
CM's6qhQnn  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） SS~Txt75m  
O-2H!58$)  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A z=Vvb  
B# H  
柱  温：30℃ \j;uN#)28  
*(MvNN*  
B
;~agr  
#"{8Z&Z  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） oCYD@S>h  
cj<@~[uw  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 _64@zdL+  
sK? -@  
附件二 q*nz4QTOE  
J6ShI
Pc  
"@w%TcA  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS ,D2_Z]  
XuoEAu8]  
色谱条件： poYAiq_3T  
n,a5LR  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm 0
$L0fhw.  
4[,B;7  
进样口：250℃，不分流进样 p=_XM
h`;  
2'<=H76  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） ewAH'H] o  
6i]
Nr@1C  
进样量：1μL ke}Y
2sB  
8 )mjy!,  
流速：1 mL/min )@Zc?Da  
1 [Sv  
质谱条件：
Hva2j<h  
F+ffl^BQ  
接口温度：280℃ ?SC3Vzr  
.aNO( /kO  
电离方式：EI
|/@0~O(6  
z>6.[Z(T  
电离能量：70eV YMi/uy  
$( S*GF$S  
溶剂延迟：7min FtE90=$  
v{r1E]rY  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 @a0Q0M  
P/G>/MD/l  

88+ =F XG   序号 9mDnKW	[X<Pk   保留时间/min &))\2pl	lI6W$V\,   中文名称 Ys3uPs	`eR 7H>I   英文缩写 4x=(Zw_X	y' [LNp V   SIM离子 g`[$XiR
 #^0(   1 ^B]@Lr E^	eV2mMSY   8.265 izwUS!5e	D$q'FZH   邻苯二甲酸二甲酯 E=w3=\JP	7wVH8^|   DMP >: Wau	m_7 nz!h   163、77 U[\Vj_?(I
@cD uhK"U}   2 LKF/u` 0dP	n"D ?I   9.135 H=^K@Ti:	vqdX^m^PY   邻苯二甲酸二乙酯 [.,>wo~	!36]ud&   DEP o>]`ac0b}Y	5"KlRuv%   149、177 t#E}NR
G;iEo4\?   3 $7Jo8^RE	RVw9Y*]b   10.888 \_6OCVil	D@ek9ARAq   邻苯二甲酸二异丁酯 lEjwgk {	D=f7NVc>Q   DIBP A;XOT6jv?	h!@,8y[B   149、223 +FG$x/\*0
-;(Q1)&   4 j-@kW'K	Ue:z1p;g   11.637 83~ i:+;	b8KsR=]4I   邻苯二甲酸二丁酯 $& ~;@*[	Tpp&   DBP .0HZNWRtb	<3X7T6_:@   149、223 6&U+6gb
r a '   5 L];y}]:F*	3B0lb"e   11.979 R H;:9_*F	6"j_iB   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 YOyX[&oi	XdEPbD-   DMEP 3.  WF}8	Nw J:!   59、149、193 W\*-xf|"d
9e!NOl\_;.   6 Zzua17	qgt[~i*   12.72 jPvDFT^d/	{X]R-1>   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 #(Or|\t	^he=)rBb?   BMPP 3CjL\pIC	yj6@7@l>A   149、251 h~U02"$
>C WKH~   7 Z{IUy	#0I{.Wy]   13.044 gMWBu~;!	T[k4lM   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 }g+;y	?)Nj c&G   DEEP <E;pgw!	,ea^,H6   45、72 |rw%FM{F
5FVndMM#y   8 E9\v A*a	VpfUm ?Nq   13.41 [L` ZE*z	vr#+0:|   邻苯二甲酸二戊酯 ~ *:F{	nMDxH$O   DPP qbrpP(.	9[!,c`pw   149、237 jVLA CWH
\ w3]5gJZ   9 Z*G(5SqUh"	<2C7<7{7   15.552 %;#^l+UB	L(GjZAP   邻苯二甲酸二己酯 ZiLj=bh	5n bEf9&   DHXP iR"N13	$1SUU F\.   104、149、76 4tY ss
>M&3Y XC   10 _UuC,Pl3	(W}bG>!#Q8   15.694 $8BPlqBIZ	f 5`g   邻苯二甲酸丁基苄基酯 qgrg CJ	0iJue&   BBP !^ _"~	C"{k7yT   149、91 SCTA=l.
h?pkE   11 1</kTm/Qa	^7Fh{q4IE   17.153 k]I0o)+O.	u#@Q:tnN_   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 J^g!++|2P	f@c`8L@g   DBEP .?hP7;hhI	/n8B,-Z5s5   149、223 `9 b7>Nn<
6efnxxY}sa   12 X.e7A/ClEo	E3iW-B8u8   17.81 r|qp3x	GJqJlgHe   邻苯二甲酸二环己酯 #: [<iSk	9AJ7h9L   DCHP @("a.;1#o	Ls] g   149、167 ?qWfup\S
|= 'z{WS   13 k@ 3Q|na	%~E ?Z!_W   18.056 a @UZb	O\"3J(y,   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 =IQ5<;U3	2Q/4bJpd   DEHP 3c]b)n~Y	,D]QxbwZ   149、167 ->g*</
\eT5flC   14 mpuq 9)6	w$z}r   20.444 q)S^P>	aqRhh=iS   邻苯二甲酸二正辛酯 \W1,F6& j	h]+C.Eqnt#   DNOP dv8>[#	0E,8R{e   149、279 ORyE`h
o.w\l\   15 'oF%,4 !Y	_A+s)]}   22.98 2 "Ecd	o_@4Sl8   邻苯二甲酸二壬酯 NWM8[dI	}dp=?AFg   DNP Z&|Kki*	=&,]Z6{>   57、149、71 n}'=yItVL1

