[重金属/有害元素]【分享】不同基质食品中邻苯二甲酸酯检测的系统解决方案 [复制链接]

附件一： )b nGZ8h99  
`{YOl\d_  
G--vwvL  
MMa`}wSs  
色谱柱：Agela Venusil XBP C18-L ，4.6×250mm，5µm，150Å（订货号：VX952505-L） 53uptQ{  
umPn w  
流动相：A：水，B：甲醇：乙腈=50:50 u*l>)_HD  
>%6j-:S  
流  速：1.0 mL/min rMG[,:
V  
v0WB.`rO  
波  长：242 nm ~jKIuO/  
%zc.b  
进样量：5 µL（100ppm），50µL（10ppm） FBP #_"z  
u@Gum|_=N
 
样  品：15种邻苯二甲酸酯 >*/ |tL  
ly!3
~W  
浓  度：100 ppm（正己烷），10 ppm（40%流动相A） e{2Za   
xg%{p``  
溶  剂：正己烷 /40%流动相A $m>( kd1  
sk5=$My  
柱  温：30℃ :;#^gvH  
GXx'"SK9  
o}36bi{  
N<(rP1)`v  
（邻苯二甲酸二甲酯DMP，邻苯二甲酸二乙酯DEP，邻苯二甲酸二正丁酯DBP，邻苯二甲酸二辛酯DEHP，邻苯二甲酸丁苄酯BBP，邻苯二甲酸二（2-乙基己基）酯DEHP，邻苯二甲酸二（2-甲氧基）乙酯DMEP，邻苯二甲酸二丁氧基乙酯DBEP，邻苯二甲酸二戊酯DPP，邻苯二甲酸二（4-甲基-2-戊基）酯BMPP，邻苯二甲酸二乙氧基乙基酯DEEP，邻苯二甲酸二环己酯DCHP，邻苯二甲酸二异丁酯DIBP，邻苯二甲酸二己酯DNP，邻苯二甲酸二壬酯DINP） LfnQcI$kO  
HU +27 1A8  
结论：Agela Venusil XBP C18-L色谱柱能够较好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，分离度较好，完全满足LC检测15种邻苯二甲酸酯类物质的含量。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 fm%4ab30T  
mV7_O//  
附件二 ]w)
uo4<^J  
qyE*?73W  
`ER#S_}  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS B 4e}%  
) \ cnz  
色谱条件： >Y3zO2Cr  
%&O'>L  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm }q /[\3  
CwEb ?  
进样口：250℃，不分流进样 gcM(K.n  
v<} $d.&*  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） H
Ba6Y&)<  
k"`^vV[{F  
进样量：1μL 2Q/V D,yU  
Im`R2_(]  
流速：1 mL/min y*sqnzgF  
m`3gNox  
质谱条件： -uK@2}NZ  
u7u1lx>S  
接口温度：280℃ B{_-k  
hniT
MO  
电离方式：EI 
!
:dhK  
~\+mo  
电离能量：70eV W QyMM@#  
/%)x!dmy  
溶剂延迟：7min I* JSb9r  
oO,"B8a  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 {cYbM[}U"  
Q%RI;;YyA  

