[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： Z*,Nt6;e  
MA9Oi(L)K  
wLX:~
]<xl  
9WE_9$<V  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） |"7F`M96I  
j2\B(PA  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 (A@~]N,U/  
uU+R,P0  
流  速：1.0 mL/min Y`secUg  
SEf:u  
波  长：242 nm fgzkc"ReK  
*OoM[wEY  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） Etv!:\
\[  

>a6{y  
样  品：15种邻苯二甲酸酯 A"yiXc-N~\  
6bv~E.  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） @/(\YzQvp]  
ef !@|2  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A q:}Q5gzZ  
H K]-Q TEn  
柱  温：30℃ 6"OwrJB  
6\9 Zc-%  
-[h2fqu1  
Lo<-;;vQ  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） [Dzd39aKr  
PU& v{gn  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 J*!_kg)>J  
MAv-`8@|  
附件二 :kQ%Mj>
  
o(
gEyK  
L  `\>_  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS y;GwMi$KI  
}ldOxJSB?  
色谱条件： 4qYT
  
@5=2+ M  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm ;ndwVZ~,  
lTR/o  
进样口：250℃，不分流进样 eI^Q!b8n  
ozCH1V{p  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） 4WAs_~  
[YTOrN  
进样量：1μL lQ{o[axT
 
Qt~QJJN?oF  
流速：1 mL/min -#y^$$i0  
c]x'}Kc  
质谱条件： 37U2Tb!y'  

k@Q>(`  
接口温度：280℃ aj|gt  
O={ ?c1i:  
电离方式：EI xC5`|JW  
x9qoS)@CM  
电离能量：70eV hlO,mU  
Od?b(bE.]  
溶剂延迟：7min +]*hzWbe  
=K`]$Og}8  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 5n#@,V.O/  
M!Wjfq ^~  

qCUn. mI   序号 JZom#A. dt	ns}"[44C}l   保留时间/min o8h1	enw7?|(   中文名称 C0#"U f	n1;y"`gHk   英文缩写 \NTNB9>CO	2[e^mm&.    SIM离子 QmR E<i
qFwJ%(IQ   1 B 4m y	vb1Gz]~)>   8.265 %Tvy|L ,	}3xZ`v X[T   邻苯二甲酸二甲酯 +i1\], 7	)?D w)s5   DMP qL1d-nH	SeX:A)*ez%   163、77 oyt#CHX
U2@Mxw   2 @*}?4wU^k	5J0Sc   9.135 o 2Okc><z	oY$ L   邻苯二甲酸二乙酯 \'AS@L"Wj^	$k=5nJ   DEP +CF"Bm8@	.o!z:[IPY   149、177 V`;$Ua;y
tq^d1b(j4   3 5|^{t00T~	!"e~HZmr   10.888 FID4@--	-Z e{d $   邻苯二甲酸二异丁酯 NX5A{	G',*"mZQ[   DIBP ] |y]?7	,@b7N[h   149、223 RC']"jpW
s?2 DLXv}!   4 V>2mzc	G\U'_G >   11.637 3hrODts	P(Fd|).j$   邻苯二甲酸二丁酯 ?5oeyBA@	+C(v4@=nd   DBP N2~q \BqA	3/w) mY-o   149、223 Mw lhL?
,;2x.We   5 r95l. v	j3 W)5ZX   11.979 +Y^_1	]/p)XH Ko   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 K`9ph"(Z	!*?Ss   DMEP S'I{'jP5	9*@Kl`\   59、149、193 95,{40;X7
B@,L83   6 31n5n 	M.Fu>Xi   12.72 ?s<'3I{ F`	LDJ=<c!   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 E47U &xL	uLw$`ihw   BMPP p7"o:YSQ	|(e`V   149、251 kq[*q-:"x
xud   7 9HOdtpQOV	!s;+6Sy   13.044 "YlN_U	N#')Qz:P   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 Q"UQv<	ellj/u61bj   DEEP 0kI.dX)	8X`Gm!)   45、72 |IqQ%;H
gqaENU>   8 .~0A*a	%+iJpRK)7   13.41 ~Dw.3P:-	>3 Q%Yn   邻苯二甲酸二戊酯 ~S)o('	C8%Iol   DPP 2H8,&lY.p	=&~*r   149、237 jE.U~D)2YF
%N@454enH   9 X#<#7.	dOArXp`s   15.552 ~p{.4n2:	lL~T@+J~   邻苯二甲酸二己酯 5An|#^]	CRvUD.D   DHXP +Gi~VW.	|l(rR06#.]   104、149、76 @a) x^d
/w{DyHT   10 i Iu	1 ry:Z2   15.694 J]5sWs	iy Zs:4jkc   邻苯二甲酸丁基苄基酯 &yv%"BPV	K~OfC   BBP HJ]\VP9Zb	Oz!#);v   149、91 .P.TqT@)r
jftoqK- p   11 FW(y#Fmqs	2628 c`   17.153 tpj({ 	{;]:}nA   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DesvnV'{`	 (-DA%   DBEP +J30OT8	z|[#6X6tT   149、223 9B")/Hz_
\]=qGMwFs   12 U .~,Bwb	]YYjXg}%   17.81 N#'+p5|>	pe=Ou0   邻苯二甲酸二环己酯 w#g0nV"X6	[vb>5EhL!   DCHP "|w..%Wc	sL|lfc'bB   149、167 (lF;c <69
x"h0Fe?J   13 TtEc~m	r(N fVQF   18.056 {Buoo~	nB2AmS   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 > ^fY`x,	Q#P=t83   DEHP qp (ng8%c	yo*c& >   149、167 33x3zEUt6
H6?ZE   14 /=Bz[O	b2c% 0C   20.444 OD<0,r0f,	%98F>wl   邻苯二甲酸二正辛酯 dq~p]h~,H	d{+H|$L`   DNOP m&o}qzC'y	G3&ES3L   149、279 )k0e}
7r?O(0>   15 K Y/}jJW	on(P   22.98 Mp;t?C4	0$l=ME(   邻苯二甲酸二壬酯 g.aNITjP	WpC@nz?   DNP pVn6>\xa	,R0@`t1 p   57、149、71 Q_/{TE/sO5