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 ad!(z[F'Y  
%B EC] h  
附件三 wVi%
oSfM  
za, 2 r^  
*kaJ*Ti-/  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 4`mO+.za1  
<q7s`,rG  
i X/tt  
;4d.)-<No_  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 n.;3X  
'aPCb`^;w  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 kt<@H11  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% 2^bgC~2C1  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% ,A?v,Fs>O[  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% @YrGyq  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% ^B6`e^<  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% 6<Be#Y]b  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% *ig5Q(b*N  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% fVv$K&  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% 2GUhV*TN  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% o(BYT9|.kw  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% C[^a/P`i  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% {_+>"esc  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% g=)U_DPRi  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% Yf%[6Y{  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% K.c6Rg  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% aa' 0EU:  
S<)RVm,!e  
w2RESpi  
   co(fGp#!  
z.\[Va$@l  
t8wz'[z  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 -qnXa  
M,v@ G$pW  
QYCNO#*  
\t~u :D  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 |@n{tog+-  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% U"R.!=v  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% 2b&
;Y/z  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% ^OcfM_4pN  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% .j'IYlv/P  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% E@}j}/%'O  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% hAD
b]O  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% cz~FWk  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% 
c]
0  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% d<m>H$\Dm  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% 1mPS)X_  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% 9)hC,)5   
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% 5|t&qUV  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% oh~Dbu=%  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% >n\Q[W  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% HWZ*Htr  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 ?,~B@Kx  
_)s<E9t2N  
2@K D '^(  
+-tv NX%IJ  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 ":s1}A  
zbQ-l1E  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 3ZdheenK9  
anDwv }  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 S$9>9!1>*  
E=N44[`.G  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 tE&@U$0>o  
)=,%iL-  
Vz=ByyC  
&G#LQl  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 fY)Dx c&ue  
,'FH[2  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， ~&zrDj~FI  
2#<)-Cak  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 JbV\eE#KrC  
8R3x74fL  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 %anY'GK
 
u-8b,$@Z>'  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 -Kas9\VWEw  
n7|8`?R^  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 Ipp#{'Do  
KQf=t0Z=Ce  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 +jEtu[ ;  
J1s~w`,  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 *(,zPn,  

AL#4_]m'  
M9zfT!-  
3gd&i  
M %jPH  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： ~3uP6\F  
[1.+HyJ}  
B&D}F=U  
c("_bOAT  
1、样品提取方法： Q-1vw6d  
itC-4^  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 qvPtyc^fN  
o}ZdTf=  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 <>Hj ;q5p  
X7rMeu  
aTt12Sc  
x9JD\vZ  
2、固相萃取方法：
w4gJoxY-`  
Ig f&l`\  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： .nVa[B|.  
\pVXimam  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； Eqj_m|@  
9@Jtaq>jf  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； i uF*.hc,%  
`)_dS&_\  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； AHXSt  
kH G"XTL  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 X\bOz[\  
OCBg R4I  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 K<>oa[B9  
Ab{ K<:l  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 MkfBuW;)  
_V7s#_p  
*Q?tl\E  
1Q<^8N)pf  
补充说明： ;f#v0W`5  
Enum/O5  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 4|riKo)  
9K{%vK  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 X' H[7 ^W  
}X)&zenz  
8m2Tk\;:  
b=yx7v"r  
HHDl8lo  
}()5"QB  
q)X$^oE!6  
S%bCyK%p  
t3
*wjQ3  
h`KFL/fT  
_ky,;9G]  
FQu8vwV6>  
Rp.Sj{<2  
EN$2,qf  
>zw.GwN|  
f!\lg
 
{IxA)v-`  
S|SV$_ (  
'qZW,],5  
cc,^6[OH@  
~Mx!
^  
)Q1"\\2j0  
DnC{YK  
D&od?3}E  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS (zgW%{V @  
~<O7$~  
色谱条件： JW{rA6?
 

k,85Y$`'  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm YUx.BZf7  
W?qmp|YD  
进样口：250℃，不分流进样 G~Hzec{#tg  
tasIDoo+!J  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 6eT5ktf  
OHeT,@(m h  
进样量：1μL !D@ZYK;  
U>cV|  
流速：1 mL/min &X |#R1 \  
P* w9,  
L
W[9  
L;*ljZ^c  
质谱条件： JBXrFC;  
=T(6#"  
接口温度：280℃ *1v[kWa?  
mS^tX i5hg  
电离方式：EI ?AJKBW^  
vRs,zL$W  
电离能量：70eV do*EKo  
r[4tPk  
溶剂延迟：7min Xc?&_\. +  
GT0Of~?f  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 nm6h%}xND<  
]ooIr
Y8  
7UdM  
4lKq{X 5<  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

AlAYiUw{  
|wH5sjT
 
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