cX-)]D   序号 ,HO@bCK	GI*2*m!u   保留时间/min [kg*BaG:	'4d +!%2t   中文名称 umj5M5oe3	B6a    英文缩写 E?P:!V=_	Q"an6ht|   SIM离子 *+'l|VaVq\
l vZ:Aw r   1 ^c]lEo	'gwh:8Xc   8.265 [ 6t!}q	7Cj6Kw5k   邻苯二甲酸二甲酯 6*H F`@(	\a\ApD   DMP x?B8b-*	BAS3&fA   163、77 UN*XLHio
u?n{r   2 !EQMTF=(	U$(AZ|0   9.135 6 -@n$5W0	[8QE}TFic   邻苯二甲酸二乙酯 %A<|@OSdOa	G}b LWA   DEP |F 18j9	7BhRt8FSD+   149、177 E|Lv_4lb=
_ADK8a6%)   3 {s=$.Kg	L@ {5:#-   10.888 zF[>K4	v5 yOh5   邻苯二甲酸二异丁酯 5!PU+9Kh	{]}}rx'|P   DIBP >_y>["u6J#	v?\bvg\E   149、223 j/R
}>w;(R   4 @Kd lX>i	yp=2nU"o   11.637 ,OLN%2Sq	a"{tqNc   邻苯二甲酸二丁酯 3H%o TgWk	I hvL2zB   DBP Mp~E$f	kg$<^:uX   149、223 '(kySf[
{O 6f1LuH   5 /0 ,#c2aq	HzM^Zn57%   11.979 'Z-jj2t}	#Vanw!   邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 f;6a4<bz	S*:b\{[f>   DMEP /r|^Dc Nx	u|\Lb2Kb:   59、149、193 +GWeu0b(~
JLRw`V,o7   6 "!gd)^<e	v[ru }/4   12.72 g!<@6\RB	JPgV7+{b[   邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 :t]YPt 	=_8   BMPP {y'c*NS	}(dhXOf\q   149、251 &-9wUZ
0,nDyTS^   7 eQno]$-\	dV8mI,h   13.044 1A">tgA1	`Rfhxz I   邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 .wx; !9	x\!Qe\lE   DEEP %K /=7	Q! ]   45、72 |~W!Y\l-
rFSLTbTf   8 2IqsBK`	_UYt   13.41 q/?#+d	KDuM;   邻苯二甲酸二戊酯 NHUx-IqOX	]&qujH^Dd*   DPP sbrU;X_S	q*\#HC   149、237 $&='&q
x,STt{I=   9 T c4N\Cy	M&~3fRb4   15.552 lKrD.iYt8	f:GZb?Wyd   邻苯二甲酸二己酯 i))S%!/r~	:O{`!&[>L   DHXP +n%uIv	D:U:( pg   104、149、76 @ 3K)VjY7
wLPL9   10 ><viJ$i	+#}I ^N   15.694 G)';ucs:,	^1BQejD   邻苯二甲酸丁基苄基酯 j8$ *$|	<- Q=h?D   BBP + O=wKsGD	~z$vF   149、91 "GEJ9_a[
\]e"#"v}}_   11 \C5YVl#	jw gXq(   17.153 !s06uh	INOw0E[   邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 w,cfSF;=tC	w7cciD|   DBEP (|I: d!>:U	XZYpU\K   149、223 uV!Ax*'
5:6as^i:b   12 ,4zwd@&O	T$5u+4>"   17.81 Mo\LFxx>4{	I&?(=i)N   邻苯二甲酸二环己酯 4HQP,	!'o5X]s   DCHP r!N)pt<g	&4Q(>"i L4   149、167 Fk@A;22N
D's'LspQ   13 weg u1Ny	knrR%e;   18.056 ++n"` ]o,	NWWa g}   邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 ?muI8b	{U1 j@pKm   DEHP /HbxY	ngJi;9X8*t   149、167 0`.3`Mk 
8 #fzL7   14 UmYReF<<_	Seh[".l   20.444 VP[ -BK[	l^aG"")TH.   邻苯二甲酸二正辛酯 fq(r,h=|	ReE-I/n8f   DNOP Gh}k9-L	"Y0:Y?Vz"   149、279 VeK^hz R^Z
vJ5`:4n"   15 %"tLs%"7=P	BzBij^h   22.98 @V{s'V 	tYV%izE   邻苯二甲酸二壬酯 :N03$Tvl	bB^% O^:   DNP <[{Ty+	(2J_Y*N~>   57、149、71 ;%"YA