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 A%-*M 'J  
rUc2'Ct  
附件三 N <zD<q  
Tv_KdOv8  
j_H9l,V  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 }xk85*V  
jdiH9]&U  
\}P3mS"e3  
<wfPbzs-V  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 6!sC  
]$oo1ssZ1  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 Xia4 I* *  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% <tXk\cOg  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% T1%_sq  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% [1nfSW  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% a> qB k})  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% "A\h+q-  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% VUnO&zV{  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% *lyy|3z  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% !xcLJ5^W  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% D=1:-aLP7  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% uaghB,i'n  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% $0 ]xeD0X  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% =D;n#n7  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% \.ukZqB3 0  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% eF-U 1ZJT  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% (;VlK#rnC  
*!oV?N[eA'  
&?g!)O  
   ba-4V8w  
:'`y}'  
|P0!dt7sQ  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 *'w?j)}A9g  
8;Zz25*  
qP{F
wn  
36e  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 T<oDLJA\  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% =
U7P\sw2  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% -w"$[XP  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% : &bJMzB  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% "%}24t%  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% !He_f-eZ  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% dd=ca0c7e  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% %2wr%*h  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% E
+ctiVL  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% _h+7KK  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% 7KesfH?  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% |LW5dtQ  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% Y'{}

L@"t  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% qt
(4?_J  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 9wlp AK  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27% *I!R0;HT  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 IkA~+6UY  
=eDC{/K  
86?~N  
7`)RBhGB  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 |m*l/@1  
e85E+S%  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 JP ;SO  
SymlirL  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。 P-yVc2YH  
'%TD#!a  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 mT|r:Yr:  
#BH]`A J  
KMl3`+i  
'*&V7:  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 |GPYbxzc  
Ia{t/IX\[  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， +OSSgY$  
mr]~(]B?r  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 PBL=P+  
J~ *>pp#U  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 s~5rP
:  
<p`
F/p-  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 l Yj$3  
Dj0D.}`~  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 s4=EyBI  
T/hz23nH  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 usi3z9P>n  
*d 4
A3|  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 :/>Zky8,k  

@Y*ONnl  
25h.u>6@{  
z^S=ji U++  
azz6_qk8  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： \MQ|(  
#A@*k}/+  
q
YZX, x  
0RN]_z$;H  
1、样品提取方法： E(*RtOC<W  
F]@vmzr  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 ^C^FxIA&  
iyAeR!`  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 "VR>nyG%  
u6Fm qK]Dj  
Y|FF ;[  
XFKe6:  
2、固相萃取方法： W{:^P0l  
>?>@&A/  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： CAg~K[  
EZnXS"z  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； 8p D$
/  
#C^)W/dP  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； R|&jvG=|  
>_XC  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； j-]`;&L  

lV%oIf[OB  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 ?iXN..6x  
[?>\]  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 wn-1fz<d  
/@ww"dmqU  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 q0C%">>1#  
-e4TqzRr  
`r'$l<(4WV  
9.%t9RM^  
补充说明： HLkI?mW<  

-UM|u_  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 ypgM&"eR  
;X^#$* =Q  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 Er;qs*f  
h w^ V  
$KQ q~|  
{ "M2V+ep  
0%Le*C'yk  
%W8iC%~  
&TY74w*  
Lu{/"&)  
 A yr,  
}ymW};W  
~h_ _Y>  
C 2nmSXV  
|,p"<a!+{w  
'bJGQ[c  
{ iX#  
B;eka[xU  
!nSa4U,$w<  
Q__CW5&'u  
>t3_]n1e  
IqYJ  
UON=7}=$&  
p qz~9y~
 
9VxM1-8Gs  
G$>?UQ[  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS WiytHuUF  
KQPu9f9  
色谱条件： TN0KS]^A3  
g,+e3f  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm 0VNLhM( LM  
63W;N7@  
进样口：250℃，不分流进样 Cb;6yE)!Z  
{zb'Z Yz  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） nONuw;K  
Z 8rD9 k$6  
进样量：1μL *J-pAN  
s%D%c;.|  
流速：1 mL/min eGEwXza 4  
9kD#'BxC  
x/s:/YN'  
` i[26Qb  
质谱条件： ;dzy5o3  
f+:iz'b#U  
接口温度：280℃ +-!3ruwSn  
&E`Nu (e  
电离方式：EI /gu VA  
\6 \bD<  
电离能量：70eV  hE:~~ox  
`v?hL
~  
溶剂延迟：7min F.TIdkvp  
z 4}"oQk:r  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 Y5E0n(Z  
Z(:\Vj"  
Gh_5$@ hF  
bHTf{=  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

\R&ZWJKh  
(|W6p%(  
k;um Lyz  
W[!bF'-10