结论：Agela DA-5ms气相色谱柱能够很好的分离15种邻苯二甲酸酯类物质，完全满足15种邻苯二甲酸酯类物质的几十ppb级含量的定量测定。由于条件所限，笔者手头上只有15种邻苯二甲酸酯物质，所做实验，供大家参考。 "v4;m\g&:  
YMLo~j4J  
附件三 i{PRj kR  
|//cA
2@.  
& PrV+Lv  
牛奶中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 y.5mYQA4=[  
#wbaRx@rc  
t*y4)I !gR  
gE(QVbh(  
按正文第2项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表1、某种牛奶中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为50μg/L)的回收率结果列表 C,z7f"  
6'395x_.\  
序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 "cRc~4%K  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 87.82% #*#4vMk<  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 72.31% PTIC2  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 81.97% L7_Mg{  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 77.33% -N^}1^gA  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 83.87% au}rS0)+  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 83.83% i;*c|ma1>  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 109.08% =#n05*^  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 86.36% :Y(Yk5  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 84.67% Bo.x  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 98.33% #nX0xV5=  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 101.30% fo&q/;l\  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 92.47% a-x8LfcbF  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 132.32% [=u8$5/a  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 89.73% t= "EbPE  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 70.10% -aLBj?N c[  
f'TjR#w  
pK1P-!c  
   *:\-:*  
,AGK O,
w  
H.XD8qi3W  
某植物油中15种邻苯二甲酸酯的添加回收率 $%`OJf*k  
idvEE
6I@  
bPC {4l  
/],:sS7  
按正文第4.1项方法进行某种牛奶的添加回收率实验，得到的数据如下：表2、某植物油中添加15种邻苯二甲酸酯(在样品中的浓度为500μg/L)的回收率结果列表序号 保留时间/min 中文名称 英文缩写 回收率 hUSr1jlA  
1 8.337 邻苯二甲酸二甲酯 DMP 149.97% :IV4]`  
2 9.214 邻苯二甲酸二乙酯 DEP 93.49% dE_BV=H{  
3 10.996 邻苯二甲酸二异丁酯 DIBP 125.70% 7.CzS  
4 11.759 邻苯二甲酸二丁酯 DBP 136.89% :35J<oG  
5 12.11 邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯 DMEP 90.84% 3Fo,F  
6 12.864 邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯 BMPP 82.29% A;1<P5lo  
7 13.201 邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯 DEEP 106.38% /8q7pwV  
8 13.576 邻苯二甲酸二戊酯 DPP 88.14% {G&K_~Vj  
9 15.757 邻苯二甲酸二己酯 DHXP 75.32% j^llO1i/  
10 15.923 邻苯二甲酸丁基苄基酯 BBP 89.56% BqvOi ~l  
11 17.377 邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯 DBEP 105.05% L:%ek3SOz  
12 18.041 邻苯二甲酸二环己酯 DCHP 72.94% ;dRTr *  
13 18.28 邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯 DEHP 124.27% D2E~c? V  
14 20.718 邻苯二甲酸二正辛酯 DNOP 78.19% 8'Xpx+v  
15 23.303 邻苯二甲酸二壬酯 DNP 75.27%  h#^I
T  

关于油脂中邻苯二甲酸酯的检测的系统解决方案的补充说明 oIoJBn  
l:j9lBS  
^tc@bsUF  
[FF%HRce,.  
1、  关于Cleanert MAS-PAE（c）的注意事项 [7|}h/  
(yc$W9  
Cleanert MAS-PAE（c）采用多种吸附材料，可以去除蛋白质、色素、油脂（在样品中含量少）以及水等，只剩下邻苯二甲酸酯被以乙腈为主的溶剂提取出来，然后可以经过过滤直接进样检测。方法方便快捷，十分适合于快速检测。 Lkqu"V  
f7d)  
随方法可以提供12mL和40mL透明玻璃瓶作为玻璃离心管，分别可配套10mL和50mL离心转子。
|=N8X  
A){kitx-i)  
涡旋时一定要盖上玻璃离心管（上述玻璃瓶）的盖子，盖子的内壁是PTFE材料，不含增塑剂。 1tQZyHc42;  
I4qzdD  
RL.%o?<&?  
jpm}EOq<%  
2、  关于Cleanert PAE（c）方法原理的说明 t8]u#bx"?  
*v l_3S5_  
采用正己烷溶解或提取邻苯二甲酸酯，同时也会溶解油脂及少量其他杂质。一般来说， dL6sb;7R  
o=;.RYi  
油脂中含有甘油三酯、甘油二酯、甘油一酯、脂肪酸，以及甘油三酯氧化产物（多见于经过热加工的含有产品）。用正己烷提取，不仅利用了其优良的溶解脂类的性质，保证对邻苯二甲酸酯的充分提取，也避免了采用乙腈这样相对极性较强的溶剂进行提取时，引入更多的极性杂质和溶剂转换的繁琐。 -uy}]s5Qu  
MSR IG-  
笔者认为，邻苯二甲酸酯的化学性质十分类似于油脂，也是酯类化合物，其极性介于甘油三酯和其他成分之间，而尤其是邻苯二甲酸壬酯和甘油三酯的极性较为接近，给分离带来难题。同时，邻苯二甲酸酯的分子量又和甘油一酯、脂肪酸等接近，采用传统GPC处理，不仅所需时间长，同时也不能完全将邻苯二甲酸酯和甘油一酯、脂肪酸等分开。 Zu&trxnNf[  
LEyn1d  
Cleanert PAE柱含有极性吸附填料和独特的GPC材料，利用其极性吸附的原理，可以从正己烷及乙酸乙酯：正己烷（1:1，v/v）的溶剂中去除极性杂质，如甘油一酯和脂肪酸等；同时独特的GPC材料可以使得大部分的甘油三酯在淋洗的时候即被正己烷淋洗下来。从而，可以去除大部分油脂成分。最终的洗脱液被吹干后，仅会剩下少量的甘油三酯。 n9cWvy&f  
clG3t eC  
需要说明的是，因为邻苯二甲酸酯的各种性质和油脂的成分过于接近，而且要检测的物质有16种之多，其性质分布范围宽，为了要保证每一种物质的回收率，很难将它们和油脂基质的多种组分彻底分开。 N|1J@"H  
8Q#&=]W$  
不过，最后可以采用与甘油三酯不互溶的乙腈来反萃取，可以既保证邻苯二甲酸酯的回收率，又能去除剩余的大部分甘油三酯。反萃取的时候，采用超声会提高邻苯二甲酸酯的回收率。 P4R.~J ;8  
iLv"ZqGrw  
    而Cleanert PAEc中增加了吸附色素及其他复杂成分的炭材料，可以保证更加彻底地去除杂质。 =k3QymA  

KpK'?WhX7^  
ME7JU|@
Z  
v8WoV*  
yX)2 hj:s  
经过一段时间，笔者检测了多种实际食品样品中的邻苯二甲酸酯类化合物，发现最为困难的是含有油脂的样品的样品前处理。在之前的系统解决方案的基础上，将最近的心得总结如下： UV:_5"-  
E.BMm/W
H  
&K\di*kN  
p2cKtk+  
1、样品提取方法： ^h' wZ7-\  
{0[qERj"z  
1.1纯油脂样品：用万分之一天平称取0.1g样品，置于玻璃离心管中，然后加入3mL乙腈，涡旋2min，超声2min，以4000rpm离心2min，将上清液转移至一玻璃管中，在40℃下以氮气吹干，加入1mL正己烷，轻轻振荡摇匀，作为待净化液。 !e%#Zb MIo  
38f9jF%7j  
1.2其他含油脂样品：考虑到方法的普适性，参考GBT21911-2008，称取0.5g混合均匀的含油脂的样品，加5mL正己烷涡旋2min，（若样品中含有水，可在此时加入适量的无水硫酸钠），超声2min，以4000rpm离心2min，取上清液，作为待净化液。 gsZCWT
 
O
k,hm.|  
ZOU$do> O  
hd '!f  
2、固相萃取方法： bhFzu[B  
VpD9!;S  
2.1若样品中不含色素等杂质，可采用Cleanert PAE柱。具体方法如下： @(ev``L5 g  
\.}* s]6  
（1）活化：将Cleanert PAE固相萃取柱用5mL正己烷活化； m'a3}vRV(  
/#.6IV(  
（2）上样：将待净化液全部加到固相萃取柱中； 6Siz
9  
eH75:`  
（3）淋洗：用10mL 1%乙酸乙酯的正己烷溶液淋洗固相萃取柱； Dd:Qotu  
(?$ }Vp  
（4）洗脱：用5mL 50%乙酸乙酯的正己烷溶液洗脱固相萃取柱。 a2sN$k  
@m#7E4+  
收集洗脱液，在40℃下以氮气吹干，加入1mL乙腈，涡旋1min，超声1min，以4000rpm离心2min，取上清液进GC/MS检测。 
^e)KEkh  
|wWBV{^  
2.2若样品中含有色素等杂质，可采用Cleanert PAE-C柱。具体操作方法同2、1。 !m:SRNPg  
!,|yrB&`S  
_0ep[r  
qm]k (/w  
补充说明： ~ /]u72?rP  
n:'Mpux  
Cleanert MAS-PAE管和Cleanert MAS-PAEc管作为一种快速检测方法，被推荐用于不含油脂或含油脂较少的样品中，如牛奶、酸奶等。 epR7p^`7  
sBB>O@4  
本方案中Cleanert PAE和Cleanert PAE-C柱的固相萃取方法，理论上可适用于所有样品。相比之前的方案，增加了淋洗强度，有助于尽可能去除极性比邻苯二甲酸酯类物质小的甘油三酯（在油脂中的含量大于95%），从而提高了净化效果。 a%V6RyT4qW  
"0pu_  
&Z#g/Hc  
0%#ZupN  
-Uh3A\#(  
D!^&*Ia?2  
8{^zXJi]m  
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% 8u97f W  
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5!-+5TJI  
=^ZDP1h/}  
7C / ^Gw  
7up~8e$_  
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MZd
?cS  
9z#z9|hj)3  
@6"+x  
.+) AeGh  
6c6w w"  
7u`:e,'  
.Q W@rV:T  
仪器：Agilent 7890/5975 GC/MS O03N$Jq A  
ku)/ 8Z`$  
色谱条件： Y41b8.|P+  
$sFqMy  
色谱柱：DA-5MS 30m*0.25mm*0.25μm .npD<*  
u p zBd]  
进样口：250℃，不分流进样 :z`L)  
ky{@*fg.  
程序升温：50℃（1min）20℃/min  220℃（1min）5℃/min 280℃（4min） yujv^2/  
io
w"X6_l_  
进样量：1μL nTE\EZ+=2  
4|hfzCjMI  
流速：1 mL/min &<Fw  
]V,#>'  
L;U?
s2&Y  
@Ll^ze&HI  
质谱条件： o;v
_vCLO  
J@IF='{  
接口温度：280℃ .G>6_n 3  
#"TL*p  
电离方式：EI 2SYV2  
qbo W<W<H1  
电离能量：70eV TYedem<$  
GTW
5f  
溶剂延迟：7min FD^s5>"Y+  
T0BM:ofx  
监测方式：SIM模式，监测离子见下表 6}q# c  
P26YJMJ'  
nNcmL/
(  
k&3'[&$I*,  

序号	保留时间/min	中文名称	英文缩写	定量离子	辅助定量离子
1	8.351	邻苯二甲酸二甲酯	DMP	163	77
2	9.228	邻苯二甲酸二乙酯	DEP	149	177
3	11.018	邻苯二甲酸二异丁酯	DIBP	149	223
4	11.788	邻苯二甲酸二丁酯	DBP	149	223
5	12.135	邻苯二甲酸二(2-甲氧基)乙酯	DMEP	59	149、193
6	12.857	邻苯二甲酸二(4-甲基-2-戊基)酯	BMPP	149	251
7	13.231	邻苯二甲酸二(2-乙氧基)乙酯	DEEP	45	72
8	13.605	邻苯二甲酸二戊酯	DPP	149	237
9	15.805	邻苯二甲酸二己酯	DHXP	149	104、76
10	15.97	邻苯二甲酸丁基苄基酯	BBP	149	91
11	17.436	邻苯二甲酸二(2-丁氧基)乙酯	DBEP	149	223
12	18.108	邻苯二甲酸二环己酯	DCHP	149	167
13	18.345	邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯	DEHP	149	167
14	18.511	邻苯二甲酸二苯酯	—	225	77
15	20.785	邻苯二甲酸二正辛酯	DNOP	149	279
16	23.379	邻苯二甲酸二壬酯	DNP	149	57、71

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